一种活体箱形水母蛋白类毒素的粗纯方法技术

本发明专利技术提出一种活体箱形水母蛋白类毒素的粗纯方法，采用淀粉凝固体制备、覆膜、毒素收集、酶解、离心、镍柱层析、超滤除杂的方法，获得箱形水母蛋白类毒素粗纯液。与现有技术相比，本发明专利技术的有益效果是：操作时，操作人员不直接接触箱形水母，保证人员安全；只对箱形水母刺丝囊及其毒性物质进行采集，对水母损害小，其再生时间短，仅需2天，生产可持续性极具优势，为未来工业化利用水母毒素提供了条件；使用酶法分解淀粉凝固体时间较水母自溶时间更短，利于缩短生产时间；收集的刺丝囊及其毒素，受外界蛋白污染可能性小，初步纯化分离出的蛋白仅为水母毒素蛋白，为后续进一步纯化创造良好的基础。

A crude method for in vivo box jellyfish protein toxoid

The invention provides a method of pure crude protein in the box jellyfish toxins, using the method of starch gel solid preparation, coating, toxin collection, enzymatic hydrolysis, centrifugation, nickel column chromatography, ultra filter, get the box jellyfish protein toxin purified liquid. Compared with the prior art, the invention has the beneficial effects: when operating, the operator does not directly contact the box jellyfish, ensure the safety of personnel; only to collect the capsule and toxic substances on the box jellyfish jellyfish wire, small damage, the regeneration time is short, only 2 days, the production can be very persistent advantage, provide conditions for the future of industrialization by using the enzymatic decomposition of jellyfish toxins; starch coagulation time is jellyfish autolysis time shorter, to shorten the production time; nematocyst and toxin collection, outside protein contamination, preliminary purification of isolated protein was only jellyfish toxins, create a good foundation for the further purification of the follow-up.

【技术实现步骤摘要】
一种活体箱形水母蛋白类毒素的粗纯方法
本专利技术属于海洋生物
，具体涉及一种活体箱形水母蛋白类毒素的粗纯方法。
技术介绍
箱形水母（Chironexfleckeri）属腔肠动物门、钵水母纲、立方水母目、箱形水母科。箱形水母是一种淡蓝色的透明水母，形状像个箱子，有4个明显的侧面，有数十根触须，每条触须上布满了储存毒液的刺细胞，是世界上毒性最强的水母，根据美国国家科学基金会提供的数据，单是在菲律宾，每年就有20～40人死于箱形水母的毒刺。箱形水母毒素具有溶血活性、神经毒性、皮肤肌肉毒性，是极具潜力的海洋药物开发资源，但由于其巨大的毒性，为进一步研究及未来生产带来困难，如何安全获得其毒素也是各国科学家研究的重点之一。目前获得水母毒素的方法主要是用自动降解法来分离刺丝囊，将水母触角在4℃下，一定量的海水或NaCl溶液中放置1～4天，等待水母自动降解后，采用离心法回收得到小球状的刺丝囊，此法得到的刺丝囊细胞最纯净，活性最好，中国专利申请号201010149779.5名称为一种水母毒素去溶血毒性的方法，即采用此方法获得水母粗毒提取液。但此法具有较多缺点，如水母触角只能一次性利用，不能循环持本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种活体箱形水母蛋白类毒素的粗纯方法，其特征如下：a)淀粉凝固体制备：淀粉20～30%（w/w），增稠剂0～20%（w/w），纯化水补齐至100%（w/w），加热煮沸，期间不停搅拌，待无沉淀时，停止加热，入模（模底铺设尼龙纱网）晾至室温，即为淀粉凝固体；b)覆网：在淀粉凝固体未完全凝固时，外测使用尼龙纱网固定，以增加淀粉凝固体的抗破损性能；c)毒素收集：使用覆网淀粉凝固体模仿水母食物，接近箱形水母，诱导水母对其进行防御和捕猎，等待一段时间后回收覆网淀粉凝固体；d)酶解：对回收的覆网淀粉凝固体进行解剖，取外层厚度1～5mm淀粉凝固体压碎，使用组氨酸修饰的淀粉酶，于20～35℃进行酶解，加入一定量...

【技术特征摘要】
1.一种活体箱形水母蛋白类毒素的粗纯方法，其特征如下：a)淀粉凝固体制备：淀粉20～30%（w/w），增稠剂0～20%（w/w），纯化水补齐至100%（w/w），加热煮沸，期间不停搅拌，待无沉淀时，停止加热，入模（模底铺设尼龙纱网）晾至室温，即为淀粉凝固体；b)覆网：在淀粉凝固体未完全凝固时，外测使用尼龙纱网固定，以增加淀粉凝固体的抗破损性能；c)毒素收集：使用覆网淀粉凝固体模仿水母食物，接近箱形水母，诱导水母对其进行防御和捕猎，等待一段时间后回收覆网淀粉凝固体；d)酶解：对回收的覆网淀粉凝固体进行解剖，取外层厚度1～5mm淀粉凝固体压碎，使用组氨酸修饰的淀粉酶，于20～35℃进行酶解，加入一定量的纯化水，酶解至无大...

【专利技术属性】
技术研发人员：潘爱芹，
申请(专利权)人：熊廷珍，
类型：发明
国别省市：山东,37