病毒复制受转录抑制型Tet‑on系统调控的条件复制腺病毒载体及应用技术方案

本发明专利技术公开了一种病毒复制受TetR‑KRAB介导的转录抑制型Tet‑on系统调控的条件复制型腺病毒载体，腺病毒E1区包含元件及连接顺序为5’‑CMV启动子、TetR‑KRAB基因、含四环素反应元件的启动子TRE3G‑E1b Pro、EcoRⅠ酶切位点、缺失E1BΔ55KD蛋白的腺病毒E1A‑E1B 19KD基因序列、酶切位点SpeⅠ、mRNA转录终止信号SV40polyA‑3’；CMV启动子表达转录抑制因子TetR‑KRAB；两个酶切位点EcoRⅠ和SpeⅠ中插入的基因序列为腺病毒E1A翻译起始位点至腺病毒E1B 19KD蛋白终止密码子基因片段，包含四环素反应元件的启动子TRE3G‑E1b Pro表达腺病毒E1A基因，腺病毒E1B 19KD基因则由其自身的启动子表达，经过包装获得的腺病毒命名为Ad5‑CMV‑TetR‑KRAB‑TRE3G‑E1b Pro‑Δ55KD。经申请人的试验表明，该病毒装载于间充质干细胞内可以进行肿瘤治疗研究中的应用。

Virus replication by the transcription inhibitory Tet on system regulation of conditionally replicating adenovirus vector and its application

The invention discloses a virus replication transcription by TetR mediated suppression of KRAB type Tet on system regulation of conditionally replicating adenovirus vector, adenovirus E1 contains elements and the connection order of 5 'CMV promoter, KRAB gene, TetR tetracycline response element promoter TRE3G E1b Pro, EcoR enzyme, deletion of E1B Delta 55KD protein of adenovirus E1A E1B 19KD gene sequence, restriction sites of Spe I, mRNA transcription termination signal SV40polyA 3'; CMV promoter transcription inhibitory factor TetR KRAB; two enzyme gene sequence was inserted into the sites of EcoR I and Spe I for adenovirus E1A translation initiation sites to adenovirus E1B protein 19KD termination codon gene promoter, TRE3G E1b Pro contains a tetracycline responsive element expression of adenovirus E1A gene, adenovirus E1B 19KD gene from its own promoter The expression obtained after packaging adenovirus named Ad5 CMV TetR KRAB TRE3G E1b Pro Delta 55KD. The test showed that the virus was loaded into mesenchymal stem cells and could be used in the study of tumor therapy.

【技术实现步骤摘要】
病毒复制受转录抑制型Tet-on系统调控的条件复制腺病毒载体及应用
本专利技术涉及生命科学领域的腺病毒载体及其应用，具体涉及一种病毒复制受TetR-KRAB介导的转录抑制型Tet-on系统调控的条件复制腺病毒载体及其应用。
技术介绍
肿瘤是威胁人类健康的最主要疾病。尽管传统治疗手段应用广泛，但因为缺乏肿瘤特异性，常会对正常细胞造成较大的毒副作用。条件复制型腺病毒(CRAd)，是在腺病毒的基础上发展而来的一类用于肿瘤基因治疗的新型病毒，该病毒可在肿瘤细胞内特异性扩增，但在正常细胞中不复制，或者复制很弱，所以也称为溶瘤腺病毒(oncolyticAdenovirus)。目前CRAd主要分三类：(1)Ad5E1B区55KD缺失的Ad5E1BΔ55KD(如ONYX-015)，它可以在p53功能异常的肿瘤细胞内复制，而在正常细胞内不能复制。(2)Ad5E1ACR2区的24bp(919-943)碱基序列缺失的Ad5D24，其可在Rb功能异常的肿瘤细胞内大量复制。(3)利用肿瘤特异性启动子表达复制相关基因，使病毒在特定肿瘤特异性启动子活性较高的肿瘤细胞中特异性扩增。条件复制型腺病毒在肿瘤治疗中应用广本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种病毒复制受TetR‑KRAB介导的转录抑制型Tet‑on系统调控的条件复制型腺病毒载体，其特征在于：腺病毒E1区包含元件及连接顺序为5’‑CMV启动子、TetR‑KRAB基因、含四环素反应元件的启动子TRE3G‑E1b Pro、EcoRⅠ酶切位点、缺失E1BΔ55KD蛋白的腺病毒E1A‑E1B 19KD基因序列、酶切位点SpeⅠ、mRNA转录终止信号SV40polyA‑3’；CMV启动子表达转录抑制因子TetR‑KRAB；两个酶切位点EcoRⅠ和SpeⅠ中插入的基因序列为腺病毒E1A翻译起始位点至腺病毒E1B 19KD蛋白终止密码子基因片段，包含四环素反应元件的启动子TRE3G‑E1b P...

【技术特征摘要】
1.一种病毒复制受TetR-KRAB介导的转录抑制型Tet-on系统调控的条件复制型腺病毒载体，其特征在于：腺病毒E1区包含元件及连接顺序为5’-CMV启动子、TetR-KRAB基因、含四环素反应元件的启动子TRE3G-E1bPro、EcoRⅠ酶切位点、缺失E1BΔ55KD蛋白的腺病毒E1A-E1B19KD基因序列、酶切位点SpeⅠ、mRNA转录终止信号SV40polyA-3’；CMV启动子表达转录抑制因子TetR-KRAB；两个酶切位点EcoRⅠ和SpeⅠ中插入的基因序列为腺病毒E1A翻译起始位点至腺病毒E1B19KD蛋白终止密码子基因片段，包含四环素反应元件的启动子TRE3G-E1bPro表达腺病毒E1A基因，腺病毒E1B19KD基因则由其自身的启动子表达，经过包装获得的腺病毒命名为Ad5-CMV-TetR-KRAB-TRE3G-E1bPro-Δ55KD。2.如权利要求1所述的病毒复制受TetR-KRAB介导的转录抑制型Tet-on系统调控的条件复制型腺病毒载体，其特征在于，所述的含四环素反应元件的启动子TRE3G-E1bPro的序列为：CTCGAGTTACTCCCTATCAGTGATAGAGAACGTATGAAGAGTTTACTCCCTATCAGTGATAGAGAACGTATGCAGACTTTACTCCCTATCAGTGATAGAGAACGTATAAGGAGTTTACTCCCTATCAGTGATAGAGAACGTATGACCAGTTTACTCCCTATCAGTGATAGAGAACGTATCTACAGTTTACTCCCTATCAGTGATAGAGAACGTATATCCAGTTTACTCCCTATCAGTGATAGAGAACGTATGTCGAGGTAGGCATCGATGCTAGCGGGGGGCTATAAAAGGGGGTGGGGGCGTTCGTCCTCACTCTAGATCTCTCGATCGAGAAGCTTGAATTC。3.如权利要求1所述的病毒复制受TetR-KRAB介导的转录抑制型Tet-on系统调控的条件复制型腺病毒载体，其特征在于，所述腺病毒E1A翻译起始位点至E1B19KD蛋白终止密码子基因片段序列为：ATGAGACATATTATCTGCCACGGAGGTGTTATTACCGAAGAAATGGCCGCCAGTCTTTTGGACCAGCTGATCGAAGAGGTACTGGCTGATAATCTTCCACCTCCTAGCCATTTTGAACCACCTACCCTTCACGAACTGTATGATTTAGACGTGACGGCCCCCGAAGATCCCAACGAGGAGGCGGTTTCGCAGATTTTTCCCGACTCTGTAATGTTGGCGGTGCAGGAAGGGATTGACTTACTCACTTTTCCGCCGGCGCCCGGTTCTCCGGAGCCGCCTCACCTTTCCCGGCAGCCCGAGCAGCCGGAGCAGAGAGCCTTGGGTCCGGTTTCTATGCCAAACCTTGTACCGGAGGTGATCGATCTTACCTGCCACGAGGCTGGCTTTCCACCCAGTGACGACGAGGATGAAGAGGGTGAGGAGTT...

【专利技术属性】
技术研发人员：夏海滨，陈皓，
申请(专利权)人：陕西师范大学，
类型：发明
国别省市：陕西,61