双拷贝EIP表达载体及其构建方法和应用技术

本发明专利技术提供了一种双拷贝EIP表达载体及其构建方法和应用，涉及生物技术领域，本发明专利技术提供的双拷贝EIP表达载体的构建方法，在单拷贝EIP表达载体中弹性蛋白多样肽的N端连接上目标蛋白‑内含肽基因片段，操作简单，实用性强。本发明专利技术提供的双拷贝EIP表达载体，与单拷贝EIP表达载体相比，增加了一个拷贝的目标蛋白，达到在一个EIP表达系统中含有两个拷贝的目标蛋白的目的，表达时每产生一个双拷贝EIP融合蛋白分子，裂解后可产生2个目标蛋白分子，使目标蛋白的产量得到大幅提高，增加了一倍。与传统的单拷贝EIP表达载体相比，在得到等量目标蛋白时，本发明专利技术提供的双拷贝EIP表达载体具有节约生产成本和时间成本的优点。

Two copies of EIP expression vector and its construction method and Application

The present invention provides a dual copy EIP expression vector and construction method and application thereof, relates to the field of biotechnology, the invention provides two copies of EIP expression vector construction method and connection of target protein intein gene fragments in a single copy EIP expression vector of elastin peptide diversity N terminal has the advantages of simple operation, practicality strong. The invention provides a double copy expression vector EIP, and the single copy EIP expression vector compared to increase a copy of the target protein reached the expression containing two copies of target protein in the system to a EIP expression, when every two copies of the EIP fusion proteins, cracking can be generated after 2 the target protein, the target protein yield increased significantly, doubled. Compared with the traditional single copy EIP expression vector, the double copy EIP expression vector provided by this invention has the advantages of saving production cost and time cost when obtaining the same amount of target protein.

【技术实现步骤摘要】
双拷贝EIP表达载体及其构建方法和应用
本专利技术涉及生物
，尤其是涉及一种双拷贝EIP表达载体及其构建方法和应用。
技术介绍
表达载体的构建是目前分子生物学和细胞生物学等实验中最常用的实验手段。目前常用的方法在进行重组蛋白纯化时，常发生亲和层析，严重影响蛋白收率。利用EIP(elastin-likepolypeptide-intein-protein)表达载体进行原核重组表达，可以在重组蛋白纯化时避免亲和层析，成本降低，时间缩短，其中：ELP(elastin-likepolypeptide)：弹性蛋白样多肽，由重复序列VPGXG组成(>100)：X是除脯氨酸以外的任意氨基酸；室温下高度可溶，高温下容易沉淀，转变温度(Tt)为30-40℃(具体Tt取决于链的长度、蛋白浓度和X氨基酸的种类)；I(internalprotein，intein)：内含肽，是指存在于前体蛋白当中的一段序列，在前体蛋白转化为成熟蛋白质的过程中，依靠自剪接功能将内含肽两端的外显肽以肽键连接，同时将自身从前体蛋白中释放出来。内含肽从结构和功能上可以分割为N端和C端，当N端或C端单独存在时不能发生剪接反本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种双拷贝EIP表达载体的构建方法，其特征在于，所述构建方法包括：将目标蛋白基因连接到内含肽基因的N端，得到目标蛋白‑内含肽基因片段，将所述目标蛋白‑内含肽基因片段连接到单拷贝EIP表达载体中的弹性蛋白多样肽的N端，得到所述双拷贝EIP表达载体。

【技术特征摘要】
1.一种双拷贝EIP表达载体的构建方法，其特征在于，所述构建方法包括：将目标蛋白基因连接到内含肽基因的N端，得到目标蛋白-内含肽基因片段，将所述目标蛋白-内含肽基因片段连接到单拷贝EIP表达载体中的弹性蛋白多样肽的N端，得到所述双拷贝EIP表达载体。2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，将所述目标蛋白基因和所述内含肽基因扩增后回收，并混合处理，得到所述目标蛋白-内含肽基因片段。3.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于，所述混合处理为将目标蛋白基因片段和内含肽基因片段混合后升温，使其变性，然后退火，得到退火产物，在所述退火产物中选取内含肽基因和目标蛋白基因的杂合子片段，加入DNA聚合酶，使单链结构互补为双链结构。4.根据权利要求3所述的构建方法，其特征在于，所述扩增所用的引物为分别根据目标蛋白基因和内含肽基因设计的含有内切酶位点的特异性引物；所述扩增所用的模板为所述单拷贝EIP表达载体。5.根据权利要求4所述的构...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈韬，
申请(专利权)人：湖南农业大学，
类型：发明
国别省市：湖南,43