一种脑蛋白水解物溶液的制备方法技术

本发明专利技术涉及一种脑蛋白水解物溶液的制备方法，该方法包括将动物脑组织依次进行前处理、酶解、酸碱沉淀、超滤、纳滤的步骤；其特征在于，所述纳滤步骤采用截留分子量为150～300道尔顿纳滤系统进行。本发明专利技术方法在有效的去除产品中的无效成分、有害成分的同时，能最大限度保留氨基酸，提高产品的安全性。

【技术实现步骤摘要】
一种脑蛋白水解物溶液的制备方法
本专利技术涉及一种脑蛋白水解物溶液的制备方法，属于医药领域。
技术介绍
脑蛋白水解物是一种由动物脑组织经蛋白酶水解后得到的富含多种氨基酸和小分子多肽的一种混合物，可以调节和改进神经元的代谢，临床上，脑蛋白水解物主要用于治疗颅脑损伤和脑血管病(如脑梗和脑出血等)后遗症的恢复治疗，加速脑部神经系统的功能恢复。脑蛋白水解物主要成分为氨基酸和分子量较小有特定生物活性的多肽类物质，是用于生产注射用脑蛋白水解物的原料。按对机体的作用，氨基酸分为有效氨基酸和杂质氨基酸。有效氨基酸能够透过血脑屏障，促进细胞DNA合成、修复与再生，同时提高肾上腺皮质机能，促进全身代谢。杂质氨基酸则刺激机体免疫细胞分泌类组胺物质，组胺和类组胺物质均有使血压下降作用，这类物质可导致患者血压下降，严重时导致休克，危及生命。纳滤是一种介于反渗透和超滤之间的膜分离技术，对溶液中各类溶质的截留率与其摩尔质量成正相关，采用截流分子量不同的纳滤膜系统处理，得到的产品中各类成分也不同。现有技术已公开了采用纳滤技术对脑组织水解液进行分离处理的工艺，如CN1562339A公开了一种脑蛋白水解物制剂的制备方法，该方法包括将新鲜猪脑酶解、超滤后用截留分子量为100～1000的纳滤膜进行纳滤浓缩的步骤；CN103191403A公开了一种脑蛋白水解物的制备方法，并具体公开了将猪脑组织经匀浆、脱脂、酶解、超滤处理后用截留分子量为90～150道尔顿的纳滤机进行纳滤浓缩；CN101019889A公开了对脑蛋白水解物用300～1000分子量的纳滤器进行纳滤。现有技术中公开的纳滤步骤其目的仅仅是提纯浓缩脑蛋白水解物，或保证制剂的折光率合格，并未公开通过纳滤技术提高产品安全性的技术方案。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种脑蛋白水解物溶液的制备方法，该方法采用150～300道尔顿纳滤系统去除脑蛋白水解物溶液中低分子无效及有害物质，提高了产品的安全性。本专利技术的目的是通过如下技术方案实现的：一种脑蛋白水解物溶液的制备方法，该方法包括将动物脑组织依次进行前处理、酶解、酸碱沉淀、超滤、纳滤的步骤；其特征在于，所述纳滤步骤采用截留分子量为150～300道尔顿纳滤系统进行。进一步，所述的纳滤过程为采用截留分子量150～300道尔顿的纳滤系统进行过滤，收集回流液为纳滤液，当纳滤液为原体积1/5至1/2时结束纳滤。进一步，可向所述纳滤液中加入注射用水至纳滤前体积，再次用150～300道尔顿的纳滤系统进行过滤，收集回流液，当回流液为原体积1/5至1/2时结束纳滤，该过程重复1～4次。进一步，所述动物脑组织为新鲜或冻存不超过3个月的猪脑。进一步，所述前处理包括去除附着于脑组织的结构以及对脑组织进行匀浆得到脑组织匀浆液的步骤。更进一步，所述匀浆过程中加入脑组织重量1～3倍的注射用水。进一步，所述酶解过程包括依次用胃蛋白酶和胰酶进行酶解得到酶解液的过程。更进一步，所述胃蛋白酶和胰酶的加入量为脑组织匀浆液的0.2％～1％，酶解温度为40～70℃，酶解时间为2～8小时；更进一步，酶解温度为50～60℃，酶解时间为3～6小时；更进一步，酶解温度为55℃，酶解时间为4小时。进一步，所述酸碱沉淀过程为取酶解液用酸性溶液调节pH至1～2，静置8～12小时，取上清液；上清液再用碱性溶液调节pH至8～10，静置1～2小时，取上清液。进一步，所述超滤过程为依次用截留分子量为100000～150000道尔顿和10000～50000道尔顿的超滤装置进行超滤，取透过液为超滤液；更进一步，所述超滤过程为依次用截留分子量为100000道尔顿和10000道尔顿的超滤装置进行超滤。本专利技术方法在有效的去除产品中的无效成分、有害成分的同时，能最大限度保留氨基酸，提高产品的安全性。具体实施方式实施例1前处理：取新鲜健康猪的猪脑，剔除附着的骨头、脂肪、结缔组织等；将猪脑和其重量的2倍的注射用水一同匀浆2遍得到匀浆液；酶解：按照其对应猪脑重量的0.5％向匀浆液中加入胃蛋白酶，用盐酸调节匀浆液pH值为3.5，在55℃下水解4h；然后用氢氧化钠溶液调节pH值为8.5，再按对应猪脑重量的0.5％向匀浆液加入经0.02mol/LCaCL2溶液活化的胰酶，在55℃的温度水解4h；将胰酶水解液加热煮沸，保持60min；酸碱沉淀：用盐酸调节胰酶水解液pH值至1.5，静置8h，分取上清液；上清液用氢氧化钠溶液调节pH至9.0，静置2h，分取上清液；超滤：上清液用截留分子量100000道尔顿的超滤膜进行超滤，取透过液，再经截留分子量10000道尔顿的超滤膜进行超滤，收集透过液。实施例2前处理：取新鲜健康猪的猪脑，剔除附着的骨头、脂肪、结缔组织等；将猪脑和其重量的3倍的注射用水一同匀浆2遍得到匀浆液；酶解：按照其对应猪脑重量的0.2％向匀浆液中加入胃蛋白酶，用盐酸调节匀浆液pH值为3.5，在50℃下水解6h；然后用氢氧化钠溶液调节pH值为8.5，再按对应猪脑重量的0.2％向匀浆液加入经0.02mol/LCaCL2溶液活化的胰蛋白酶，在50℃的温度水解6h；将胰酶水解液加热煮沸，保持60min；酸碱沉淀：用盐酸调节胰酶水解液pH值至1.0，静置3h，分取上清液；上清液用氢氧化钠溶液调节pH至10.0，静置3h，分取上清液；超滤：上清液用截留分子量150000D的超滤膜进行超滤，取透过液，再经截留分子量50000D的超滤膜进行超滤，收集透过液。实施例3前处理：取新鲜健康猪的猪脑，剔除附着的骨头、脂肪、结缔组织等；将猪脑和与其等量的注射用水一同匀浆2遍得到匀浆液；酶解：按照其对应猪脑重量的1％向匀浆液中加入胃蛋白酶，用盐酸调节匀浆液pH值为3，在60℃下水解4h；然后用氢氧化钠溶液调节pH值为9，再按对应猪脑重量的1％向匀浆液加入经0.02mol/LCaCL2溶液活化的胰蛋白酶，在60℃的温度水解4h；将胰酶水解液加热煮沸，保持60min；酸碱沉淀：用盐酸调节胰酶水解液pH值至2.0，静置1.5h，分取上清液；上清液用氢氧化钠溶液调节pH至8.0，静置1.5h，分取上清液；超滤：上清液用截留分子量120000D的超滤膜进行超滤，取透过液，再经截留分子量30000D的超滤膜进行超滤，收集透过液为超滤液。实施例4纳滤：取实施例1-3任一制备的超滤液，用截留分子量为150道尔顿的纳滤膜分离系统进行纳滤，弃去透过液，收集回流液至纳滤前体积1/2；向回流液中加入注射用水至纳滤前体积，再次用截留分子量为150道尔顿分离膜系统纳滤，弃去透过液，收集回流液至纳滤前体积1/4，结束纳滤；将纳滤液用0.22um滤膜滤过，制得到脑蛋白水解物。实施例5纳滤：取实施例1-3任一制备的超滤液，用截留分子量为200道尔顿的纳滤膜分离系统进行纳滤，弃去透过液，收集回流液至纳滤前体积1/2；向回流液中加入注射用水至纳滤前体积，再次用截留分子量为200道尔顿分离膜系统纳滤，弃去透过液，收集回流液至纳滤前体积1/2；向回流液中加入注射用水至纳滤前体积，用截留分子量为200道尔顿分离膜系统进行第三次纳滤，当回流液至原体积的1/4，结束纳滤；将纳滤液用0.22um滤膜滤过，制得到脑蛋白水解物。实施例6纳滤：取实施例1-3任一制备的超滤液，用截留本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种脑蛋白水解物溶液的制备方法，该方法包括将动物脑组织依次进行前处理、酶解、酸碱沉淀、超滤、纳滤的步骤；其特征在于，所述纳滤步骤采用截留分子量为150～300道尔顿纳滤系统进行。

【技术特征摘要】
1.一种脑蛋白水解物溶液的制备方法，该方法包括将动物脑组织依次进行前处理、酶解、酸碱沉淀、超滤、纳滤的步骤；其特征在于，所述纳滤步骤采用截留分子量为150～300道尔顿纳滤系统进行。2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的纳滤过程为，采用截留分子量150～300道尔顿的纳滤系统进行过滤，收集回流液为纳滤液，当纳滤液为原体积1/5至1/2时结束纳滤。3.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，向所述纳滤液中加入注射用水至纳滤前体积，再次用150～300道尔顿的纳滤系统进行过滤，收集回流液，当回流液为原体积1/5至1/2时结束纳滤，该过程重复1～4次。4.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述前处理包括去除附着于脑组织的结构以及对脑组织进行匀浆得到脑组织匀浆液的步骤。5.如权...

【专利技术属性】
技术研发人员：王鑫，李明洁，索伟，张建立，盛爱武，程绍伟，孙竹峰，王玉霞，蔡晓曦，谈敏敏，李晓丽，郭中昊，宫娟，王立芹，曹晓玉，
申请(专利权)人：北京四环科宝制药有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11