桑叶、石榴皮降血糖药用活性物质水解工艺及降血糖药制造技术

本发明专利技术公开了桑叶、石榴皮降血糖药用活性物质提取工艺，包括桑叶降血糖药用活性物质提取方法和石榴皮降血糖药用活性物质提取方法，石榴皮降血糖药用活性物质提取方法，依次包括以下步骤：烘干、粉碎、加蒸馏水超声波提取上清液，加入单宁酶液和磷酸盐，离心，得到反应液沉淀和上清液分别处理并烘干后研磨成粉。将桑叶和石榴皮活性物质按1:0.5‑1:2的比例进行配比，充分混合均匀。本发明专利技术的优点是：以石榴皮为原料，获得高鞣花酸含量并具有强清除自由基能力的药用活性成分，与以桑叶为原料提取得到的高含量α‑葡糖苷酶抑制剂的药用活性成分合理配比后，能够降低糖尿病患者空腹血糖、餐后血糖，并减小自由基对胰岛β细胞的氧化损伤，改善糖尿病的并发症状。

【技术实现步骤摘要】
桑叶、石榴皮降血糖药用活性物质水解工艺及降血糖药
本专利技术涉及桑叶、石榴皮降血糖药用活性物质水解工艺及降血糖药。
技术介绍
糖尿病是一种常见的以慢性高血糖和糖脂代谢、蛋白质代谢紊乱为主要特点的内分泌疾病，其发病原因主要为胰岛素分泌绝对不足和胰岛抵抗。胰岛素不足时，血清葡萄糖含量持续增高，超过肾脏的重吸收能力，致使大量葡萄糖随尿排泄，引起渗透性利尿，导致机体脱水，脑细胞失水可引起脑功能紊乱直至昏迷，且由于糖尿病病人存在糖的利用障碍，转而通过分解脂肪产生能量，伴随着脂肪分解，酮体生成增加，导致糖尿病酮症酸中毒(杨轩璇.中药降糖药理作用研究进展[J]，河北中医，2004；26(4)：305-308)。研究显示，氧化应激与糖尿病的形成有密切联系，氧化应激产生过量的自由基会导致胰岛β细胞功能损伤，胰岛素分泌量不足及外周胰岛素抵抗，诱发糖尿病的形成，并引起糖尿病神经病、糖尿病视网膜病、糖尿病心脑血管疾病等多种并发症(SelvarajuV,JoshiM,SureshS,SanchezJA,MaulikN,MaulikG.Diabetes,oxidativestress,molecularmechanism,andcardiovasculardisease--anoverview.ToxicolMechMethods2012；22(5):330–335.)。因此治疗糖尿病，除了要控制血糖之外，抑制自由基过量产生而导致的组织细胞氧化损伤也十分必要。桑叶作为一味传统中药在古代就被用来治疗消渴症，《本草纲目》明确记载桑叶“煎之代茗，能止消渴”。现代药理学研究发现桑叶中的多糖、黄酮、生物碱等成分具有降血糖的作用，其中生物碱的降血糖作用最显著，它可显著抑制α-糖苷酶活性，降低碳水化合物的转化吸收(原爱红，马骏，蒋晓峰，等.桑叶中糖苷酶抑制活性组分的筛选及体外活性研究[J].同济大学学报(医学版),2005,26(4):8-11.)。桑叶生物碱中多种已知化合物的降血糖效果已经被诸多报道证实(You-GuiLi,Dong-FengJi,ShiZhong,Tian-BaoLin,Zhi-QiangLv,Gui-YanHu&XinWang.1-deoxynojirimycininhibitsglucoseabsorptionandacceleratesglucosemetabolisminstreptozotocin-induceddiabeticmice.Scientificreports,2013；3:1377；LiY-G,JiD-F,ZhongS,LvZ-Q,LinT-B。You-GuiLi,Dong-FengJi,ShiZhong,Zhi-QiangLv,Tian-BaoLin.CooperativeAnti-DiabeticEffectsofDeoxynojirimycin-PolysaccharidebyInhibitingGlucoseAbsorptionandModulatingGlucoseMetabolisminStreptozotocin-InducedDiabeticMice[J].PlosOne,2013,8(6):e65892.)。石榴皮中多酚化合物鞣花酸已被证实具有很强的抗氧化能力，能够体外清除·OH、超氧阴离子、DPPH·，抑制脂质过氧化，在体内能够降低氧化应激小鼠的肝脏和血液中脂质过氧化标志物丙二醛(MDA)的含量，提高肝脏和血液中总抗氧化能力(T-AOC)，同时提高肝脏中抗氧化酶超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活力(SunYQ,TaoX,MenXM,LiYM,XuZW,WT.Invitroandinvivoantioxidantactivitiesofthreemajorpolyphenoliccompoundsinpomegranatepeel:ellagicacid，punicalin，andpunicalagin.JournalofIntegrativeAgriculture,2017)。但是石榴皮多酚中游离鞣花酸的含量较低，要获得高含量鞣花酸的石榴皮多酚需使石榴皮多酚中鞣花单宁水解释放鞣花酸，提高鞣花酸的含量。因此本专利技术建立了石榴皮多酚鞣花酸的水解工艺，并利用桑叶生物碱的α-糖苷酶抑制剂作用及石榴皮多酚中鞣花酸的清除自由基的能力，将两种药用成合理配比组成配方，一方面降低餐后血糖，另一方面减少自由基导致的胰岛β细胞及其他组织器官氧化损伤，达到治疗糖尿病综合症的目的。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供桑叶、石榴皮降血糖药用活性物质水解工艺及降血糖药，通过两类药用活性物质的相互协同作用，在降低糖尿病患者餐后血糖，改善糖耐量的同时，修复受损的胰岛β细胞功能，达到治疗糖尿病综合症的作用。为了解决上述技术问题，本专利技术是通过以下技术方案实现的：桑叶、石榴皮降血糖药用活性物质提取工艺，包括桑叶降血糖药用活性物质提取方法和石榴皮降血糖药用活性物质提取方法，所述桑叶降血糖药用活性物质提取方法，依次包括以下步骤：A.采摘：采摘桑叶，每年5月至10月；B.干燥：将采摘的桑叶干燥，干燥温度不大于50℃；C.粉碎：粉碎粒度30目至80目；D.加入酒精，然后超声波提取：酒精浓度50-70％，料液的重量比为1：30-50，提取时间4-6小时，提取温度30-50℃，超声功率：1000-1300W，提取完成后细筛过滤去除滤渣，得到提取液进行8000-10000rpm离心，得到上清液；E.将D步骤产生的上清液旋蒸去除酒精，离心收集上清液，上清液用酸型阳离子交换树脂吸附12-24小时，自来水冲洗去杂后，树脂用0.25-0.5mol/L的氨水洗脱，收集洗脱液旋蒸去除氨水，浓缩至小体积后离心得上清夜；F.重复步骤E，将上清液用强酸型阳离子交换树脂吸附2-4小时，自来水冲洗去杂后，树脂用0.25-0.5mol/L的氨水洗脱，收集洗脱液旋蒸去除氨水，浓缩至小体积后冷冻或喷雾干燥，得到桑叶生物碱的原料粉1；所述石榴皮降血糖要用活性物质提取方法，依次包括以下步骤：G.采摘：采摘桑叶，每年5月至10月；H.干燥：将采摘的桑叶干燥，干燥温度不大于50℃；I.粉碎：粉碎粒度30目至80目；J.加入酒精，然后超声波提取：酒精浓度50-70％，料液的重量比为1：30-50，提取时间4-6小时，提取温度30-50℃，超声功率：1000-1300W，提取完成后细筛过滤去除滤渣，得到提取液进行8000-10000rpm离心，得到上清液；K.将D步骤产生的上清液旋蒸去除酒精，离心收集上清液，上清液用酸型阳离子交换树脂吸附12-24小时，自来水冲洗去杂后，树脂用0.25-0.5mol/L的氨水洗脱，收集洗脱液旋蒸去除氨水，浓缩至小体积后离心得上清夜；L.重复步骤E，将上清液用强酸型阳离子交换树脂吸附2-4小时，自来水冲洗去杂后，树脂用0.25-0.5mol/L的氨水洗脱，收集洗脱液旋蒸去除氨水，浓缩至小体积后冷冻或喷雾干燥，得到桑叶生物碱的原料粉1；所述石榴皮降血糖药用活性物质提取方法，依次包括以下步骤：a)采摘成熟石榴果实，剥下果皮于不大于50℃条件下干燥；b)将干燥石榴皮粉碎，过30目至80目筛；c)提取：石榴本文档来自技高网...

【技术保护点】
桑叶、石榴皮降血糖药用活性物质提取工艺，其特征在于：包括桑叶降血糖要用活性物质提取方法和石榴皮降血糖要用活性物质提取方法，所述桑叶降血糖要用活性物质提取方法，依次包括以下步骤：A.采摘：采摘桑叶，每年5月至10月；B.干燥：将采摘的桑叶干燥，干燥温度不大于50℃；C.粉碎：粉碎粒度30目至80目；D.加入酒精，然后超声波提取：酒精浓度50‑70％，料液的重量比为1：30‑50，提取时间4‑6小时，提取温度30‑50℃，超声功率：1000‑1300W，提取完成后细筛过滤去除滤渣，得到提取液进行8000‑10000rpm离心，得到上清液；E.将D步骤产生的上清液旋蒸去除酒精，离心收集上清液，上清液用酸型阳离子交换树脂吸附12‑24小时，自来水冲洗去杂后，树脂用0.25‑0.5mol/L的氨水洗脱，收集洗脱液旋蒸去除氨水，浓缩至小体积后离心得上清夜；F.重复步骤E，将上清液用强酸型阳离子交换树脂吸附2‑4小时，自来水冲洗去杂后，树脂用0.25‑0.5mol/L的氨水洗脱，收集洗脱液旋蒸去除氨水，浓缩至小体积后冷冻或喷雾干燥，得到桑叶生物碱的原料粉1；所述石榴皮降血糖药用活性物质提取方法，依次包括以下步骤：a)采摘成熟石榴果实，剥下果皮于不大于50℃条件下干燥；b)将干燥石榴皮粉碎，过30目至80目筛；c)提取：石榴皮粉按1:30‑1:50(w/v)加入蒸馏水，超声功率：1000‑1300W，60℃‑80℃提取4‑6小时；提取完成后真空抽滤除去滤渣，收集富含多酚的上清液；d)将c步骤中的多酚上清液中按50:1‑100:1(v/v)的比例加入10‑40U/L单宁酶液，并用磷酸盐缓冲液调节酸碱度至pH5‑pH5.5，37℃‑45℃反应过夜；e)将d步骤中反应液8000‑1000r/min离心，倾出上清液，沉淀用水洗涤后烘干保存，倾出的上清液85‑100℃水浴中5‑15分钟灭活单宁酶，8000‑1000r/min离心，弃去蛋白沉淀，上清液用弱极性大孔树脂吸附过夜，蒸馏水冲洗去除缓冲盐、糖类等杂质，树脂用80‑95％乙醇洗脱，收集洗脱液旋转蒸发去掉酒精，浓缩至小体积后烘箱烘干或冷冻干燥得到干燥固体，该固体与前述烘干的沉淀合并，共同于研磨仪中磨成细粉，该细粉即为石榴皮多酚的原料粉2。...

【技术特征摘要】
1.桑叶、石榴皮降血糖药用活性物质提取工艺，其特征在于：包括桑叶降血糖要用活性物质提取方法和石榴皮降血糖要用活性物质提取方法，所述桑叶降血糖要用活性物质提取方法，依次包括以下步骤：A.采摘：采摘桑叶，每年5月至10月；B.干燥：将采摘的桑叶干燥，干燥温度不大于50℃；C.粉碎：粉碎粒度30目至80目；D.加入酒精，然后超声波提取：酒精浓度50-70％，料液的重量比为1：30-50，提取时间4-6小时，提取温度30-50℃，超声功率：1000-1300W，提取完成后细筛过滤去除滤渣，得到提取液进行8000-10000rpm离心，得到上清液；E.将D步骤产生的上清液旋蒸去除酒精，离心收集上清液，上清液用酸型阳离子交换树脂吸附12-24小时，自来水冲洗去杂后，树脂用0.25-0.5mol/L的氨水洗脱，收集洗脱液旋蒸去除氨水，浓缩至小体积后离心得上清夜；F.重复步骤E，将上清液用强酸型阳离子交换树脂吸附2-4小时，自来水冲洗去杂后，树脂用0.25-0.5mol/L的氨水洗脱，收集洗脱液旋蒸去除氨水，浓缩至小体积后冷冻或喷雾干燥，得到桑叶生物碱的原料粉1；所述石榴皮降血糖药用活性物质提取方法，依次包括以下步骤：a)采摘成熟石榴果...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙雨晴，李有贵，徐子伟，陶新，钟石，朱俭勋，计东风，
申请(专利权)人：浙江省农业科学院，
类型：发明
国别省市：浙江,33