连翘酯苷A在制备抗肝纤维化药物制剂中的应用制造技术

本发明专利技术公开了连翘酯苷A在制备抗肝纤维化、抗氧化应激药物制剂中的应用，为治疗慢性肝病的肝纤维化提供了新的治疗手段，在治疗剂量下无明显的毒副作用，有良好的临床上药用前景。

Application of forsythiaside A in preparing anti hepatic fibrosis in pharmaceutical preparations

The invention discloses application of forsythiaside A in preparing anti hepatic fibrosis and oxidative stress in pharmaceutical preparations, provided a new treatment method for the treatment of hepatic fibrosis in chronic liver disease, no obvious side effects in the treatment dose, has a good clinical prospect in medicine.

【技术实现步骤摘要】
连翘酯苷A在制备抗肝纤维化药物制剂中的应用
本专利技术涉及连翘酯苷A的新应用，尤其是涉及连翘酯苷A在制备抗肝纤维化药物制剂中的应用。
技术介绍
连翘为木犀科植物连翘Forsythiasuspensa(Thunb.)Vahl的干燥果实，其具有清热解毒，疏散风热之功效。中医临床上常用于治疗痈疽、丹毒、风热感冒、温热入营、高热烦渴。连翘酯苷A是连翘中主要的活性成分之一，其被认为对认知障碍、短暂性脑缺血有神经保护作用，具有改善学习记忆障碍、舒张血管、防治感染、解热等广泛的药理作用。肝纤维化是慢性肝病的最终的病理过程，其涉及到了肝细胞的损伤，肝星状细胞的激活，假小叶的形成等过程。最终可造成肝脏组织中广泛纤维连接的形成，形成门脉高压状态，进一步造成该功能的损坏。目前，对肝纤维化的治疗没有较好的疗法，一般采用去除病因的方法。
技术实现思路
本专利技术的目的之一是提供连翘酯苷A的新用途，所述的连翘酯苷A的化学结构式如下所示:本专利技术具体涉及连翘酯苷A在制备抗肝纤维化药物制剂的应用。本专利技术具体涉及连翘酯苷A在制备抗氧化应激药物制剂的应用。本专利技术所述药物制剂中连翘酯苷A还可以其药学上可以接受的盐、或者是连翘酯苷A及其药学上可以接受的盐的溶剂合物存在。所述药物制剂除了包含治疗有效量的连翘酯苷A、其药学上可以接收的盐或它们的溶剂合物外，还包含药用辅料或其它可配伍的药物。所述药用辅料是指常规的药用赋形剂，如溶剂、崩解剂、矫味剂、防腐剂、着色剂和粘合剂中的一种或两种组合。所述其它可配伍的药物为能与连翘酯苷A配伍其它天然药物或化学药品。所述药物制剂可以是各种临床药物剂型，如胶囊剂、颗粒剂、片剂、注射剂、脂质体纳米粒、缓释剂、控释剂或分散片等。本专利技术具有以下技术效果：(1)本专利技术的连翘酯苷A具有良好的体内外抗肝纤维化具有良好的药用前景。(2)本专利技术的连翘酯苷A在治疗剂量下未观察到明显的毒副作用，尤其是对肝脏、肺和肾脏的毒副作用。附图说明图1是连翘酯苷A抑制四氯化碳诱导导致的ALT、AST升高(A:ALTB：AST)，Control：对照组，CCl4：四氯化碳诱导组，CCl4+FA：连翘酯苷A组，与对照组比较，*P<0.05，与模型组比较，#P<0.05；图2是连翘酯苷A抑制四氯化碳诱导导致的小鼠肝纤维化四项的升高(A：HAB：LNC:CIVD:PCIII)，Control：对照组，CCl4：四氯化碳诱导组，CCl4+FA：连翘酯苷A组，与对照组比较，*P<0.05；与模型组比较，#P<0.05；图3.1是连翘酯苷A抑制四氯化碳诱导导致的小鼠肝纤维化(HE染色)，Control：对照组，CCl4：四氯化碳诱导组，CCl4+FA：连翘酯苷A组，HE：苏木素-伊红染色，标尺＝300μm；图3.2是连翘酯苷A抑制四氯化碳诱导导致的小鼠肝纤维化(天狼星红染色)，Control：对照组，CCl4：四氯化碳诱导组，CCl4+FA：连翘酯苷A组，SiriusRed：天狼星红染色，标尺＝200μm；图4是连翘酯苷A抑制了肝纤维化过程中肝星状细胞的激活(TGF-β1免疫组化)，Control：对照组，CCl4：四氯化碳诱导组，CCl4+FA：连翘酯苷A组，IHC:免疫组化，标尺＝200μm，黑色箭头：TGF-β1阳性细胞；图5是连翘酯苷A抑制肝纤维化过程中活性氧的生成，Control：对照组，CCl4：四氯化碳诱导组，CCl4+FA：连翘酯苷A组，与对照组比较，*P<0.05；与模型组比较，#P<0.05；图6是连翘酯苷A提升肝纤维化小鼠模型中肝细胞的总抗氧化能力TAC，谷胱甘肽GSH、超氧化物歧化酶SOD水平(A:TACB:GSHC:SOD)，Control：对照组，CCl4：四氯化碳诱导组，CCl4+FA：连翘酯苷A组，与对照组比较，*P<0.05；与模型组比较，#P<0.05。具体实施方式下面结合实施例及附图对本专利技术作进一步详细的描述，但本专利技术的实施方式不限于此。本专利技术实施例使用的连翘酯苷A均购自于成都普瑞法公司，纯度经HPLC-DAD峰面积归一化法测得均在99％以上。实验方法：建立正常对照组、四氯化碳诱导组、连翘酯苷A组，每组12只小鼠。正常对照组：每周腹腔腹腔注射橄榄油溶液2次，每次5ul/g体重。四氯化碳诱导组：利用四氯化碳诱导的小鼠肝纤维化模型进行造模，每周腹腔注射含四氯化碳20％的橄榄油溶液2次，每次剂量为5ul/g体重。连翘酯苷A组：该组小组每次经同四氯化碳诱导组相同的四氯化碳剂量处理建模后，同时给与腹腔注射连翘酯苷A，每次剂量为60mg/kg。腹腔注射8周后，麻醉后处死小鼠，取肝脏组织、血清用以后续实验。1.连翘酯苷A抑制四氯化碳诱导导致的小鼠肝功能损害8周实验结束后，麻醉小鼠，进行心脏取血，静置30min后，以3000rpm离心30min，取上清，利用小动物生化仪进行血清谷草转氨酶AST、谷丙转氨酶ALT水平测定。实验结果：连翘酯苷A组小鼠血清总的ALT、AST水平明显低于模型组，各组间差异有统计学意义。实验显示，连翘酯苷A能够抑制四氯化碳诱导导致的小鼠ALT、AST升高，抑制肝功能损害(图1)。2.连翘酯苷A抑制四氯化碳诱导导致的小鼠肝纤维化四项的升高实验方法：8周实验结束后，麻醉小鼠后进行心脏取血，静置30min后，以3000rpm离心30min，取上清，利用ELISA试剂盒(蓝基生物)测定各组小鼠血清肝纤维化四项透明质酸酶(HA)、层粘连蛋白(LN)、III型前胶原(PCIII)、IV型胶原(CIV)的水平。实验结果：实验显示连翘酯苷A组小鼠肝纤维化四项HA、LN、PCIII、CIV的水平显著低于四氯化碳诱导组小鼠，各组间差异存在统计学差异。实验显示连翘酯苷A能够抑制四氯化碳诱导导致的小鼠肝纤维化四项的增高，抑制肝纤维化的过程(图2)。3.连翘酯苷A抑制四氯化碳诱导导致的小鼠肝纤维化实验方法：将各组小鼠肝脏组织固定、脱水、石蜡包埋后，切3μm片，利用HE染色和天狼星红染色，封片后在显微镜下拍照观察。实验结果：HE染色显示，连翘酯苷A能够抑制四氯化碳诱导导致的小鼠肝纤维化，抑制纤维间隔以及假小叶的形成(图3.1)。天狼星红染色显示，连翘酯苷能够抑制四氯化碳诱导导致的小鼠肝内胶原新生的出现，抑制肝纤维化的产生(图3.2)。4.连翘酯苷A抑制了肝纤维化过程中肝星状细胞的激活实验方法：将各组小鼠肝脏组织固定、脱水、石蜡包埋后，切3μm片，利用抗TGF-β1抗体，进行免疫组织化学染色，利用DAB显色试剂盒显色，封片后显微镜下拍照观察。实验结果：实验结果显示，连翘酯苷A处理组小鼠肝脏切片中，TGF-β1阳性的细胞明显少于四氯化碳诱导组，说明连翘酯苷A处理抑制了肝星状细胞的激活，进而抑制了肝纤维化过程(图4)。5.连翘酯苷A抑制肝纤维化过程中活性氧的生成实验方法：实验结束时取各组小鼠肝脏组织小块，以PBS冲洗按照1:500用无血清培养液稀释DCFH-DA(避光)，24孔板每孔加入约3ml(以能完全浸没组织为准).37℃细胞培养箱内孵育20分钟。PBS洗涤细胞三次，以充分去除未进入组织内的DCFH-DA。将组织置于适量PBS中，研磨后混匀后，以12000rpm/分离心5min后取上清，利用荧光本文档来自技高网...

【技术保护点】
连翘酯苷A在制备抗肝纤维化药物制剂的应用。

【技术特征摘要】
1.连翘酯苷A在制备抗肝纤维化药物制剂的应用。2.连翘酯苷A在制备抗氧化应激药物制剂的应用。3.根据权利要求1所述的应用，其特征是，所述药物制剂中包含含有治疗有效量的连翘酯苷A、其药学上可以接受的盐、或者它们的溶剂合物。4.根据权利要求3所述的应用，其特征是，所述药物制剂除了包含治疗有效量的连翘酯苷A、其药学上可以接收的盐或它们的溶剂合物外...

【专利技术属性】
技术研发人员：余林中，马嘉镁，黄嘉维，卢子滨，谢佩，周红玲，杨华一，
申请(专利权)人：南方医科大学，
类型：发明
国别省市：广东,44