一种表达Streptomyces sp. FA1来源木聚糖酶的毕氏酵母重组菌制造技术

本发明专利技术公开了一种表达Streptomyces sp.FA1来源木聚糖酶的毕氏酵母重组菌，属于基因工程领域。本发明专利技术以质粒pMD18‑T‑XynA为模板、设计引物、PCR扩增获得目的基因，所述基因的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO:1所示。本发明专利技术还公开了一种重组毕氏酵母工程菌的生产方法，包括如下步骤：(1)利用全基因合成技术合成自主复制序列PARS；(2)构建表达载体pGAPZαA‑PARS；(3)构建重组表达载体pGAPZαA‑PARS‑XynA；(4)毕氏酵母宿主的转化及阳性转化子筛选；(5)摇瓶诱导培养；(6)重组毕氏酵母工程菌发酵罐水平诱导生产木聚糖酶。

Pichia pastoris recombinant strain expressing Streptomyces, sp., FA1 derived xylanase

The invention discloses a Streptomyces expression sp.FA1 source xylanase recombinant Pichia pastoris, belongs to the field of gene engineering. The present invention with the plasmid pMD18 T XynA as template, primer design, PCR amplification of target gene, the nucleotide sequence of the gene is shown in the sequence list SEQ ID NO:1. The invention also discloses a method for producing recombinant Pichia yeast engineering bacteria, which comprises the following steps: (1) the synthesis of autonomously replicating sequence using PARS gene synthesis technology; (2) the construction of expression vector pGAPZ alpha A PARS; (3) to construct the recombinant expression vector pGAPZ alpha A PARS (XynA; 4 screening) transformation of Pichia pastoris host and positive transformants; (5) induced by shake flask culture; (6) recombinant Pichia yeast engineering bacteria fermentation tank level induced production of xylanase.

【技术实现步骤摘要】
一种表达Streptomycessp.FA1来源木聚糖酶的毕氏酵母重组菌
本专利技术涉及一种表达Streptomycessp.FA1来源木聚糖酶的毕氏酵母重组菌，属于基因工程领域。
技术介绍
木聚糖酶属于糖苷水解酶[EC3.2.1.x]，能应用在多个领域中。木聚糖酶和其他半纤维素酶一起添加在饲料中利于增加饲料营养分解；在制浆和造纸工业领域，木聚糖酶可作为预漂白剂处理纸浆，从而降低纸浆漂白过程中化学试剂使用量，减少对环境的污染；在食品领域可以用于面制品烘焙，能够改善面制品的品质；木聚糖酶还用于制备低聚木糖。麻类植物的纤维素含量丰富，是纺织行业中纤维原材料，但是麻类植物中含有半纤维素、木质素、果胶等杂质不利于纺织，木聚糖酶可以进行脱胶以去除这些胶质，因而在纺织工业中木聚糖酶也有相当的应用，可减少化学品对环境的污染。迄今为止，国内外已报道了400多种木聚糖酶基因，大多数木聚糖酶在野生菌中表达量仅在10-20IU·mL-1。为了进一步推动木聚糖酶在工业生产中的应用，利用分子生物学方法将木聚糖酶基因进行异源表达以提高木聚糖酶的表达水平，是目前普遍采用的木聚糖酶制备方式。毕氏酵母表达系统主要包括本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种表达木聚糖酶毕氏酵母重组菌，其特征在于，所述毕氏酵母重组菌是将Streptomyces sp.FA1来源的木聚糖酶基因，连接到含有自主复制序列的游离表达载体上，转化至毕氏酵母中得到的毕氏酵母重组菌。

【技术特征摘要】
1.一种表达木聚糖酶毕氏酵母重组菌，其特征在于，所述毕氏酵母重组菌是将Streptomycessp.FA1来源的木聚糖酶基因，连接到含有自主复制序列的游离表达载体上，转化至毕氏酵母中得到的毕氏酵母重组菌。2.根据权利要求1所述毕氏酵母重组菌，其特征在于，所述木聚糖酶基因氨基酸序列如SEQIDNO:1所示。3.根据权利要求1所述毕氏酵母重组菌，其特征在于，所述自主复制序列的核苷酸序列如SEQIDNO:2所示。4.根据权利要求1所述毕氏酵母重组菌，其特征在于，所述游离表达载体为通过将核苷酸序列如SEQIDNO:2的PARS复制子连接到pGAPZαA质粒上得到pGAPZαA-PARS游离表达载体。5.根据权利要求1所述毕氏酵母重组菌，其特征在于，所述毕氏酵母为毕氏酵母KM71、GS115或SMD168。6.一种权利要求1所述毕氏酵母重组菌的构建方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：(1)获得氨基酸序列如SEQIDNO:1所示的木聚糖酶基因；(2)获得序列如SEQIDNO:2所示的自主复制子PARS基因；(3)将步骤(2)所得PARS基因与质粒pGAPZαA相连，得到表达载体pGAPZαA-PARS；(4)将步骤(1)中的木聚糖酶基因与步骤(3)中的表达载体pGAPZαA-PARS相连，得到重组载体pGAPZαA-PARS-XynA；(...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴敬，吴丹，潘阳，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32