两种具有免疫调节的铁皮石斛叶多糖的制备方法及其应用技术

本发明专利技术涉及两种从铁皮石斛叶分离的多糖及其制备方法和用途，属于天然高分子领域。其优点表现在：利用GPC测定平均相对分子量和GC‑MS分析单糖组成，发现本发明专利技术铁皮石斛叶多糖A‑11平均相对分子量为28342Da，主要由半乳糖，阿拉伯糖和鼠李糖组成，摩尔比为3.21:1.11:0.23，还发现痕量的木糖，葡萄糖和甘露糖；铁皮石斛叶多糖A‑22平均相对分子量为41143Da，主要由葡萄糖和半乳糖组成，摩尔比为3.23:1.02，还发现痕量的木糖、阿拉伯糖。同时，本发明专利技术的铁皮石斛叶多糖A‑11，A‑22都可以显著提高巨噬细胞吞噬中性红的能力，并显著促进巨噬细胞产生NO。

Preparation and application of two immunomodulatory polysaccharides from Dendrobium candidum leaves

The present invention relates to two kinds of polysaccharides separated from Dendrobium officinale leaves and their preparation methods and uses, belonging to natural polymer field. Its advantages are: Determination of average molecular weight of GC and MS analysis of monosaccharide composition by GPC, found that the invention of Dendrobium leaf polysaccharide A 11 average relative molecular weight of 28342Da, mainly composed of galactose, glucose and rhamnose. Arabia, molar ratio of 3.21:1.11:0.23, also found trace amounts of glucose and xylose. Mannose; Dendrobium leaf polysaccharide A 22 average relative molecular weight of 41143Da, consisted mainly of glucose and galactose, the molar ratio of 3.23:1.02, also found trace amounts of xylose and glucose in Arabia. At the same time, the invention of the A polysaccharide of Dendrobium leaf 11, A 22 can significantly enhance macrophage phagocytosis, and induce macrophages to produce NO.

【技术实现步骤摘要】
两种具有免疫调节的铁皮石斛叶多糖的制备方法及其应用
本专利技术涉及天然高分子
，具体地说，是两种具有免疫调节的铁皮石斛叶多糖的制备方法及其应用。
技术介绍
铁皮石斛为兰科石斛属植物铁皮石斛的干燥茎，因表皮呈铁绿色而得名。铁皮石斛作为一种价值极高的珍贵传统中药材，具有生津养胃、退热润肺等滋补功效，素有“千金草”之称。2015版《中华人民共和国药典》中规定铁皮石解的茎作为药用部位，叶为非药用部位。铁皮石斛的茎通常加工成干品，如铁皮枫斗、铁皮石斛功能性饮料等；另外，铁皮石斛的鲜茎可直接食用，或炖汤，或泡茶，或浸酒。然而，铁皮石斛叶常作为废弃物，被焚烧或当肥料，造成了严重的资源浪费。最近几年人们发现铁皮石斛叶对高血压，高血糖，高血脂等症状有较好的辅助疗效，并作为保健茶饮用。因此，我们有必要对铁皮石斛叶资源进行深入研究并合理利用。铁皮石斛主要含有多糖类、生物碱类，研究表明，多糖与铁皮石斛的药理活性，如提高机体免疫，抗氧化，抗肿瘤，抗衰老等密切相关。目前，人们对铁皮石斛多糖的研究几乎全部集中在茎部，对铁皮石斛叶的研究报道却较少。中国专利文献CN104740335A、CN104740336A本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种铁皮石斛叶多糖，其特征在于，所述的铁皮石斛叶多糖由以下步骤的制备方法制得：(1)将干燥铁皮石斛叶研磨、粉碎、过20目筛，随后向铁皮石斛叶粉末加入5倍量的石油醚，搅拌使充分接触，静置2h，弃上层石油醚，重复操作3次，最后将石油醚减压挥干，得铁皮石斛叶脱脂粉末；加水，铁皮石斛叶脱脂粉末按照料液比1:30，70℃提取2h，得水提液，60℃减压浓缩，得浓缩液；(2)向浓缩液加入3倍体积的Sevage试剂，所述的Sevage试剂为氯仿:正丁醇＝3:1，剧烈振荡30min，4000rpm离心20min，取上清，重复操作5次；随后60℃减压浓缩除去有机试剂并将溶液浓缩；(3)向浓缩液加入3倍体积的85％...

【技术特征摘要】
1.一种铁皮石斛叶多糖，其特征在于，所述的铁皮石斛叶多糖由以下步骤的制备方法制得：(1)将干燥铁皮石斛叶研磨、粉碎、过20目筛，随后向铁皮石斛叶粉末加入5倍量的石油醚，搅拌使充分接触，静置2h，弃上层石油醚，重复操作3次，最后将石油醚减压挥干，得铁皮石斛叶脱脂粉末；加水，铁皮石斛叶脱脂粉末按照料液比1:30，70℃提取2h，得水提液，60℃减压浓缩，得浓缩液；(2)向浓缩液加入3倍体积的Sevage试剂，所述的Sevage试剂为氯仿:正丁醇＝3:1，剧烈振荡30min，4000rpm离心20min，取上清，重复操作5次；随后60℃减压浓缩除去有机试剂并将溶液浓缩；(3)向浓缩液加入3倍体积的85％乙醇，室温下静置48h沉淀多糖，4000rpm、20min、4℃离心收集沉淀；将沉淀物溶解于蒸馏水中，冷冻干燥得粗多糖；(4)取粗多糖0.2g，配置成浓度为100mg/mL的溶液，上样量为2mL，经DEAE-52纤维素离子交换柱分离，依次用浓度为0、0.05、0.1、0.3、0.4、0.5、0.6mol/LNaCl，溶液洗脱，自动部分收集器收集，流速为1mL/min，4min每管；收集第3-15管，合并后经浓缩、透析、冷冻干燥得多糖A-1；(5)多糖A-1配置成浓度为100mg/mL的溶液，上样量为2mL，经SephadexG-100柱分离，用0.1mol/LNaCl溶液洗脱，自动部分收集器收集，流速为1mL/min，4min每管；采用苯酚-硫酸法检测，收集第9-14管，合并后经浓缩、透析、冷冻干燥得铁皮石斛叶多糖。2.根据权利要求1所述的铁皮石斛叶多糖，其特征在于，所述的铁皮石斛叶多糖平均相对分子量为28342Da，主要由摩尔比为3.21:1.11:0.23的半乳糖、阿拉伯糖和鼠李糖组成，以及痕量的木糖、葡萄糖和甘露糖。3.根据权利要求1所述的铁皮石斛叶多糖的制备方法，其特征在于，所述的制备方法包括以下步骤：(1)铁皮石斛叶经粉碎机器粉碎，再过20目筛得到铁皮石斛叶粉末；(2)铁皮石斛叶粉末经石油醚浸泡脱脂得到脱脂铁皮石斛叶粉末；(3)脱脂铁皮石斛叶粉末水提得到铁皮石斛叶水提液；(4)铁皮石斛叶水提液经Sevage法除蛋白，85％乙醇沉淀，最后冷冻干燥获得粗多糖；(5)粗多糖经阴离子交换柱层析得到洗脱液；(6)第(5)步的洗脱液浓缩、透析、冷冻干燥获得多糖A-1；(7)多糖A-1经凝胶柱层析得到洗脱液；(8)第(7)步的洗脱液浓缩、透析、冷冻干燥得到铁皮石斛叶多糖。4.一种铁皮石斛叶多糖，其特征在于，所述的铁皮石斛叶多糖由以下步骤的制备方法制得：(1)将干燥铁皮石斛叶研磨、粉碎、过20目筛，随后向铁皮石斛叶粉末加入5倍量...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘克海，邬军文，韩娟娟，张敏，姚昀，崔明晓，束红梅，
申请(专利权)人：上海海洋大学，
类型：发明
国别省市：上海,31