The invention belongs to the field of biological technology, and relates to the preservation technology of biological materials, in particular to a method for recovering the mammalian liver cell system in vitro. Primary liver cell freezing method of the invention will be removed from the water bath thawing in liquid nitrogen, the frozen cells directly into the liquid containing 1 ml incubation buffer blue staining cell count and cell viability was determined; this method omits the recovery of centrifugation steps in primary liver cells, simplifies and shortens the recovery time for primary hepatocytes; results show that by avoiding centrifugation steps, can improve the recovery rate and activity of hepatocytes, using for the following test, and did not lead to the residual centrifugal DMSO had no effect on metabolism and activity of hepatocytes, the method can be widely used to metabolic stability, drug in liver cells in the liver cells on the uptake of the drug evaluation test.
【技术实现步骤摘要】
一种提高冷冻原代肝细胞复苏后细胞活性的方法
本专利技术属生物
，涉及生物材料保存技术，具体涉及一种体外哺乳动物肝细胞系统的保存方法；尤其是一种提高冷冻原代肝细胞复苏后细胞活性的方法。
技术介绍
在现代生物医药研发中，体外药物代谢动力学以及药物间的相互作用的研究是药物在非临床阶段的非常重要的评价方法。而人和动物的原代肝细胞是药物体外评价体系中不可缺少的试验材料。例如：对药物在肝细胞中的代谢稳定性评价，肝细胞对药物的转运性摄取评价，药物对肝细胞中的药物代谢酶的诱导以及抑制作用的评价等等都需要用到原代肝细胞作为测试体系。研究显示，原代肝细胞作为无增殖能力的细胞，相对一般的实验用细胞株而言比较“脆弱”更容易受到外源性物质的影响。因此，保证原代肝细胞复苏后的高活性是顺利进行上述体外试验的重要因素。现有技术的复苏肝细胞的一般方法是需要经过低速500rpm，5分钟的离心后使原代肝细胞集中在离心管底部，以便去除冻存液。但实践显示，离心后的原代肝细胞的密度以及细胞活性与未离心的相比明显有下降趋势，表明离心对原代肝细胞的活性以及数量有影响，以致影响后续试验评价的准确性。基于此，...
【技术保护点】
一种提高冷冻原代肝细胞复苏后细胞活性的方法，其特征在于，其包括：将冷冻的原代肝细胞从液氮中取出，水浴解冻后，将原冻存细胞液直接加入到含有1 ml的incubation buffer，台盼蓝染色后，细胞计数并计算细胞活率；然后继续用incubation buffer将细胞密度稀释到试验所需条件。
【技术特征摘要】
1.一种提高冷冻原代肝细胞复苏后细胞活性的方法，其特征在于，其包括：将冷冻的原代肝细胞从液氮中取出，水浴解冻后，将原冻存细胞液直接加入到含有1ml的incubationbuffer，台盼蓝染色后，细胞计数并计算细胞活率；然后继续用incubationbuffer将细胞密度稀释到试验所需条件。2.按权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的液氮为-160°C。3.按权利要求1所述的方法，其特...
【专利技术属性】
技术研发人员：胡卓汉，孙易，余斐斐，李楠，
申请(专利权)人：瑞德肝脏疾病研究上海有限公司，
类型：发明
国别省市：上海,31
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