盐湖链霉菌TRM20170601及在消毒剂中的应用制造技术

本发明专利技术公开盐湖链霉菌TRM20170601及在消毒剂中的应用，通过在新疆硝尔库勒湖地区采集的土壤样品中分离、筛选、培养，获得一株产生物酶能力较高从而其发酵液有显著的生物膜抑制作用的盐湖链霉菌（

Streptomyces TRM20170601 from Saline Lake and its application in disinfectants

The invention discloses a Saline Lake Streptomyces TRM20170601 and application in disinfectant, the soil samples collected in Xinjiang Lake area of nitrate in Erkule separation, screening, training, obtained a strain producing enzyme and its fermentation liquid has high ability of Streptomyces biofilm inhibition of Saline Lake was the (

【技术实现步骤摘要】
盐湖链霉菌TRM20170601及在消毒剂中的应用
本专利技术属于微生物
，涉及一种链霉菌新菌种及其在消毒剂中的应用的
技术背景消毒是指根据不同的生产环节、对象用适宜的方法清除或杀灭畜禽体表及其生存环境中的病原微生物及其它有害微生物。在目前集约化程度越来越高的趋势下，养殖农场疾病发病越来越复杂，动物疫病防治问题十分突出。规模化养殖场疫病的发生往往是多因素综合作用的结果，但其中最主要的是由于外界环境中病原微生物的侵入及扩散或场内动物本身病原微生物污染扩散造成的。有效的消毒是杜绝和降低养殖场环境中的病原体，切断疫病传播途径，预防和控制养殖场传染病的重要措施之一。但是使用现有的消毒剂往往在消毒后还有残留的耐药致病菌，使用效果不理想，不能有效防治某些规模化养殖场疫病，如奶牛隐性乳房炎等反复发作，难以治愈，成为畜牧养殖产业的痼疾。近年来研究发现，生物被膜是导致这些致病菌难以根除的主要原因，以生物被膜形式存在的细菌不同于浮游细菌，它们对抗生素等杀菌剂、恶劣环境及宿主免疫防御机制有很强的抗性，生物被膜内的细菌在生理、代谢、对底物的降解或利用和对环境的抵抗能力等方面都具有独特的性质，以现有的消毒剂来对这些致病菌进行消除是很难达到理想的消毒效果的，而含有生物膜抑制剂的消毒剂可以很好地解决这一问题，大幅度提升消毒效果，利用微生物生产的生物膜抑制剂是其中一类，一些放线菌能够产生抑制细菌生物膜形成的活性物质，如吲哚、蛋白酶类等，与传统抗生素作用机制完全不同的是，这些活性物质在不影响病原菌生长的前提下，通过干扰病原菌生物膜形成相关基因表达来实现抑制作用。与传统的抗菌消毒剂相比，新型生物膜抑制活性物质在一定程度上能够缓解细菌耐药性问题。因此，细菌生物膜形成抑制剂作为新型消毒剂成分，在预防微生物尤其生物膜感染领域具有广阔的应用前景，但目前关于微生物生物膜抑制剂用于消毒剂的报道很少，因此需要进一步探究微生物的生物膜抑制作用，为微生物生物膜抑制提供具有生物膜形成抑制作用且性能稳定的抗性菌株，将在消毒剂领域有潜在的应用开发前景。
技术实现思路
针对现有技术中未见有关本专利技术中的链霉菌新菌种及在消毒剂中的应用的相关报道，且现有的消毒剂在消毒后还有残留的耐药致病菌，使用效果不理想，不能有效防治规模化养殖场疫病的现状，本专利技术旨在为消毒剂中提供具有生物膜形成抑制作用且性能稳定的抗性新的菌株。本专利技术通过在土壤样品中分离筛选出一株链霉菌新菌种，且具有产生物酶能力较高从而其发酵液有显著的生物膜抑制作用。通过提供一种盐湖链霉菌(Streptomycessalilacus)TRM20170601CGMCCNo.14260，以及该菌的发酵液在消毒剂中的应用技术方案。本专利技术采用的主要技术方案：本专利技术采用的土壤样品由塔里木大学生命科学学院采自新疆硝尔库勒湖，将采集的土壤样品经大量筛选、优选出一批生长良好的链霉菌菌株，进行16SrRNA基因序列的测定，从中筛选出一株抑制生物膜形成能力较强的链霉菌的新菌种(Streptomycessalilacus)。本专利技术具体提供一种盐湖链霉菌(Streptomycessalilacus)TRM20170601CGMCCNo.14260，通过提供确定的的筛选方法，在采集的土壤样品中分离筛选和培养，获得一批链霉菌微生物菌株，从中筛选出一株抑制生物膜形成能力较强的链霉菌菌株TRM20170601，经微生物学分类与鉴定，属于链霉菌(Streptomycessalilacus)中新的菌株，暂命名为StreptomycessalilacusTRM20170601。具体的，本专利技术通过对采集土壤样品进行分离、筛选和培养，从中筛选出一株编号为TRM20170601的菌株，经微生物学分类与鉴定，该菌株属于链霉菌(Streptomycessalilacus)菌株。该菌株已于申请日前保藏于布达佩斯条约微生物国际保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)。地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编：100101。保藏日期2017年6月21日，菌种保藏号为CGMCCNo.14260。经微生物学鉴定为链霉菌(Streptomycessalilacus)，经过系统分类确定该菌种TRM20170601规范名称为盐湖链霉菌(Streptomycessalilacus)。该菌株最适生长条件为：温度28℃，培养基采用高氏一号培养基(甘露醇10g、七水硫酸镁1g、碳酸钙0.2g、丙氨酸1g、磷酸氢二钾1g、七水硫酸亚铁0.01g、氯化钠15g、重铬酸钾50mg、琼脂粉18g、水1L、微量盐1mL(0.001g/L)、复合维生素1mL(0.5mg/L)、pH7.2～7.4)，培养时间4d；经4d培养后，在高氏一号培养基表面，菌落呈圆形、边缘整齐、凸起、光滑、白色、不透明、黏稠不易挑起；该菌为革兰阳性菌、好氧、菌体杆状、无鞭毛、有内生孢子形成。根据以上形态特征，参照《伯杰氏系统细菌学鉴定手册》第八版和《常用细菌系统鉴定手册》对TRM20170601菌株进行形态学，生理生化鉴定，并结合分子生物学测序，初步鉴定该菌株为链霉菌(Streptomycessalilacus)的成员，但该菌种具有新菌种鲜明特征，从其分类学角度，暂命名为盐湖链霉菌(Streptomycessalilacus)TRM20170601。同时，本专利技术通过提取菌株TRM20170601的总DNA，采用细菌16SrDNAPCR扩增通用引物，进行PCR扩增，PCR产物经切胶纯化后测序。将所测16SrRNA基因序列与GenBank数据库中的序列进行比对，结果表明：菌株TRM20170601与模式菌株StreptomycesmacrosporusNBRC14748T(AB184616)最大同源为98.0％，与同属其它菌株同源性均小于97.0％，尚不能确定其确切分类，确定为一株新菌种，从其分类学角度暂命名为Streptomycessalilacus。进一步，本专利技术提供一种盐湖链霉菌(Streptomycessalilacus)TRM20170601CGMCCNo.14260发酵液在消毒剂中的应用。通过研究在不同pH值、温度、有机试剂处理条件下链霉菌(Streptomycessalilacus)发酵液对抑制生物膜形成的影响，得到菌种TRM20170601对生物膜形成的最佳抑制条件是pH值11，温度60℃，经乙醚处理。通过实施本专利技术具体技术指标，实现本
技术实现思路
，可以达到以下有益效果：(1)本专利技术提供的盐湖链霉菌(Streptomycessalilacus)TRM20170601CGMCCNo.14260，具有培养条件简单，繁殖快，遗传特性稳定，抑制生物膜形成能力较强的优点。(2)本专利技术提供的盐湖链霉菌(Streptomycessalilacus)TRM20170601CGMCCNo.14260发酵液在消毒剂中应用时，在pH值11，温度60℃，经乙醚处理的条件下，抑制生物膜形成的能力最强，可以使表皮葡萄球菌相对生物膜形成能力低至10.94％，并且在杀菌试验时作用5min后对菌悬液内表皮葡萄球菌、大肠杆菌和铜绿假单胞菌平均杀灭对数值均＞5.00。附图说明图1本文档来自技高网...

【技术保护点】
盐湖链霉菌（

【技术特征摘要】
1.盐湖链霉菌（Streptomycessalilacus）TRM20170601，其特征在于，所述的盐湖链霉菌（Streptomycessalilacus）TRM20170601的CGMCC保藏号为No.14260。2.如权利要求1所述的盐湖链霉菌（Streptomycessalilacus）TRM20170601，其特征在于，所述的盐湖链霉菌（Streptomycessalilacus）TRM20170601最适生长条件为：温度28℃，培养基采用高氏一号培养基、pH7.2~7.4，培养时间4d。3.如权利要求1所述的盐湖链霉菌（Streptomycessalilacus）TRM20170601，其特征在于，所述的盐湖链霉菌（Streptomycessalila...

【专利技术属性】
技术研发人员：张利莉，陈伟，王楠，谢婷婷，高广斌，陈正军，
申请(专利权)人：塔里木大学，
类型：发明
国别省市：新疆,65