The present invention provides a kind of dental pulp stem cells and apical papilla stem cells expression of miRNAs spectrum method using the two generation sequencing technology analysis, preparation of dental pulp stem cells and apical papilla stem cells in suspension of single cells from single cell sorting cells in logarithmic growth phase in liquid, and using STRO 1 PE marker, by immunomagnetic separation of STRO collected 1 positive cells is required for dental stem cells and apical papilla stem cells by RNA extraction, and application of detection of two generation sequencing technology of two kinds of stem cells miRNAs expression. Through the analysis of stem cell miRNAs expression profiles of the two generation high-throughput sequencing technology, for the detection of dental pulp stem cells and apical papilla stem cells in different miRNAs expression profiles, understand the characteristics of stem cells, has far-reaching significance.
【技术实现步骤摘要】
应用二代测序技术分析牙髓干细胞与根尖牙乳头干细胞差异miRNAs表达谱的方法
本专利技术涉及一种分析牙髓干细胞与根尖牙乳头干细胞差异miRNAs表达谱的方法,具体涉及一种应用二代测序技术分析两种干细胞中差异miRNAs表达谱的方法。
技术介绍
牙齿借助牙根与牙槽骨紧密结合,牙根的稳固在牙列的稳定中非常重要。临床中常见的例如牙周炎、牙隐裂、牙外伤等疾病都会导致牙根的缺失、折断、发育异常等,最终都会造成牙的缺失。牙缺失后,生物学牙根的研究具有重要的意义。目前,生物学牙根的研究在体外主要是通过组织工程学的方法来构建。其中通过不同的牙源性干细胞组合在支架材料中构建牙齿是目前常用的方法之一。生物学牙根在临床上也有实际的应用,目前最常用的方法是牙髓血运重建术。牙髓血运重建术用来治疗根尖未发育完成的年轻恒牙牙髓坏死和根尖周炎,它不仅可以继续延续牙根的发育,而且增加了根部牙本质的厚度,避免了根尖诱导成形术和根尖屏障术后由于根管壁薄弱所造成的折裂风险。这些都表明,根尖部保留有健康的干细胞对于牙髓再生、牙体组织再生和牙根的继续发育发挥了重要的作用。人牙源性间充质干细胞,包括牙髓干细胞、根尖牙乳头干细胞和牙囊干细胞等。其中,牙髓干细胞(denalpulpstemcells,DPSCs)和根尖牙乳头干细胞(Stemcellfromtheapicalpapilla,SCAP)与牙髓、牙根形成密切相关。多年来,牙髓干细胞和根尖牙乳头干细胞一直都是众多学者研究的热点。在组织工程中,牙髓干细胞和根尖牙乳头干细胞都是理想的细胞来源,根尖牙乳头干细胞来源于生长发育期的根尖孔未闭合的年轻恒牙, ...
【技术保护点】
一种应用二代测序技术分析牙髓干细胞与根尖牙乳头干细胞差异miRNAs表达谱的方法,其特征在于:包括如下操作步骤:(1)培养牙髓干细胞和根尖牙乳头干细胞:选取新鲜拔除的第三磨牙,在无菌条件下取出牙髓、根尖牙乳头组织,将组织剪碎,并采用I型胶原酶及dispase酶于37℃下消化30min,之后离心重悬,用细胞筛过滤重悬液,获得单细胞悬液;(2)牙髓干细胞和根尖牙乳头干细胞的分选:对步骤(1)中获得的单细胞悬液,利用胰酶消化收集其中对数生长期的细胞,并依据抗体说明书采用鼠抗人STRO‑1‑PE标记细胞,经免疫磁珠分选收集STRO‑1阳性细胞,所收集到的STRO‑1阳性细胞即为所需的牙髓干细胞和根尖牙乳头干细胞;(3)二代测序技术检测细胞miRNAs表达谱:分别取步骤(2)经分选后的牙髓干细胞和根尖牙乳头干细胞,加入Trizol混合后抽提总RNA;使用TruSeq Small RNA Sample Prep Kit,按照厂家的标准流程,主要步骤如下:测定RNA的浓度、琼脂糖凝胶电泳检查RNA的完整性、以及测定RNA的RIN值,完成RNA样本质检后,使用接头对切胶回收的20‑40nt的miRNA ...
【技术特征摘要】
1.一种应用二代测序技术分析牙髓干细胞与根尖牙乳头干细胞差异miRNAs表达谱的方法,其特征在于:包括如下操作步骤:(1)培养牙髓干细胞和根尖牙乳头干细胞:选取新鲜拔除的第三磨牙,在无菌条件下取出牙髓、根尖牙乳头组织,将组织剪碎,并采用I型胶原酶及dispase酶于37℃下消化30min,之后离心重悬,用细胞筛过滤重悬液,获得单细胞悬液;(2)牙髓干细胞和根尖牙乳头干细胞的分选:对步骤(1)中获得的单细胞悬液,利用胰酶消化收集其中对数生长期的细胞,并依据抗体说明书采用鼠抗人STRO-1-PE标记细胞,经免疫磁珠分选收集STRO-1阳性细胞,所收集到的STRO-1阳性细胞即为所需的牙髓干细胞和根尖牙乳头干细胞;(3)二代测序技术检测细胞miRN...
【专利技术属性】
技术研发人员:吕红兵,林诗晗,胡雪刚,邱在玲,
申请(专利权)人:福建医科大学附属口腔医院,
类型:发明
国别省市:福建,35
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