改变CART细胞中的基因表达及其用途制造技术

本发明专利技术涉及使用能够下调内源基因表达——其选自TCRα链、TCRβ链、β‑2微球蛋白、HLA分子、CTLA‑4、PD1和FAS——的核酸生成修饰的T细胞的组合物和方法，其进一步包括编码修饰的T细胞受体(TCR)——其包括对靶细胞上表面抗原的亲和力——的核酸或编码嵌合抗原受体(CAR)的电穿孔的核酸。还包括用于过继疗法和治疗病症比如自身免疫性疾病的方法和包含修饰的T细胞的药物组合物。

Alteration of gene expression in CART cells and uses thereof

The present invention relates to compositions and methods of use can down regulate the endogenous gene expression of a nucleic acid generation modification -- selected from the group consisting of TCR alpha chain, TCR beta chain, beta 2 microglobulin, HLA, CTLA 4, PD1 molecular and FAS - T cells, which further includes encoding a modified T cell receptor (TCR) - including on the surface of the target cell antigen affinity or nucleic acid encoding a chimeric antigen receptor (CAR) nucleic acid electroporation. Also included are methods for adoptive therapy and treatment of diseases such as autoimmune diseases and pharmaceutical compositions containing modified T cells.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】改变CART细胞中的基因表达及其用途相关申请的交叉引用本申请根据35U.S.C.§119(e)有权享有在2014年10月31日提交的美国临时专利申请号62/073,651的优先权，所述临时专利申请由此通过引用以其全部并入本文。关于联邦资助的研究或开发的声明本专利技术在美国国立卫生研究院给予的CA120409下利用政府支持完成。政府拥有本专利技术中的某些权利。
技术介绍
使用嵌合抗原受体(CAR)修饰的T细胞的过继细胞转移(ACT)已经显示成为用于癌症治疗的有希望的策略(Louis等，2011,Blood118:6050-6056；Kochenderfer等，2010,Blood116:3875-3886和Porter等，2011,NEnglJMed365:725-733)。使用慢病毒或逆转录病毒载体的整合关联的安全关注是对用于ACT的细胞修饰的主要关注。已经取得一些进步以避免中靶(on-target)或脱靶(off-target)的有害的副作用，比如使用T细胞受体(TCR)或CARRNA电穿孔进行T细胞的RNA转染(Zhao,2006,MolTher13:151-159；Mitchell等本文档来自技高网...

【技术保护点】
修饰的T细胞，其包括：能够下调内源基因的基因表达的核酸，所述内源基因选自TCRα链、TCRβ链、β‑2微球蛋白、HLA分子、CTLA‑4、PD1和FAS；和编码嵌合抗原受体(CAR)的核酸，所述嵌合抗原受体(CAR)包括抗原结合结构域、跨膜结构域和共刺激分子的胞内结构域。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.10.31 US 62/073,6511.修饰的T细胞，其包括：能够下调内源基因的基因表达的核酸，所述内源基因选自TCRα链、TCRβ链、β-2微球蛋白、HLA分子、CTLA-4、PD1和FAS；和编码嵌合抗原受体(CAR)的核酸，所述嵌合抗原受体(CAR)包括抗原结合结构域、跨膜结构域和共刺激分子的胞内结构域。2.权利要求1所述的修饰的T细胞，其中能够下调基因表达的所述核酸选自反义RNA、antigomerRNA、siRNA、shRNA和CRISPR系统。3.权利要求2所述的修饰的T细胞，其中所述CRISPR系统包括pAd5/F35-CRISPR载体。4.权利要求1所述的修饰的T细胞，其中所述CAR的抗原结合结构域包括选自单克隆抗体、多克隆抗体、合成抗体、人抗体、人源化抗体、单结构域抗体、单链可变片段、和其抗原结合片段的抗体。5.权利要求1所述的修饰的T细胞，其中所述CAR的抗原结合结构域特异性地结合靶细胞上的抗原。6.权利要求1所述的修饰的T细胞，其中所述CAR的胞内结构域包括双信号传导结构域。7.权利要求1所述的修饰的T细胞，进一步包括编码共刺激分子的外源性核酸。8.权利要求7所述的修饰的T细胞，其中所述共刺激分子选自CD3、CD27、CD28、CD83、CD86、CD127、4-1BB、4-1BBL、PD1和PD1L。9.权利要求8所述的修饰的T细胞，其中所述CD3包括至少两种不同的CD3链。10.权利要求9所述的修饰的T细胞，其中所述不同的CD3链是CD3ζ链和CD3ε链。11.用于生成修饰的T细胞的方法，其包括：将能够下调内源基因的基因表达的核酸引入T细胞，所述内源基因选自TCRα链、TCRβ链、β-2微球蛋白、HLA分子、CTLA-4、PD1和FAS；并且引入编码嵌合抗原受体(CAR)的核酸，所述嵌合抗原受体(CAR)包括抗原结合结构域、跨膜结构域。12.权利要求11所述的方法，其中能够下调基因表达的所述核酸选自反义RNA、antigomerRNA、siRNA、shRNA和CRISPR系统。13.权利要求12所述的方法，其中所述CRISPR系统包括pAd5/F35-CRISPR载体。14.权利要求11所述的方法，其中所述CAR的抗原结合结构域包括选自单克隆抗体、多克隆抗体、合成抗体、人抗体、人源化抗体、单结构域抗体、单链可变片段、和其抗原结合片段的抗体。15.权利要求11所述的方法，其中所述CAR的抗原结合结构域特异性地结合靶细胞上的抗原。16.权利要求11所述的方法，其中所述CAR的胞内结构域包括双信号传导结构域。17.权利要求11所述的方法，其中所述T细胞获得自外周血单核细胞、脐带血细胞、纯化的T细胞群和T细胞系。18.权利要求11所述的方法，其中所述方法进一步包括扩展所述T细胞。19.权利要求18所述的方法，其中扩展所述T细胞的步骤包括使用选自flt3-L、IL-1、IL-3和c-kit配体的因子培养所述T细胞。20.权利要求11所述的方法，进一步包括冷藏所述T细胞。21.权利要求20所述的方法，进一步包括在将所述核酸引入所述T细胞之前解冻所述冷藏的T细胞。22.权利要求11所述的方法，其中引入所述核酸选自转导所述扩展的T细胞、转染所述扩展的T细胞和电穿孔所述扩展的T细胞。23.权利要求11所述的...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵阳兵，J·任，X·刘，C·H·琼，
申请(专利权)人：宾夕法尼亚大学董事会，
类型：发明
国别省市：美国,US