一种外源蛋白安全性的快速评价方法技术

本发明专利技术公开了一种外源蛋白安全性的快速评价方法。本发明专利技术通过将编码外源蛋白的基因克隆入pPICZb载体，得到外源蛋白表达重组载体转化毕赤酵母，得到表达外源蛋白的毕赤酵母；将表达外源蛋白的毕赤酵母每天灌胃啮齿类动物，连续90天；日常观察啮齿类动物的健康状态；90天末处理啮齿类动物，取肝、脾、心和肾组织，石蜡切片；免疫组化鉴定外源蛋白在组织器官中的分布以及病理切片分析各组各器官的炎症反应情况；依据炎症反应情况，判断该外源蛋白的安全性。本发明专利技术具有如下优点：高通量；可放大外源蛋白暴露浓度，缩短评估周期；可研究剂量与安全性关系；可研究蛋白活性与安全性关系。

【技术实现步骤摘要】
一种外源蛋白安全性的快速评价方法
本专利技术属于生物
，特别涉及一种外源蛋白安全性的快速评价方法。
技术介绍
基因(transgenicmodified，GM)作物是农业领域的一项重要科技成果，对于粮食实现增产有重要作用。中国在棉花、水稻、玉米等作物的转基因研究方面已形成了自己的特色和优势。然而，由于目前转基因成份诱发的非预期效应不明确，安全评价结果争议大。目前全球商业化种植的转基因作物常见性状之一是抗除草剂，抗除草剂基因中以来源于土壤农杆菌(Agrobacteriumsp.)CP4株系的epsps(5-enolpyruvylshikimate-3-phosphatesynthesis，cp4-epsps)合成酶基因的使用最为广泛，该酶对除草剂草甘膦有高抗性。随着基因工程技术的发展，也衍生出多种修饰的cp4-epsps转基因作物。由于该基因主要用于大豆玉米等食用性作物，伴随产生的食品安全问题也引起人们极大的关注。目前该转基因作物食用性安全评价方法是由欧洲食品安全机构(EuropeanFoodSafetyAuthority,EFSA)提出，必须对啮齿类动物进行为期90天的喂食观察本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种外源蛋白安全性的快速评价方法，其特征在于包括如下步骤：(1)将编码外源蛋白的基因克隆入pPICZb载体，得到外源蛋白表达重组载体；(2)将外源蛋白表达重组载体转化毕赤酵母，筛选，鉴定，得到表达外源蛋白的毕赤酵母；(3)将表达外源蛋白的毕赤酵母每天灌胃啮齿类动物，连续90天；同时设置空白对照组和阴性对照组；空白对照组为正常饮食+生理盐水，阴性对照组I为正常饮食+毕赤酵母宿主菌，阴性对照组II为正常饮食+转化pPICZb载体的毕赤酵母菌，实验组即为正常饮食+表达外源蛋白的毕赤酵母；(4)日常观察啮齿类动物的健康状态；(5)90天末处理啮齿类动物，取肝、脾、心和肾组织，石蜡切片；(6)免疫组化鉴...

【技术特征摘要】
1.一种外源蛋白安全性的快速评价方法，其特征在于包括如下步骤：(1)将编码外源蛋白的基因克隆入pPICZb载体，得到外源蛋白表达重组载体；(2)将外源蛋白表达重组载体转化毕赤酵母，筛选，鉴定，得到表达外源蛋白的毕赤酵母；(3)将表达外源蛋白的毕赤酵母每天灌胃啮齿类动物，连续90天；同时设置空白对照组和阴性对照组；空白对照组为正常饮食+生理盐水，阴性对照组I为正常饮食+毕赤酵母宿主菌，阴性对照组II为正常饮食+转化pPICZb载体的毕赤酵母菌，实验组即为正常饮食+表达外源蛋白的毕赤酵母；(4)日常观察啮齿类动物的健康状态；(5)90天末处理啮齿类动物，取肝、脾、心和肾组织，石蜡切片；(6)免疫组化鉴定外源蛋白在组织器官中的分布；(7)病理切片分析各组各器官的炎症反应情况；(8)依据炎症反应情况，判断该外源蛋白的安全性。2.根据权利要求1所述的外源蛋白安全性的快速评价方法，其特征在于：所述的外源蛋白为5-烯醇式丙酮酰莽草酸-3-磷酸合酶和来源于苏云金芽孢杆菌所产的内源性晶体蛋白Cry1Ab中...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵慧，江晓曦，
申请(专利权)人：华南农业大学，
类型：发明
国别省市：广东,44