原核表达载体及rbFGF‑2表达方法与工程菌和应用技术

本发明专利技术提供了一种高效表达重组牛成纤维细胞生长因子‑2(rbFGF‑2)的方法。本发明专利技术首先根据大肠杆菌密码子使用偏好性，对FGF2基因序列的密码子进行替换，设计合成了rbFGF‑2核苷酸序列全长，构建得到能够表达rbFGF‑2蛋白的表达载体，将该表达载体与分子伴侣质粒先后导入到同一大肠杆菌中进行共表达。本发明专利技术解决了原核生物与真核生物在密码子使用偏好上存在差异，导致外源基因在大肠杆菌体内不能高效表达的问题；同时，通过与分子伴侣共表达，增进目标蛋白质稳定性，显著提高了rbFGF‑2蛋白的产量和活性。

【技术实现步骤摘要】
原核表达载体及rbFGF-2表达方法与工程菌和应用
本专利技术属于生物医药领域，涉及一种优化的生产重组牛成纤维细胞生长因子-2(rbFGF-2)的方法，以及用于该方法的源自pET-15b的原核表达载体、分子伴侣和宿主细胞(即工程菌)。
技术介绍
成纤维细胞生长因子(fibroblastgrowthfactors，FGFs)是一类生物进化上高度保守的多肽，在机体内的许多组织和器官均有分布。成纤维细胞生长因子是一个生长因子大家族，现在已经发现23个家族成员，各家族成员之间具有一定的序列同源性和结构相似性。FGFs在创伤修复、心血管系统疾病、神经系统疾病以及骨软骨再生等方面均发挥重要作用，具有重要的临床应用价值和广阔的市场前景。成纤维细胞生长因子-2(FGF2)具有强大的促进组织修复、血管形成和细胞生长的作用。此外，大量研究已经证明，FGF2在神经发生中发挥关键作用，无论是对于发育阶段还是成人大脑中的干细胞增殖和分化。FGF2/FGFR1信号对中枢神经系统疾病的治疗和干预具有非常好的前景。迄今为止，FGF2已通过基因重组技术利用大肠杆菌外源表达而大规模获得，但普遍存在蛋白表达量低、生物学活本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种源自pET‑15b的原核表达载体，命名为pET‑15b‑rbFGF‑2，其特征在于：其为含有编码rbFGF‑2蛋白的重组DNA，其中所述编码rbFGF‑2蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

【技术特征摘要】
1.一种源自pET-15b的原核表达载体，命名为pET-15b-rbFGF-2，其特征在于：其为含有编码rbFGF-2蛋白的重组DNA，其中所述编码rbFGF-2蛋白的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示。2.按照权利要求1所述的原核表达载体，其特征在于：所含编码rbFGF-2蛋白的核苷酸序列，是选用NdeⅠ+BamHI为酶切位点与载体pET-15b连接的，即编码rbFGF-2蛋白的核苷酸序列装入载体pET-15b中位于NdeⅠ和BamHI之间。3.一种表达重组牛成纤维细胞生长因子-2的方法，其特征在于：将权利要求1或2所述的表达载体pET-15b-rbFGF-2与分子伴侣质粒共同或先后导入到同一大肠杆菌宿主细胞中共表达，可获得诱导表达的rbFGF-2蛋白。4.按照权利要求3所述的方法，其特征在于：所述的分子伴侣质粒为pGro7，伴侣蛋白质为groES-groEL。5.按...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐晓辉，王莉洁，孙丹，何伟，
申请(专利权)人：何伟，
类型：发明
国别省市：辽宁,21