一种基因敲除载体以及制备CD163基因敲除猪成纤维细胞的方法技术

本发明专利技术提供了一种基因敲除载体以及制备CD163基因敲除猪成纤维细胞的方法，所述基因敲除载体包括CRISPR/Cas9载体骨架以及连接到该载体骨架上的一段DNA片段，所述DNA片段的序列如SEQ ID NO：2所示。通过该载体可以简单、快速、高效地敲除猪CD163基因，获得纯合敲除CD163基因的猪或猪成纤维细胞。

【技术实现步骤摘要】
一种基因敲除载体以及制备CD163基因敲除猪成纤维细胞的方法
本专利技术涉及分子生物学领域，具体而言，涉及一种基因敲除载体以及制备CD163基因敲除猪成纤维细胞的方法。
技术介绍
猪生殖与呼吸综合征(porcinereproductiveandrespiratorysyndrome，PRRS)是由猪生殖与呼吸综合征病毒(porcinereproductiveandrespiratorysyndromevirus，PRRSV)引起的以猪厌食、发热，妊娠母猪早产、晚期流产、死胎、弱胎和木乃伊胎等繁殖障碍及仔猪和生长猪的呼吸系统疾病和高度死亡性为主要特征的一种高度接触性传染病。因该病在临床上表现为耳部皮肤紫绀，所以又被称为“蓝耳病”。该病于1987年首次在美国被发现，紧接着于1989年在欧洲爆发，1995年底在中国大陆首次爆发，猪群的感染率高达90％，给养猪业带来了极大的经济损失，已成为世界范围内一种严重危害养猪业的传染病。PRRSV在体内主要感染分化良好的猪肺泡巨噬细胞(porcinealveolarmacrophages，PAM)。PRRSV侵染靶细胞的先决条件是与宿主细胞吸附，而宿主本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种基因敲除载体，其特征在于，所述基因敲除载体包括CRISPR/Cas9载体骨架以及连接到该载体骨架上的一段DNA片段，所述DNA片段的序列如SEQ ID NO：2所示。

【技术特征摘要】
1.一种基因敲除载体，其特征在于，所述基因敲除载体包括CRISPR/Cas9载体骨架以及连接到该载体骨架上的一段DNA片段，所述DNA片段的序列如SEQIDNO：2所示。2.根据权利要求1所述的基因敲除载体，其特征在于，所述CRISPR/Cas9载体骨架为pX330、pX260、pX334、pX335、pX458、pX459、pX461、pX462、pX551和pX552，优选地，所述载体骨架为pX330。3.一种制备CD163基因敲除猪成纤维细胞的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：(1)、构建权利要求1或2所述基因敲除载体；(2)、将所述基因敲除载体转入猪成纤维细胞中，并通过筛选和鉴定获得CD163基因纯合敲除的单克隆细胞系，即得所述CD163基因敲除猪成纤维细胞。4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)具体包括：合成如SEQIDNO：3-4所示寡核苷酸单链，退火形成双链，与经过酶切的质粒连接，筛选获得阳性克隆即得所述基因敲除载体。5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)具体包括：将4～6μg基因敲除载体通过电转染的方式转入1×106～2×106个猪成纤维细胞，通过有限稀释法筛选单克隆细胞系，并鉴定所述单克隆...

【专利技术属性】
技术研发人员：牟玉莲，刘志国，李巨浪，魏迎辉，徐奎，李奎，
申请(专利权)人：中国农业科学院北京畜牧兽医研究所，
类型：发明
国别省市：北京,11