用于鉴定长岭发垫刃线虫的分子标记及其应用制造技术

本发明专利技术公开了用于鉴定长岭发垫刃线虫的分子标记，属于植物线虫鉴定领域，该分子标记为520bp的DNA片段。还公开了由SEQ ID No.2和SEQ ID No.3所示的核苷酸序列组成的该分子标记的PCR引物。本发明专利技术还公开了用于鉴定该线虫的双重PCR的引物及分子标记，以及相应的双重PCR鉴定方法。本发明专利技术针对长岭发垫刃线虫设计的引物特异性强，应用该引物扩增所得的分子标记对长岭发垫刃线虫进行鉴定准确度高、可靠性强；其次，本发明专利技术方法检测灵敏度高，且方法简单、检测速度快、效率高；此外，本发明专利技术对操作人员要求低。

A molecular marker for identification of nematodes in Changling and its application

The present invention discloses a molecular marker for the identification of Changling plate nematode, belonging to the field of plant nematode identification, and the molecular marker is 520bp fragment of DNA. The invention also discloses a PCR primer the molecular markers consisting of nucleotide sequence shown by SEQ ID and SEQ No.2 ID No.3. The present invention also discloses the double PCR primers and molecular markers for identifying the nematode, and the corresponding double PCR identification method. The present invention in Changling nematodes designed primers specificity, molecular markers using the primers of Changling the nematodes were identified with high accuracy and high reliability; secondly, the method of the invention has high sensitivity, and the method is simple, high detection speed and high efficiency; in addition, the invention of low requirement for operators.

【技术实现步骤摘要】
用于鉴定长岭发垫刃线虫的分子标记及其应用
本专利技术属于植物线虫鉴定领域，具体涉及用于鉴定长岭发垫刃线虫的分子标记；还涉及用于鉴定该线虫的特异性引物，以及利用该分子标记或特异性引物鉴定长岭发垫刃线虫的方法。
技术介绍
长岭发垫刃线虫(Trichotylenchuschanglingensis)是一种迁移性植物外寄生线虫，属于发垫刃线虫属(Trichotylenchus)。2011年该线虫首次在马铃薯的根际土壤中发现(XuCLetal.,Nematology,2011，13(1):45-49)。该线虫能引起玉米叶片黄化、植株矮化、茎基部开裂、茎节缩短等症状(郭宁等.植物保护学报.2015,42(6):884-8910)，对玉米的危害十分严重。国内外对长岭发垫刃线虫的研究较少，传统的鉴定方法主要是基于形态特征，但是这种方法对操作人员的技术要求高，必须具有高度的线虫分类学专业技能，而一般操作人员不具备这种能力；此外，通常线虫样品数量少，有时仅有1个，也增加了鉴定难度，因此，通过形态特征对线虫进行鉴定的难度极大。以PCR为基础的分子生物学检测技术为线虫鉴定提供了新的途径，本专利技术人曾以IT本文档来自技高网...

【技术保护点】
用于鉴定长岭发垫刃线虫的分子标记，其特征在于所述的分子标记由SEQ ID No.1所示的核苷酸序列组成。

【技术特征摘要】
1.用于鉴定长岭发垫刃线虫的分子标记，其特征在于所述的分子标记由SEQIDNo.1所示的核苷酸序列组成。2.用于扩增权利要求1所述的分子标记的引物，其特征在于所述的引物由TC-F1和TC-R1组成；其中所述的TC-F1由SEQIDNo.2所示的核苷酸序列组成；所述的TC-R1由SEQIDNo.3所示的核苷酸序列组成；TC-F1：5’-ATTGTGTGTCCTGTCTGCG-3’(SEQIDNo.2)，TC-R1：5’-GCAAAGCACCATCCTCAAG-3’(SEQIDNo.3)。3.用于鉴定长岭发垫刃线虫的PCR检测试剂盒，其特征在于包括权利要求2所述的引物TC-F1和TC-R1；其中所述的TC-F1由SEQIDNo.2所示的核苷酸序列组成；所述的TC-R1由SEQIDNo.3所示的核苷酸序列组成。4.根据权利要求3所述的PCR检测试剂盒，其特征在于还包括10×ExTaqBuffer(Mg2+)、5U/μLExTaq聚合酶、2.5mmol/LdNTPsMixture和ddH2O。5.权利要求2所述的引物在长岭发垫刃线虫(Trichotylenchuschanglingensis)鉴定或检测上的应用。6.利用权利要求2所述的引物鉴定长岭发垫刃线虫的方法，其特征在于包括提取待测线虫DNA；以待测线虫DNA为模板，以TC-F1和TC-R1为引物进行PCR扩增，将扩增产物在1％琼脂糖凝胶上进行电泳，如果所得PCR扩增产物大小为520bp，即为长岭发垫刃线虫。7.用于鉴定长岭发垫刃线虫的双重分子标记，其特征在于包括权利要求1所述的分子标记，还包括由SEQIDNo.4所示的核苷酸序列组成的分子标记2。8.用于扩增权利要求7所述的双重分子标记的双重引物，其特征在于所述的双重引物包括上述引物TC-F1和T...

【专利技术属性】
技术研发人员：郭宁，石洁，马红霞，刘树森，张海剑，赵宝广，
申请(专利权)人：河北省农林科学院植物保护研究所，
类型：发明
国别省市：河北,13