成熟皮脂腺细胞的制造方法技术

本发明专利技术提供一种可以蓄积脂滴的培养皮脂腺细胞。一种成熟人皮脂腺细胞的制造方法，其中，包括将未成熟人皮脂腺细胞在低氧条件下进行培养。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】成熟皮脂腺细胞的制造方法
本专利技术涉及一种可以形成脂滴的分化后的皮脂腺细胞的制造方法。
技术介绍
皮脂腺为多细胞性的胞状腺体，从在毛孔的内表面开口的皮脂腺开口部分泌皮脂。在皮脂腺中存在皮脂腺细胞，起到放出皮脂的作用。所分泌的皮脂对皮肤及毛发进行保护及保湿。皮脂的分泌异常成为油性皮肤、干燥皮肤、粉刺、皮脂溢出症、脂溢性皮炎、干皮病等皮肤病的原因。特别是粉刺是以青年人为中心、在世界中许多人体验到的问题。为了研究开发控制皮脂分泌的医药品或化妆品，能够再现动物生物体的皮脂腺的行为的培养细胞模型的构建是重要的。目前，作为可以利用于实验的皮脂腺细胞株，已知有仓鼠皮脂腺细胞株。该细胞与生物体的皮脂腺细胞同样地具有在细胞内形成脂滴的优点，另一方面，基因组信息未弄清，因此，不适于利用遗传学方法的研究。专利文献1及非专利文献1中公开有一种对皮脂腺的生理学检查有用的、通过SV-40的巨大T抗原DNA的转染而永生化的源自人的皮脂腺细胞细胞株SZ95。由于该细胞源自人，因此，基因组信息清楚，并且在增殖性高方面作为研究工具是有利的，另一方面，具有在细胞内几乎不形成脂滴的缺点。除了专利文献1及非专利文献1所公开的SZ95细胞以外，在以往的人皮脂腺细胞中存在如果在体外进行培养则失去形成脂滴的能力的共同的问题。迄今为止，报道有将从人的皮肤中分离的皮脂腺细胞进行培养时，虽然在细胞质中可以看到脂质的蓄积，但是，其量只不过是角化细胞的4～8倍左右，与在活体内的皮脂腺细胞相比非常低，作为其原因，暗示在体外培养中皮脂腺细胞的分化变得不完全(非专利文献2)。与该报道一致，报道有如果在上述SZ95细胞中导入促进上述SZ95细胞向皮脂腺细胞的分化的Myc基因，则在细胞质内蓄积脂滴(非专利文献3)。在专利文献2中提示有如下想法：在培养皮脂腺细胞中包含生物合成皮脂的分化后的细胞和具有增殖能力、但不具有皮脂的生物合成能力的未分化细胞；及培养皮脂腺细胞不产生皮脂是因为通过继代培养仅增殖未分化细胞，生物合成皮脂的分化后的细胞减少。专利文献2中还公开了通过将未分化的皮脂腺细胞进行回转培养，从而诱导该细胞的分化的方法。非专利文献4中报道有：在将非专利文献1记载的源自人的皮脂腺细胞细胞株SZ95用亚油酸进行处理时，观察到细胞内的脂滴的蓄积。非专利文献5中公开有由源自人耳前部的正常皮肤的皮脂腺细胞细胞株SEB-1确认了脂滴蓄积。(专利文献1)日本特表2002-535984号公报(专利文献2)日本特开平5-268948号公报(非专利文献1)JInvestDermatol,1999,113:1011-1120(非专利文献2)Dermatology,1998,196:21-31(非专利文献3)Stemcell,2008,26:1241-1252(非专利文献4)JInvestDermatol,2008,128:1266-1272(非专利文献5)JInvestDermatol,2003,120:905-914
技术实现思路
本专利技术提供一种成熟人皮脂腺细胞的制造方法，其中，包括将未成熟人皮脂腺细胞在低氧条件下进行培养。另外，本专利技术提供一种未成熟人皮脂腺细胞向成熟人皮脂腺细胞的分化诱导方法，其中，包括将未成熟人皮脂腺细胞在低氧条件下进行培养。另外，本专利技术提供一种皮脂分泌控制剂的评价和/或选择方法，其中，包括：将未成熟人皮脂腺细胞在低氧条件下进行培养；和调查被检测物质或试验条件对培养后的细胞的脂滴形成的影响。进一步，本专利技术提供一种用于培养成熟人皮脂腺细胞的装置，其具备：用于细胞培养的腔室、和用于将培养气氛调整或维持在低氧条件的氧浓度控制器。进一步，本专利技术提供一种用于将未成熟人皮脂腺细胞向成熟人皮脂腺细胞分化诱导的装置，其具备：用于细胞培养的腔室、和用于将培养气氛调整或维持在低氧条件的氧浓度控制器。附图说明图1表示氧浓度对皮脂腺细胞的脂滴形成产生的影响。左：核染色图像，中：脂滴染色图像，右：融合图像。图像左侧的数值表示氧浓度。放大(Enlarged)表示以在1％氧浓度下培养的融合图像中的白框包围的区域的放大图。图2表示氧浓度对皮脂腺细胞的脂滴形成产生的影响。左：核染色图像，中：脂滴染色图像，右：融合图像。图像左侧的数值表示氧浓度。图3表示低氧下培养时间(3～9小时)产生的皮脂腺细胞的脂滴形成量的变化。左：核染色图像，中：脂滴染色图像，右：融合图像。图4表示低氧下培养时间(24～48小时)产生的皮脂腺细胞的脂滴形成量的变化。左：核染色图像，中：脂滴染色图像，右：融合图像。放大(Enlarged)表示以培养48小时的融合图像中的白框包围的区域的放大图。图5表示在低氧下进行培养的皮脂腺细胞中的PLIN1表达量的提高。误差条＝SD、n＝3。具体实施方式本专利技术涉及一种可以形成脂滴的分化后的培养皮脂腺细胞的制造方法。本专利技术者们深入研究了用于在以往的培养人皮脂腺细胞中如生物体内的皮脂腺细胞那样获得形成脂滴的能力的方法。其结果，发现：通过将人皮脂腺细胞在低氧条件下进行培养，该细胞分化为形成脂滴的细胞。根据本专利技术，可以提供如生物体内的皮脂腺细胞那样获得了形成脂滴的性质的培养成熟人皮脂腺细胞。由本专利技术所提供的培养成熟人皮脂腺细胞可以成为用于皮脂分泌的机理的研究、或用于控制皮脂分泌的医药品或化妆品的开发的有用的工具。在皮脂腺的最外层中存在作为未分化的皮脂腺细胞的基底细胞，积极地进行细胞分裂。如果基底细胞转移至皮脂腺的中心部，则细胞分裂逐渐地停止。停止了分裂的细胞开始在细胞内蓄积脂滴，最终使脂滴占细胞质的大部分。该蓄积脂滴的皮脂腺细胞为分化后的皮脂腺细胞的(J.Invest.Dermatol,1974,62:147-152)。蓄积了脂滴的分化后的皮脂腺细胞最后进行崩解而放出皮脂。在本说明书中，“成熟皮脂腺细胞”是指为分化后的皮脂腺细胞、且在细胞内具有脂滴(Lipiddroplet)的细胞。另外，在本说明书中，“未成熟(的)皮脂腺细胞”是为了与上述的“成熟皮脂腺细胞”区别而使用的用语，是指不是上述“成熟皮脂腺细胞”的未分化的皮脂腺细胞、或在细胞内不具有脂滴的皮脂腺细胞。细胞内的脂滴的存在可以通过公知的方法来确认。例如，如后述的实施例中记载的，可以通过利用油红O、尼罗红等油脂染色试剂进行了染色的细胞的显微镜观察、或荧光或吸光度测定来确认。例如，在细胞内存在脂滴的情况下，在用油脂染色试剂进行了处理的细胞的细胞质内观察到清晰的点状或圆形的染色区域(例如图1)。或者，细胞内的脂滴的存在也可以通过细胞中的脂滴包被蛋白1(perilipin1，PLIN1)等脂肪滴结合蛋白质(PNAS,2001,98:6494-6499)的表达量的测定等来确认。在本专利技术中，诱导没有形成或蓄积脂滴的未成熟人皮脂腺细胞的分化，制备形成或蓄积了脂滴、或者脂滴蓄积量增加的成熟人皮脂腺细胞。即，本专利技术的一个实施方式为成熟人皮脂腺细胞的制造方法。本专利技术的另一实施方式为未成熟人皮脂腺细胞向成熟人皮脂腺细胞的分化诱导方法。这些本专利技术的方法包括将未成熟的人皮脂腺细胞在低氧条件下进行培养。在上述本专利技术的方法中，作为提供给低氧条件下的培养的未成熟人皮脂腺细胞的例子，可以列举由包含皮脂腺的生物体的皮肤使用公知的方法而制备的培养人皮脂腺细胞、被确立的人皮脂腺本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种成熟人皮脂腺细胞的制造方法，其中，包括将未成熟人皮脂腺细胞在低氧条件下进行培养。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种成熟人皮脂腺细胞的制造方法，其中，包括将未成熟人皮脂腺细胞在低氧条件下进行培养。2.一种未成熟人皮脂腺细胞向成熟人皮脂腺细胞的分化诱导方法，其中，包括将未成熟人皮脂腺细胞在低氧条件下进行培养。3.一种皮脂分泌控制剂的评价和/或选择方法，其中，包括：将未成熟人皮脂腺细胞在低氧条件下进行培养；和调查被检测物质或试验条件对培养后的细胞的脂滴蓄积的影响。4.根据权利要求1～3中任一项所述的方法，其中，所述未成熟人皮脂腺细胞为人皮脂腺细胞株。5.根据权利要求4所述的方法，其中，所述人皮脂腺细胞株为以DSMACC2383注册的细胞、SZ95细胞、或SEB-1细胞。6.根据权利要求1～5中任一项所述的方法，其中，所述低氧条件为培养气氛中的氧浓度为5％以下的条件。7.根据权利要求1～5中任一项所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：井上高良，八谷辉，
申请(专利权)人：花王株式会社，
类型：发明
国别省市：日本,JP