重组Wzt蛋白兔血清多克隆抗体及其制备方法技术

重组Wzt蛋白兔血清多克隆抗体及其制备方法，涉及抗体制备领域，填补了应用重组Wzt蛋白制备特异性多克隆抗体的空白。该多克隆抗体的制备方法包括：将重组Wzt蛋白与等体积的弗氏完全佐剂混合乳化后，在雌性家兔背部进行皮下多点注射；二次免疫：一周后，将重组Wzt蛋白与等体积的弗氏不完全佐剂混合乳化后，在雌性家兔背部进行皮下多点注射；按二次免疫过程每间隔一周进行三次、四次免疫；每次免疫后采集雌性家兔耳静脉血，检测兔血清抗体效价；第四次免疫一周后，收集兔全血，离心收集上清得兔血清，经纯化后得到重组Wzt蛋白兔血清多克隆抗体。该重组Wzt蛋白兔血清多克隆抗体特异性良好，可用于检测布鲁氏菌Wzt蛋白。

Rabbit polyclonal antibody for recombinant Wzt protein and preparation method thereof

The invention relates to a recombinant Wzt protein rabbit serum polyclonal antibody and a preparation method thereof, relating to the preparation field of antibody, and filling the blank of preparing specific polyclonal antibody by using recombinant Wzt protein. Including the preparation of the polyclonal antibody: the recombinant Wzt protein with equal volume of Freund's complete adjuvant mixed emulsion after subcutaneous multi-point injection in female rabbits back; two immunization: a week later, the recombinant Wzt protein and equal volume of Freund's incomplete adjuvant mixed emulsion after subcutaneous multi point injection in female rabbits were immunized two times according to the back; each interval to three times a week, four times of immunization; after each immunization of female rabbit ear vein blood collection, detection of rabbit serum antibody titer; one week after the fourth immunization, the rabbit blood collection, centrifugal Collection - rabbit serum, the purified recombinant Wzt protein rabbit polyclonal antibody serum. The recombinant Wzt protein has a good specificity of polyclonal antibody and can be used for detection of Brucella Wzt protein.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及抗体制备
，具体涉及一种重组Wzt蛋白兔血清多克隆抗体及其制备方法。
技术介绍
布鲁氏菌病(Brucellosis，简称布病)由布鲁氏菌(Brucella)引起，主要感染反刍动物和人类，也可感染鹿、犬类等，全球大部分地区均有布鲁氏菌病感染的报道。动物患布病会引起怀孕动物流产，产奶量下降和不育等一系列问题，对经济影响非常大，特别是在发展中国家。绝大多数布鲁氏菌都可以感染人，并引起严重的疾病，不仅需要配合抗生素的治疗，而且治疗时间相对较长，遗留下来的后遗症通常相对严重。布病的传播使得畜牧业的发展和人类健康受到严重影响，全世界每年新发感染人数大约为50万人，在世界二百多个国家和地区中报告有人畜疫情的国家有170多个，因此，在布病流行的国家，消除布病一直是人们一直以来都想要实现的目标。致病机理(包括胞内寄生机理)以及免疫机理尚不十分清楚是布鲁氏菌病研究过程中的一个瓶颈，导致其防控存在一定的难度。脂多糖(Lipopolysaccharides，LPS)广泛存在于革兰氏阴性细菌中，对于革兰氏阴性细菌外膜的结构和功能完整性至关重要，可以引起哺乳动物免疫反应。布鲁氏菌的LPS是本文档来自技高网...

【技术保护点】
重组Wzt蛋白兔血清多克隆抗体，其特征在于，它是利用重组Wzt蛋白作为抗原，对雌性家兔进行四次免疫后再经纯化处理后获得的。

【技术特征摘要】
1.重组Wzt蛋白兔血清多克隆抗体，其特征在于，它是利用重组Wzt蛋白作为抗原，对雌性家兔进行四次免疫后再经纯化处理后获得的。2.制备权利要求1所述的重组Wzt蛋白兔血清多克隆抗体的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一、初次免疫将500μg重组Wzt蛋白与等体积的弗氏完全佐剂混合乳化后，在雌性家兔背部进行皮下多点注射，每点100μg重组Wzt蛋白；步骤二、二次免疫在初次免疫的一周后进行二次免疫，将400μg重组Wzt蛋白与等体积的弗氏不完全佐剂混合乳化后，在雌性家兔背部进行皮下多点注射，每点80μg重组Wzt蛋白；步骤三、三次免疫在二次免疫的一周后进行二次免疫，将400μg重组Wzt蛋白与等体积的弗氏不完全佐剂混合乳化后，在雌性家兔背部进行皮下多点注射，每点80μg重组Wzt蛋白；步骤四、四次免疫在三次免疫的一周后进行二次免疫，将400μg重组Wzt蛋白与等体积的弗氏不完全佐剂混合乳化后，在雌性家兔背部进行皮下多点注射，每点80μg重组Wzt蛋白；步骤五、每次免疫后采集雌性家兔耳静脉血，以未进行免疫时的兔血清为对照、纯化后重组Wzt蛋白为抗原，应用间接ELISA法检测兔血清抗体效价，血清稀释倍数分别为100、200、400、1600、3200、6400；步骤六、第四次免疫一周后，采集兔全血，将收集的兔全血在37℃静置2h，4℃静置过夜，次日4000rpm、离心10min收集上清，得到兔血清；步骤七、纯化(1)将上述所得兔血清与等体积的抗体结合缓冲液混合后过滤；(2)用10倍柱体积的抗体结合缓冲液平衡ProteinA柱子，将上述过滤后的兔血清打入到柱子中；(3)用抗体结合缓冲液清洗柱子，洗脱杂蛋白，直至流出的下液中不含有蛋白成分；(4)用抗体洗脱液过柱，洗脱抗体，收集流出的下液，并用pH9.0的Tris-HCl调节pH至中性，收集重组Wzt蛋白兔血清多克隆抗体。3.根据权利要求2所述的重组Wzt蛋白兔血清多克隆抗体的制备方法，其特征在于，所述重组...

【专利技术属性】
技术研发人员：王秀然，王浩，卢天成，王岩，李海燕，付玉芹，孙喆，李思圆，贾宇，王茗宇，刘思阳，胡祥坤，边红，李全亮，
申请(专利权)人：吉林农业大学，
类型：发明
国别省市：吉林;22