The invention provides a Pepper Anthracnose Resistance identification methods including: indoor, medium inoculum preparation; separation; inoculum identification; inoculum preservation; inoculum rejuvenation; inoculation preparation; identification design; identification of material preparation; control varieties selection; and after vaccination management; investigation; disease resistance evaluation; compared with the prior art, the invention has the following advantages: through artificial inoculation method, the direct inoculation of plant pathogens to host plants or organs, the incidence, and on the basis of evaluation of resistance related standards, resistance to distinguish varieties.
【技术实现步骤摘要】
一种辣椒炭疽病室内抗性鉴定方法
本专利技术是一种辣椒炭疽病室内抗性鉴定方法，属于辣椒炭疽病室内抗性鉴定
技术介绍
辣椒炭疽病一般由5种病原菌引起，即红色炭疽病菌(Colletotrichumgloeosporioides＝Gloeosporiumpiperatum)，黑色炭疽病菌(C.coccodes＝C.nigrum)、黑点炭疽病菌(C.capsici)、尖孢炭疽菌(C.acutatu)和黑线炭疽菌(C.dematium)，在湖南省以红色炭疽菌危害为主。辣椒炭疽病主要危害叶片和果实。初侵染时呈水浸状黄褐色圆斑，进而发展为中央灰褐色，有同心轮纹，上生小黑点的圆型或不规则型病斑，干燥时呈现膜状且易破裂。病菌侵染叶片时，初期病斑呈褪绿呈水渍状，慢慢扩大，病斑中间灰白色，周围褐色。在果实上，病斑表面初生为水渍状，逐渐扩展为褐色凹陷，圆形或不规则形状，病斑上生有黑点，为病原菌分生孢子，受害的辣椒茎病部呈不规则或梭形病斑，纵裂凹陷。在我国辣椒种植区，辣椒炭疽病是一种常发真菌性病害，辣椒染病后可引起(30-85)％产量损失。
技术实现思路
针对现有技术存在的不足，本专利...
【技术保护点】
一种辣椒炭疽病室内抗性鉴定方法，其特征在于：包括：培养基制备；接种体分离；接种体鉴定；接种体保存；接种体复壮；接种孢子制备；鉴定设计；鉴定材料准备；对照品种选择；接种以及接种后管理；病情调查；抗病性评价。
【技术特征摘要】
1.一种辣椒炭疽病室内抗性鉴定方法，其特征在于：包括：培养基制备；接种体分离；接种体鉴定；接种体保存；接种体复壮；接种孢子制备；鉴定设计；鉴定材料准备；对照品种选择；接种以及接种后管理；病情调查；抗病性评价。2.根据权利要求1所述的一种辣椒炭疽病室内抗性鉴定方法，其特征在于：所述培养基制备包括制备水琼脂培养基以及制备马铃薯培养基：在制备水琼脂培养基中，以1L培养基为列：用5个250ml三角瓶每个装入200ml纯净水和4g琼脂粉然后加热至121℃，灭菌30min后取出，冷却后贮存备用，在制备马铃薯培养基中，以1L为列：称取马铃薯200g，切成细条或片状，放入锅中蒸煮当马铃薯煮至熟而不烂时，在1L量筒上用纱布过滤马铃薯残渣，定容至1L，用5个250ml三角瓶每个分别加入200ml滤液、4g葡萄糖、和4g琼脂粉然后121℃，灭菌30min后取出，冷却后贮存备用。3.根据权利要求1所述的一种辣椒炭疽病室内抗性鉴定方法，其特征在于：接种体分离的具体步骤为：从田间采集刚开始发病的辣椒炭疽病病果，在超净工作台上，用手术刀取0.5cm×0.5cm的病健部，先用75％酒精的消毒30s,再放入0.1％的次氯酸钠中浸泡2min，用灭菌水清洗3次后，用灭菌滤纸吸干病健块的水分，插入倒的水琼脂平板上，放置28℃人工气候箱中黑暗培养2d，待长出菌丝后再转接在PDA平板上，获得分离物。4.根据权利要求1所述的一种辣椒炭疽病室内抗性鉴定方法，其特征在于：接种体鉴定的具体步骤为：将培养7d后的分离物在显微镜下进行菌丝、孢子形态观察，如符合辣椒炭疽病病原菌的形态特征，用CTAB法提取分离物菌丝DNA，经过对获得的DNA进行电泳分析，分离物的DNA提取成功将分离物的DNA进行PCR扩增，扩增产物用1％琼脂凝胶电泳检测，将得到的rDNAITS序列提交至GenBank,BLAST进行对比，如与辣椒炭疽病病原物的ITS序列具有99％的相似，即可确定是辣椒炭疽病病原菌。5.根据权利要求4所述的一种辣椒炭疽病室内抗性鉴定方法，其特征在于：用CTAB法提取分离物菌丝DNA的具体步骤为：将培养5～7d的分离物，用灭菌手术刀刮菌丝于一干净灭菌的1.5mL离心管中，加500μlTE缓冲液混匀，加入10％SDS溶液30μl和10mg/ml蛋白酶K(PK)3μl混匀，37℃水浴孵育1h℃水浴孵育1h，加入100μlNacl(5M)混匀，加入80μlCTAB/Nacl混匀，65℃水浴10min，加入等体积的氯仿/异戊醇混合液混匀，12000r/min离心15min，取上清至新1.5mL离心管，加入等体积的酚/氯仿/异戊醇混合液(25:24:1)混匀，12000r/min离心15min，取上清至新1.5mL离心管，加入等体积的氯仿/异戊醇混合液混匀，12000r/min离心5min，取上清至新1.5mL离心管，加入2/3体积异丙醇，放入-20℃冰箱1h，12000r/min离心10min，去上清，用吸水纸吸干离心管口，沉淀用70％冷乙醇洗涤12000r/min离心10min，去上清，用吸水纸吸干离心管口，55℃干燥15min，加入20～50μlTE缓冲液溶解DNA沉淀，用1％的琼脂糖凝胶，按比例混匀电泳上样缓冲液和DNA，将混有上样缓冲液的DNA加至样品孔中，用DNAMaker做分子量的标记，进行电泳分析，电泳结束后，在凝胶成像分析仪下观察是否提取出DNA电泳带，拍摄并记录实验结果，经过对实验结果的观察，...
【专利技术属性】
技术研发人员：张卓，刘勇，张德咏，谭新球，罗路云，满益龙，韩永琴，张诚嘉，彭静，苏品，
申请(专利权)人：湖南省植物保护研究所，
类型：发明
国别省市：湖南,43
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