一种通过愈伤组织共培养获得斑锦卧牛植株的方法技术

本发明专利技术公开了一种通过愈伤组织共培养获得斑锦卧牛植株的方法，具体操作步骤如下：1)培养基的配制，包括基本培养基和组培各阶段培养基的组分；2)愈伤组织的诱导；3)愈伤组织的增殖；4)愈伤组织的共培养；5)不定芽的诱导；6)斑锦不定芽的增殖；7)壮苗及移栽。利用植物离体培养技术对正常和锦化卧牛植株的叶片进行了愈伤组织诱导、共培养及不定芽的再生诱导并成功获得斑锦卧牛植株。本发明专利技术方法合成效率较高，可操作性强，可以在较短时间内获得大量斑锦卧牛植株，而且能够广泛应用于斑锦多肉植物的人工合成。

A method for obtaining variegated mosaic beef plants by co culture of callus

The invention discloses a method for obtaining variegated woniu plants from callus were cultured, the specific steps are as follows: 1) preparation of culture medium, including basic culture medium and culture medium for each stage group; 2) induced callus callus proliferation; 3); 4) co culture callus induction of adventitious buds; 5); 6) variegated adventitious bud proliferation; 7) seedling and transplanting. The use of plant leaf in vitro on normal and Jinhua woniu plants were regenerated callus induction, co culture and the induction of adventitious buds and successful variegated woniu plants. The method of the invention has the higher synthesis efficiency, strong operability, can obtain a large number of variegated woniu plants in a relatively short period of time, and can be widely used in the synthesis of variegated succulents.

【技术实现步骤摘要】
一种通过愈伤组织共培养获得斑锦卧牛植株的方法
本专利技术属于组培方法领域，具体的说是一种通过愈伤组织共培养获得斑锦卧牛植株的方法。
技术介绍
斑锦多肉植物是植物的叶、茎等器官带有不同于植株基本颜色的其他颜色的斑块，这属于植物的一种变异现象(徐民生，1991)。从植物发育学角度来讲，斑锦多肉植物为嵌合体，一般是由同一株植物的少数细胞发生了变异后不断的分裂并和正常细胞共存而形成的，例如常见到兜锦、玉扇锦等(岩鸣,2012)。相比原色来说，斑锦多肉植物主体颜色种类更多，观赏价值更高，其市场价格可翻数倍。然而，斑锦多肉植物的获得方式主要依赖自然条件或人工繁殖中自发产生的变异，人工诱导研究较少。Binding等(1987)和Chen等(2006)通过原生质体的共培养和细胞嫁接分别获得了茄科和十字花科植物的种间嵌合体植株。可见，通过细胞及组织嫁接的人工诱导合成斑锦多肉植物具有一定的可行性。通过我们对多肉植物多年的组培研究发现，完全锦化的不定芽突变率较高，而斑锦不定芽则较少出现。因此，利用既有的自发产生的锦化卧牛植株的无菌材料来探索斑锦卧牛植株的人工合成方法对于斑锦多肉植物的种质创新具有重要意义。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种通过愈伤组织共培养获得斑锦卧牛植株的方法，其特征在于：该方法包括如下步骤：1)培养基的配制：(1)基本培养基：MS培养基，其中蔗糖20～30g/L，琼脂6～9g/L，pH＝5.8；(2)诱导培养基：MS+6‑BA 2～6mg/L+NAA 0～0.5mg/L；(3)分化培养基：MS+6‑BA0～0.05mg/L；(4)增殖培养基：MS+6‑BA 0.1～0.3mg/L；(5)壮苗培养基：MS+NAA 0.05～0.2mg/L；2)愈伤组织的诱导：选取正常绿色和完全锦化的卧牛无菌苗的叶片为外植体，将其分别切伤后接种到诱导培养基上进行暗培养诱导愈伤组织；3)愈伤组织的增殖：将步骤2)中诱导的愈伤...

【技术特征摘要】
1.一种通过愈伤组织共培养获得斑锦卧牛植株的方法，其特征在于：该方法包括如下步骤：1)培养基的配制：(1)基本培养基：MS培养基，其中蔗糖20～30g/L，琼脂6～9g/L，pH＝5.8；(2)诱导培养基：MS+6-BA2～6mg/L+NAA0～0.5mg/L；(3)分化培养基：MS+6-BA0～0.05mg/L；(4)增殖培养基：MS+6-BA0.1～0.3mg/L；(5)壮苗培养基：MS+NAA0.05～0.2mg/L；2)愈伤组织的诱导：选取正常绿色和完全锦化的卧牛无菌苗的叶片为外植体，将其分别切伤后接种到诱导培养基上进行暗培养诱导愈伤组织；3)愈伤组织的增殖：将步骤2)中诱导的愈伤组织转接至新鲜的诱导培养基上并在有光条件下进行增殖；4)愈伤组织的共培养：将步骤3)增殖获得的正常谱系和锦化谱系的愈伤组织在无菌条件下分别切成碎块后混合接种至诱导培养基上进行共培养；5)不定芽的诱导：挑取步骤4)共培养获得的呈黄绿色相间或相连的嵌合愈伤块置于分化培养基上进行不定芽的诱导培养；6)斑锦不定芽的增殖：将步骤5)中分化出的斑锦类型再生不定芽转接至增殖培养基上进行丛生芽的增殖培养；7)壮苗及移栽：将步骤6)中增殖的斑锦不定芽分割成单株后转接至壮苗培养基上进行壮苗。2.根据权利要求1所述的通过愈伤组织共培养获得斑锦卧牛植株的方法，其特征在于：在所述步骤1)中，所述的培养基包括基本培养基和组培各阶段培养基的组分具体为：(1)基本培养基：MS培养基，其中蔗糖30g/L...

【专利技术属性】
技术研发人员：王燕，陈剑平，汪一婷，吕永平，牟豪杰，李海营，陈志，
申请(专利权)人：浙江省农业科学院，
类型：发明
国别省市：浙江,33