新品种半滑舌鳎的分子选育方法技术

本发明专利技术公开了新品种半滑舌鳎的分子选育方法，它解决了目前半滑舌鳎养殖和培育中，种内杂交方法随机性大，选育优良品种的概率低，群体选育方法存在易产生近亲交配，导致经济性状和生产性能下降的问题。选育步骤：一、挑选表型性状；二、检测分析雌雄亲本间的遗传组成；三、选择位于不同繁殖系谱的亲本，以亲本间的遗传距离0.7～1.0作为“阈值”范围进行配组；四、培育子代至性成熟；五、以子代半滑舌鳎为新一代亲本，重复操作步骤一至四，直到达到新品种半滑舌鳎性状的设计要求。本发明专利技术方法在选育新品种半滑舌鳎的过程中，始终检测各代亲本的繁殖谱系，以各代亲本间的遗传距离0.7～1.0作为“阈值”范围进行配组，从而既能避免近亲交配，又能按照所设定的方向选择半滑舌鳎新品种的性状，显著提高其经济性状和生产性能，增加优良新品种的出现概率。

Molecular breeding method of new varieties of cynoglossussemilaevis

The invention discloses a method for molecular breeding of new varieties of cynoglossussemilaevis, which solves the cynoglossussemilaevis breeding and cultivation, intraspecific hybridization method of random, the probability of breeding low population breeding methods are easy to generate inbreeding, resulting in a decline in production performance traits and economic problems. The breeding procedure: first, selection of phenotypic traits; analysis of genetic composition of male and female parents between two and three, detection; choice in different breeding pedigree parents, with the genetic distance between parents from 0.7 to 1 as the \threshold\ scope for coordination group; four, foster offspring sexual maturity; five, the offspring of cynoglossussemilaevis as a new generation of parents, one to four steps repeat until it reaches the design requirements of new varieties of cynoglossussemilaevis traits. The method of the invention in the process of breeding new varieties of cynoglossussemilaevis in breeding pedigree in each generation were always detected, the genetic distance between the parent from 0.7 to 1 as the \threshold\ scope for coordination group, so as to avoid inbreeding, and can choose new varieties of cynoglossussemilaevis in accordance with the set the direction, improve the economic traits and production performance, increase the probability of excellent new varieties.

【技术实现步骤摘要】
新品种半滑舌鳎的分子选育方法
：本专利技术涉及一种鱼类新品种的选育方法，尤其涉及一种新品种半滑舌鳎的分子选育方法。
技术介绍
：半滑舌鳎是我国海水养殖的主导鱼类之一，具有个体大、生长快、肉味鲜美等特点，经济价值很高。目前常用的育种方法以种内杂交和群体选育为主，由于在育种前不了解选育亲本的遗传信息，同时种内杂交随机性大，选育优良品种的概率低，群体选育容易使亲本近亲交配，会出现种质退化现象，以致出现了孵化率、出苗率降低、生长速度减慢、抗逆性差等性状退化现象，使半滑舌鳎经济性状和生产性能下降。
技术实现思路
：本专利技术的目的是为解决目前半滑舌鳎养殖和培育过程中，种内杂交方法随机性大，选育优良品种的概率低，群体选育方法存在易产生近亲交配，出现种质退化，导致经济性状和生产性能下降的问题，针对上述问题提供的一种新品种半滑舌鳎的选育方法。本专利技术的目的可以通过如下措施来达到：新品种半滑舌鳎的分子选育方法，其特征在于新品种半滑舌鳎按以下步骤选育：一、根据新品种的设计需求，挑选表型性状符合要求的半滑舌鳎作为亲本，表型性状挑选公式为，公式中Xn为亲本的表型性状测定值，为半滑舌鳎群体表型性状的平均值，S为半滑舌鳎群体表型性状的标准差；二、检测分析亲本间的遗传组成，a.提取亲本基因组DNA；b.用20对微卫星标记引物对亲本基因组DNA分别进行PCR扩增；c.将PCR扩增产物进行凝胶电泳检测，获得产物条带图片；d.利用凝胶图像分析软件，将PCR扩增产物电泳条带图片转化成数字信息数据；e.将数字信息数据导入遗传分析软件，计算获得亲本间的遗传组成；三、根据遗传组成，选择亲本间的遗传距离0.7～1.0作为“阈值”范围进行配组，亲本分成2个或2个以上繁殖群体；四、繁殖群体内亲本自由组合交配，生产、培育子代半滑舌鳎至性成熟；五、以子代半滑舌鳎为新一代亲本，重复操作步骤一至四，直到达到新品种半滑舌鳎性状的设计要求，即得到新品种半滑舌鳎。为了进一步实现本专利技术的目的，所述的第二步骤的步骤a中提取亲本基因组DNA采用常规酚-氯仿抽提的方法或者使用基因组DNA纯化试剂盒。为了进一步实现本专利技术的目的，所述的第二步骤的步骤b中每对微卫星标记引物的PCR扩增反应总体积为15L，包括10.8L反应缓冲液、100ng亲本个体基因组DNA、0.6μL微卫星标记上下游引物、0.5UTaqDNA聚合酶和余量的灭菌超纯水；其中反应缓冲液含有终浓度10mmol/LTris-Cl（pH8.3）、50mmol/LKCl、1.5mmol/LMgCl2、200µmol/LdNTP和余量的超纯水。为了进一步实现本专利技术的目的，所述的第二步骤的步骤b中PCR扩增反应程序为：94℃预变性3分钟；94℃变性30秒，58℃复性30秒，72℃延伸30秒，循环25次；最后72℃延伸5分钟。为了进一步实现本专利技术的目的，所述的第二步骤的步骤c中PCR扩增产物凝胶电泳检测过程为：PCR扩增产物先使用8%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳2-3小时，之后将凝胶染色10分钟，然后显色5-10分钟，将凝胶扫描或照相获得产物条带图片。为了进一步实现本专利技术的目的，所述的染色用染色液为0.1%硝酸银溶液，所述的显色用显色液每升含有20g的NaOH、0.4g的Na2CO3和4mL的甲醛溶液。为了进一步实现本专利技术的目的，所述的第二步骤的步骤b中选用的20对微卫星标记引物的序列为：微卫星标记引物（1）上游引物：gggagtcaacaaccaaacca下游引物：cactcgcaaagactgaggtg微卫星标记引物（2）上游引物：actgcgtccaaactgaggag下游引物：cattccccactcactgtcct微卫星标记引物（3）上游引物：tcctgtgggaggagaggaga下游引物：acacacctgcacacaccagt微卫星标记引物（4）上游引物：ccatccgagaccttcagtgt下游引物：acctgctcctcctctgtgag微卫星标记引物（5）上游引物：acaaagctgcgttcctatcg下游引物：ggatcctgcctttggtttct微卫星标记引物（6）上游引物：atcgaggaggatctgtgtgg下游引物：gcgtgagatgcaagaaaaca微卫星标记引物（7）上游引物：tgcagcgcacattacctaac下游引物：ggcacgctgaagctttaca微卫星标记引物（8）上游引物：cgttgccatcacacaatttc下游引物：caacgtgcatcgtgtctctt微卫星标记引物（9）上游引物：tgtgaagtcatgtggttctg下游引物：tgagttggttgtatgtcctg微卫星标记引物（10）上游引物：ggctgcctacaaacctcaac下游引物：gaggactcagatgcacacga微卫星标记引物（11）上游引物：gtttccttcctttcattcct下游引物：gaaatggacgtctgtgattt微卫星标记引物（12）上游引物：cacaaaattgctgcttgcat下游引物：aacactccaaccccaggtaa微卫星标记引物（13）上游引物：ctgccgtgatcttcacaaaa下游引物：tccactgggacaagaaaaca微卫星标记引物（14）上游引物：ctgtgaccctcctcctgct下游引物：ctccatgctgccagtgttt微卫星标记引物（15）上游引物：aaagaggcgtgtcatcggtt下游引物：cccaatcgctcaagaaatcc微卫星标记引物（16）上游引物：taccacgctgccttcaaatg下游引物：ttcaccactgttctgctccac微卫星标记引物（17）上游引物：gacgaaggtttttgaatggtta下游引物：gtgaggcacaggcttttgga微卫星标记引物（18）上游引物：tccgacccacagttgtatca下游引物：taaacagatctgctgcagtgagt微卫星标记引物（19）上游引物：tcatcagcccagttcaaagt下游引物：ctacctctgcttcagctgtg微卫星标记引物（20）上游引物：tctttaccgagaatctccctcc下游引物：aaagggcctaccgaaagaat。为了进一步实现本专利技术的目的，所述的第二步骤的步骤d中使用的凝胶图像分析软件为Gel-ProAnalyzer（Version4.0）。为了进一步实现本专利技术的目的，所述的第二步骤的步骤e中使用的遗传分析软件为“基于遗传背景的分子育种软件1.0”。本专利技术同已有技术相比可产生如下积极效果：本专利技术解决了目前半滑舌鳎养殖和培育过程中，种内杂交方法随机性大，选育优良品种的概率低，群体选育方法存在易产生近亲交配，出现种质退化，导致经济性状和生产性能下降的问题，本专利技术方法在选育新品种半滑舌鳎的过程中，始终检测各代亲本的繁殖谱系，以各代亲本遗传距离0.7～1.0作为“阈值”范围进行配组，从而既能避免近亲交配，又能按照所设定的方向选择半滑舌鳎新品种的性状，显著提高其经济性状和生产性能，增加优良新品种的出现概率。具体实施方式：下面对本专利技术的具体实施方式做详细说明：具体实施方式一：本本文档来自技高网...

【技术保护点】
新品种半滑舌鳎的分子选育方法，其特征在于新品种半滑舌鳎按以下步骤选育：一、根据新品种的设计需求，挑选表型性状符合要求的半滑舌鳎作为亲本，表型性状挑选公式为

【技术特征摘要】
1.新品种半滑舌鳎的分子选育方法，其特征在于新品种半滑舌鳎按以下步骤选育：一、根据新品种的设计需求，挑选表型性状符合要求的半滑舌鳎作为亲本，表型性状挑选公式为，公式中Xn为亲本的表型性状测定值，为半滑舌鳎群体表型性状的平均值，S为半滑舌鳎群体表型性状的标准差；二、检测分析亲本间的遗传组成，a.提取亲本基因组DNA；b.用20对微卫星标记引物对亲本基因组DNA分别进行PCR扩增；c.将PCR扩增产物进行凝胶电泳检测，获得产物条带图片；d.利用凝胶图像分析软件，将PCR扩增产物电泳条带图片转化成数字信息数据；e.将数字信息数据导入遗传分析软件，计算获得亲本间的遗传组成；三、根据遗传组成，选择亲本间的遗传距离0.7～1.0作为“阈值”范围进行配组，亲本分成2个或2个以上繁殖群体；四、繁殖群体内亲本自由组合交配，生产、培育子代半滑舌鳎至性成熟；五、以子代半滑舌鳎为新一代亲本，重复操作步骤一至四，直到达到新品种半滑舌鳎性状的设计要求，即得到新品种半滑舌鳎。2.根据权利要求1所述的新品种半滑舌鳎的分子选育方法，其特征在于所述的第二步骤的步骤a中提取亲本基因组DNA采用常规酚-氯仿抽提的方法或者使用基因组DNA纯化试剂盒。3.根据权利要求1所述的新品种半滑舌鳎的分子选育方法，其特征在于所述的第二步骤的步骤b中每对微卫星标记引物的PCR扩增反应总体积为15L，包括10.8L反应缓冲液、100ng亲本个体基因组DNA、0.6μL微卫星标记上下游引物、0.5UTaqDNA聚合酶和余量的灭菌超纯水；其中反应缓冲液含有终浓度10mmol/LTris-Cl（pH8.3）、50mmol/LKCl、1.5mmol/LMgCl2、200µmol/LdNTP和余量的超纯水。4.根据权利要求1所述的新品种半滑舌鳎的分子选育方法，其特征在于所述的第二步骤的步骤b中PCR扩增反应程序为：94℃预变性3分钟；94℃变性30秒，58℃复性30秒，72℃延伸30秒，循环25次；最后72℃延伸5分钟。5.根据权利要求1所述的新品种半滑舌鳎的分子选育方法，其特征在于所述的第二步骤的步骤c中PCR扩增产物凝胶电泳检测过程为：PCR扩增产物先使用8%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳2-3小时，之后将凝胶染色10分钟，然后显色5-10分钟，将凝胶扫描或照相获得产物条带图片。6.根据权利要求5所述的新品种半滑舌鳎的分子选育方法，其特征在于所述的染色用染色液为0.1%硝酸银溶液，所述的显色用显色液每升含有20g的NaOH、0.4g的Na2CO3和4mL的甲醛溶液。7.根据权利要求1所述的新品种半滑舌鳎的分子选育方法，其特征在于所述的第二步骤的步骤b中选用的20对微卫星标记引物的序列为：微卫星标记引物（1）上游引物：gggagtcaacaaccaaacca下游引物：cactcgcaaagactgaggtg微卫星标记引物（2）上游引物：actgcgtccaaactgaggag下游引物：cattccccactcactgtcct微卫...

【专利技术属性】
技术研发人员：薛致勇，李超，鲁翠云，孙效文，郑先虎，程磊，毛成全，
申请(专利权)人：海阳市黄海水产有限公司，中国水产科学研究院黑龙江水产研究所，
类型：发明
国别省市：山东,37