一种沉香树籽萃取物、制备方法及其应用于抗过敏的用途技术

一种沉香树籽萃取物、制备方法及其应用于抗过敏的用途，指一种由沉香树籽经萃取、分离纯化后的萃取物具有抗过敏的活性，而可应用于制备抗过敏药物的用途。

Ligaloes seed extract, preparation method and its application to the use of anti allergy

Ligaloes seed extract, preparation method and its application to the use of anti allergy, refers to a kind of incense tree by the extraction, separation and purification of the extract has anti allergic activity, and can be used in the preparation of anti allergic drug use.

【技术实现步骤摘要】
一种沉香树籽萃取物、制备方法及其应用于抗过敏的用途
本专利技术为一种沉香树(Aquilariamalaccensis)籽萃取物的制备方法，及该萃取物应用于抗过敏的用途。
技术介绍
由于全球环境随工业的发展使污染随的增加，且因土地开发的因素，造成绿地、森林(如：巴西的雨林)大幅减少，使环境气候改变，造成罹患过敏性疾病的患者逐年增加，其罹病年龄层也有下降的趋势；而过敏性疾病是免疫系统接触环境中部分对一般人影响不大的过敏原因子后，所引发的一系列超敏反应现象；而人体对于某些因子过度反应的现象，包含过敏性鼻炎、食物过敏、荨麻疹、异位性皮肤炎、哮喘与全身型过敏性反应等，症状可能有红眼、引起搔痒的皮疹、流鼻水、呼吸困难与肿胀等。而过敏反应中由免疫球蛋白E(IgE)为媒介的过敏，是一种常见的免疫系统失调的反应，其会与过敏原结合，并释放组织胺等引起发炎的化学物质，过敏的治疗包括避开已知的过敏原和使用皮质类固醇与抗组织胺药；当严重过敏时，则会于静脉注射肾上腺素，借以抑制细胞的过敏反应，特别的是，在IgE媒介的过敏反应中，例如过敏性鼻炎、急性气喘和异位性湿疹，肥大细胞的去颗粒(β-葡萄糖醛酸酶与组织胺的释放)扮演着关键的角色；在体外过敏反应试验中，活化的肥大细胞(RBL-2H3细胞)会释出β-葡萄糖醛酸酶与组织胺。虽然目前过敏症状可以治疗，但可用的药物在长期使用的情况下会容易引起不良反应，而因天然物不仅容易取得且成份组成较合成药物安全，因此寻找有活性的天然物作为治疗过敏的替代药物，实为目前业界所欲解决的课题。就以沉香树(Aquilariamalaccensis)而言，其是属于瑞香科植物，为珍贵的芳香树脂来源，该树脂作用为植物的防御机制，用来抵御病原体的入侵，其可作为强心剂、驱风、平喘、壮阳药和涩补之用，而且对治疗腹泻、痢疾、痛风、风湿、瘫痪以及寄生虫有效，亦对治疗皮肤病有益；另外，沉香亦被发现具有抗忧郁、抗神经发炎、镇痛、抗发炎、抗氧化、抗菌等活性，而在体内试验中亦具有降血糖以及缓泻效果。尤其，沉香树的茎与树干的酒精萃取物具有强心的作用、对人类表皮癌细胞与P-388淋巴白血球细胞的试管内实验具有细胞毒杀效果；而其水萃物则显示具有抗锥虫、抗菌以及体内体外抗过敏的功效；过去曾由沉香(A.malaccensis)树干分离出一个佛波酯化合物，名为12-O-(2Z，4E，6E)-deca-2，4，6-trienoylphorbol-13-acetate，被认为具有刺激性、促炎性和促癌性者，但其并未针对其抗过敏的活性深入研究，故该化合物抗过敏的活性并不可知。另外，由于利用沉香树的茎与树干作萃取，且因沉香树的生长速度较为缓慢，其并无法大量、有效率提供茎、树干来萃取；有鉴于此，本专利技术人等遂以可较易取得且不影响沉香树生长的沉香树(Aquilariamalaccensis)籽来试验研究，使其可提供治疗过敏替代药物的天然物，终于构思出本案且确已得相关研究成果，而完成本专利技术。
技术实现思路
本专利技术所要解决的主要技术问题在于，克服现有技术存在的上述缺陷，而提供一种沉香树籽萃取物、制备方法及其应用于抗过敏的用途，其可有效制备可抗过敏药物的沉香树籽萃取物及其制备方法；拥有将沉香树籽萃取物应用于抗过敏的用途。本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案是：一种应用于抗过敏药物的沉香树籽萃取物的制备方法，包括如下的步骤：(a)将沉香树(Aquilariamalaccensis)籽经阴干、磨粉后以90％乙醇萃取3次，并经减压浓缩抽干后获得乙醇萃取物(EtOH)；(b)以水(water)及乙酸乙酯(EtOAc)对乙醇萃取物(EtOH)进行3次等比例的液液层析进行，以获得乙酸乙酯划分层(EtOAclayer)及水层(H2Olater)；(c)以正己烷(n-hex)和90％甲醇水溶液(MeOH)对乙酸乙酯划分层(EtOAclayer)进行液液层析，以获得正己烷划分层(n-hexlayer)与甲醇划分层(MeOHlayer)；(d)将甲醇划分层(MeOHlayer)以硅胶管柱层析，借由正己烷(n-hex)∶二氯甲烷(DCM)∶甲醇(MeOH)以6∶3∶1、6∶4∶1、6∶6∶1、6∶8∶1、6∶10∶1、6∶10∶2的比例所组成的冲提液进行梯度冲提，从而获得6个划分层AM1、AM2、AM3、AM4、AM5、AM6；(e)将AM4划分层以1∶1比例的二氯甲烷(DCM)∶甲醇(MeOH)的葡聚醣凝胶LH-20(SephadexLH-20)管柱进行分离，从而获得8个次划分层AM4-1、AM4-2、AM4-3、AM4-4、AM4-5、AM4-6、AM4-7、AM4-8；(f)将AM4-3次划分层经由硅胶管柱层析，以1∶10至4∶1比例的乙酸乙酯∶正己烷进行梯度冲堤，从而分离出15个子划分层AM4-3-1、AM4-3-2、AM4-3-3、AM4-3-4、AM4-3-5、AM4-3-6、AM4-3-7、AM4-3-8、AM4-3-9、AM4-3-10、AM4-3-11、AM4-3-12、AM4-3-13、AM4-3-14及AM4-3-15；(g)将AM4-4次划分层经由硅胶管柱层析以1∶15～4∶1比例的乙酸乙酯∶正己烷进行梯度冲堤，从而分离出12个子划分层AM4-4-1、AM4-4-2、AM4-4-3、AM4-4-4、AM4-4-5、AM4-4-6、AM4-4-7、AM4-4-8、AM4-4-9、AM4-4-10、AM4-4-11、AM4-4-12；借由上述的步骤，即可由AM4-4-9子划分层获得一新佛波酯化合物I，其如下式(I)的结构，而由上述AM4-3-6子划分层及AM4-4-3子划分层获得一新佛波酯化合物II，其结构如下式(II)：再，由上述AM4-3-13子划分层获得一新佛波酯化合物III，其结构如下式(III)：另，由上述AM4-3-13子划分层获得一新佛波酯化合物IV，其结构如下式(IV)：再，由上述AM4-4-7子划分层及AM4-4-8子划分层可获得已知佛波酯化合物V及佛波酯化合物VI，该佛波酯化合物V的结构如下式(V)，该佛波酯化合物VI的结构如下式(VI)：故，借由上述结构的佛波酯化合物，即可用以制备抗过敏药物，以应用于抗过敏用途。本专利技术的有益效果是，其可有效制备可抗过敏药物的沉香树籽萃取物及其制备方法；拥有将沉香树籽萃取物应用于抗过敏的用途。附图说明下面结合附图和实施例对本专利技术进一步说明。图1是本专利技术的流程图。图2是本专利技术AM4-3次划分层分离以获得15个子划分层的流程图。图3是本专利技术AM4-4次划分层分离以获得12个子划分层的流程图。图4是乙醇萃取物(EtOH)、甲醇划分层(MeOH)、AM4划分层以及AM4-4次划分层的核磁共振光谱的氢谱比较图。图5是本专利技术佛波酯化合物I的核磁共振的氢谱。图6是本专利技术佛波酯化合物I的核磁共振的碳谱。图7是本专利技术佛波酯化合物II的核磁共振的氢谱。图8是本专利技术佛波酯化合物II的核磁共振的碳谱。图9是本专利技术佛波酯化合物III的核磁共振的氢谱。图10是本专利技术佛波酯化合物III的核磁共振的碳谱。图11是本专利技术佛波酯化合物IV的核磁共振的氢谱。图12是本专利技术佛波酯化合物IV的核磁共振的碳谱。图13是本专利技术佛波酯化合物V的核磁共振的氢本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种应用于抗过敏药物的沉香树籽萃取物的制备方法，其特征在于，包括如下的步骤：(a)将沉香树籽经阴干、磨粉后以90％乙醇萃取3次，并经减压浓缩抽干后获得乙醇萃取物；(b)以水及乙酸乙酯对乙醇萃取物进行3次等比例的液液层析进行，以获得乙酸乙酯划分层；(c)以正己烷和90％甲醇水溶液对乙酸乙酯层液液层析，以获得正己烷划分层与甲醇划分层；(d)将甲醇划分层以硅胶管柱层析，借由正己烷∶二氯甲烷∶甲醇以6∶3∶1、6∶4∶1、6∶6∶1、6∶8∶1、6∶10∶1、6∶10∶2的比例所组成的冲提液进行梯度冲提，从而获得6个划分层AM1、AM2、AM3、AM4、AM5、AM6；(e)将AM4划分层以1∶1比例的二氯甲烷∶甲醇的葡聚醣凝胶LH‑20管柱进行分离，从而获得8个次划分层AM4‑1、AM4‑2、AM4‑3、AM4‑4、AM4‑5、AM4‑6、AM4‑7、AM4‑8；(f)将AM4‑3次划分层经由硅胶管柱层析，以1∶10至4∶1比例的乙酸乙酯∶正己烷进行梯度冲堤，从而分离出15个子划分层AM4‑3‑1、AM4‑3‑2、AM4‑3‑3、AM4‑3‑4、AM4‑3‑5、AM4‑3‑6、AM4‑3‑7、AM4‑3‑8、AM4‑3‑9、AM4‑3‑10、AM4‑3‑11、AM4‑3‑12、AM4‑3‑13、AM4‑3‑14及AM4‑3‑15；(g)将AM4‑4次划分层经由管柱层析以1∶15～4∶1比例的乙酸乙酯∶正己烷进行梯度冲堤，从而分离出12个子划分层AM4‑4‑1、AM4‑4‑2、AM4‑4‑3、AM4‑4‑4、AM4‑4‑5、AM4‑4‑6、AM4‑4‑7、AM4‑4‑8、AM4‑4‑9、AM4‑4‑10、AM4‑4‑11、AM4‑4‑12；借由上述步骤，提供一种可获得丰富佛波酯的划分层及萃取物的制备方法。...

【技术特征摘要】
2016.03.16 TW 1051080651.一种应用于抗过敏药物的沉香树籽萃取物的制备方法，其特征在于，包括如下的步骤：(a)将沉香树籽经阴干、磨粉后以90％乙醇萃取3次，并经减压浓缩抽干后获得乙醇萃取物；(b)以水及乙酸乙酯对乙醇萃取物进行3次等比例的液液层析进行，以获得乙酸乙酯划分层；(c)以正己烷和90％甲醇水溶液对乙酸乙酯层液液层析，以获得正己烷划分层与甲醇划分层；(d)将甲醇划分层以硅胶管柱层析，借由正己烷∶二氯甲烷∶甲醇以6∶3∶1、6∶4∶1、6∶6∶1、6∶8∶1、6∶10∶1、6∶10∶2的比例所组成的冲提液进行梯度冲提，从而获得6个划分层AM1、AM2、AM3、AM4、AM5、AM6；(e)将AM4划分层以1∶1比例的二氯甲烷∶甲醇的葡聚醣凝胶LH-20管柱进行分离，从而获得8个次划分层AM4-1、AM4-2、AM4-3、AM4-4、AM4-5、AM4-6、AM4-7、AM4-8；(f)将AM4-3次划分层经由硅胶管柱层析，以1∶10至4∶1比例的乙酸乙酯∶正己烷进行梯度冲堤，从而分离出15个子划分层AM4-3-1、AM4-3-2、AM4-3-3、AM4-3-4、AM4-3-5、AM4-3-6、AM4-3-7、AM4-3-8、AM4-3-9、AM4-3-10、AM4-3-11、AM4-3-12、AM4-3-13、AM4-3-14及AM4-3-15；(g)将AM4-4次划分层经由管柱层析以1∶15～4∶1比例的乙酸乙酯∶正己烷进行梯度冲堤，从而分离出12个子划分层AM4-4-1、AM4-4-2、AM4-4-3、AM4-4-4、AM4-4-5、AM4-4-6、AM4-4-7、AM4-4-8、AM4-4-9、AM4-4-10、AM4-4-11、AM4-4-12；借由上述步骤，提供一种可获得丰富佛波酯的划分层及萃取物的制备方法。2.一种佛波酯化合物I，取自上述权利要求1的制备方法中AM4-4-9子划分层中的化合物，其名为12-O-(2Z，4E，6E)-tetradeca-2，4，6-trienoylphorbol-13-acetate，其结构特征如下式(I)：3.一种佛波酯化合物II，其名为12-deoxy-13-O-acetoylphorbol-20-octadec-9-enoate取自上述权利要求1的制备方法中AM4-4-3子划分层中的化合物，其结构特征如下式(II)：4.一种佛波酯化合物III，其名为12-O-(2E，4E)-6-oxohexa-2，4-dienoylphorbol-13-acetate，取自上述权利要求1的制备方法中AM4-4-3子划分层中的化合物，其结构特征如下式(III)：5.一种佛波酯化合物IV，其名为12-O-(2E，4E)-6，7-dihydroxytetradeca-2，4-dienoylphorbol-13-acetate，取自上述权利要求1的制备方法中AM4-4-3子划分层中的化合物，其结构特征如下式(IV)：6.一种可应用于制备抗过敏药物的佛波酯化合物(12-O-(2Z，4E，6E)-tetradeca-2，4，6-trienoylphorbol-13-acetat...

【专利技术属性】
技术研发人员：张芳荣，陈炳宏，徐雪莹，吴永昌，谢震，谢慧萍，
申请(专利权)人：慧颖应用生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：中国台湾,71