一种用于罗非鱼IgM检测的酶标抗体及制备方法技术

本发明专利技术涉及一种用于罗非鱼IgM检测的酶标抗体的制备方法，属于生物技术领域，采集罗非鱼血清，用Protein G亲和纯化得到罗非鱼IgM抗体，再将罗非鱼IgM抗体免疫新西兰大白兔，得到兔抗罗非鱼IgG抗体，通过辣根过氧化酶对兔抗罗非鱼IgG抗体进行标记得到酶标二抗。相对于现有技术，本发明专利技术的有益效果：本发明专利技术采用亲和层析的方法，制备高浓度的兔抗罗非鱼IgM的多克隆抗体，纯化后进行辣根过氧化物酶标记和标记后抗体浓度测定，效价大于1：128000，通过适当稀释用于免疫反应中，用于检测罗非鱼IgM，有助于罗非鱼链球菌病的规模化防控。

Enzyme labelled antibody for IgM detection of tilapia and its preparation method

The invention relates to a method for the preparation of tilapia IgM detection of enzyme labeled antibody, which belongs to the field of biotechnology, acquisition of tilapia serum, purification of tilapia IgM antibody obtained by Protein G affinity, then New Zealand rabbits were immunized tilapia IgM antibody, Rabbit anti IgG antibody obtained by tilapia, horseradish peroxidase on rabbit anti tilapia IgG the enzyme labeled antibody markers obtained two resistant. Compared with the prior art, the invention has the beneficial effect of the invention by affinity chromatography, polyclonal antibody preparation of high concentration of Rabbit anti IgM antibody after tilapia, determination of the concentration of purified horseradish peroxidase labeled and unlabeled, titer of more than 1:128000, by proper dilution for immune reaction, for the detection of tilapia IgM scale prevention helps tilapia Streptococcus disease.

【技术实现步骤摘要】
一种用于罗非鱼IgM检测的酶标抗体及制备方法
本专利技术涉及一种用于罗非鱼IgM检测的酶标抗体及制备方法，属于生物

技术介绍
罗非鱼(Tilapia)有“白色三文鱼”之称，具有蛋白质含量高，生长快，抗病能力强，对环境污染少等特点，是联合国推荐养殖的优质水产养殖品种。我国于1978年引入尼罗罗非鱼种鱼，1983年中国水产科学院无锡淡水渔业研究中心夏德全研究组又引入奥利亚罗非鱼种鱼，经多年的选育，逐渐育成体壮种纯的优良品系。经过三十多年的发展，我国已成为罗非鱼养殖产量最大的国家，年产量达150万吨，占全世界总产量的50％，产品常年出口美国、欧盟和俄罗斯等国家。但自2009年以来，我国罗非鱼主养区每年夏季持续爆发罗非鱼链球菌病，累计死亡率可达95％，年损失约10-15亿元，造成了巨大的经济损失，该病严重危害罗非鱼养殖产业的发展，因此对罗非鱼链球菌病的防控非常必要。有颌鱼类产生的抗体类型主要是IgM，高纯度罗非鱼IgM及其酶标抗体的制备是研究罗非鱼免疫应答、免疫检测方法的基础，为罗非鱼的疫病防控提供技术支持，但市场上尚无商品化的抗罗非鱼IgM的标记二抗出售。专利
技术实现思路
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【技术保护点】
一种用于罗非鱼IgM检测的酶标抗体，其特征在于，将兔抗罗非鱼IgG抗体用辣根过氧化酶标记，作为酶标二抗。

【技术特征摘要】
1.一种用于罗非鱼IgM检测的酶标抗体，其特征在于，将兔抗罗非鱼IgG抗体用辣根过氧化酶标记，作为酶标二抗。2.一种如权利要求1所述的用于罗非鱼IgM检测的酶标抗体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：采集罗非鱼血清，用ProteinG亲和纯化得到罗非鱼IgM抗体，再将罗非鱼IgM抗体免疫新西兰大白兔，得到兔抗罗非鱼IgG抗体，通过辣根过氧化酶对兔抗罗非鱼IgG抗体进行标记。3.根据权利要求2所述的于罗非鱼IgM检测的酶标抗体的制备方法，其特征在于，罗非鱼IgM抗体的制备过程为：用ProteinG琼脂糖亲和介质填装层析柱，将断尾取血法所得罗非鱼血清与PBS缓冲液等量混合后缓慢上样，待抗原抗体充分结合后用甘氨酸洗脱缓冲液洗脱，即得到所需的罗非鱼IgM抗体，立即在PBS缓冲液中进行4℃透析过夜，收集透析袋内液体，得到纯化的罗非鱼IgM抗体。4.根据权利要求3所述的于罗非鱼IgM检测的酶标抗体的制备方法，其特征在于，兔抗罗非鱼IgG抗体的制备过程为：将纯化的罗非鱼IgM抗体通过BCA蛋白浓度测定试剂盒测定，免疫2-2.5KG的新西兰白兔，选择背部多点注射法，皮下免疫400ug/次，每2周免疫一次，每只白兔一共免疫4次；采血检测，通过间接ELISA方法确定抗血清的效价，待效价大于1:50000进行最终的心脏采血、分离血清的操作。5.根据权利要求4所述的于罗非鱼IgM检测的酶标抗体的制备方法，其特征在于，得到兔抗罗非鱼Ig...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘广锦，潘子豪，高婷婷，马家乐，姚火春，
申请(专利权)人：南京农业大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32