车叶草苷酸在制备治疗肾纤维化药物中的应用制造技术

本发明专利技术涉及车叶草苷酸在制备治疗肾纤维化药物中的应用，该应用中所述的治疗肾纤维化药物可以是常规的口服制剂或注射剂。本发明专利技术所述应用中的药物可抑制LPS诱导的RAW 264.7细胞TNF‑α、IL‑6、NO水平的升高和炎症因子的表达，治疗各种原因引起的肾炎及继发肾纤维化的效果显著。

Asperuloside acid use in preparing medicine for treating kidney fibrosis.

The present invention relates to asperuloside acid use in preparing medicine for treating renal fibrosis in the treatment of renal fibrosis, the drug in the application can be conventional oral preparation or injection. The expression of the application of the invention of the drug could inhibit LPS induced RAW 264.7 cells TNF alpha, IL 6 and NO levels and inflammatory factors caused by various reasons, treatment of renal fibrosis and the effect of secondary glomerulonephritis.

【技术实现步骤摘要】
车叶草苷酸在制备治疗肾纤维化药物中的应用
本专利技术涉及化合物车叶草苷酸的特定治疗活性，具体涉及含化合物车叶草苷酸的治疗肾脏的药物。
技术介绍
肾纤维化(包括肾小球硬化和肾间质纤维化)是各种原因引起的慢性肾病的主要病理特征之一，以过量细胞外基质在肾间质积聚、肾脏组织结构破坏及肾功能进行性下降为特征，是多种慢性肾脏疾病最终导致肾功能衰竭的主要病理基础和共同途径(姜汉杰，李婉，王辰.丹参粉针剂对单侧输尿管结扎大鼠肾纤维化的保护作用.中国新药杂志.2015,24(22),2606-2611.)。肾间质纤维化程度与肾功能损伤程度关系密切，而肾间质纤维化一旦出现，往往预示着预后不良，有效地防治肾间质纤维化成为减缓慢性肾脏病发展的一个契机。但目前针对肾纤维化的治疗措施却十分有限，主要是积极治疗原发疾病和继发因素(如糖尿病，高血压，高尿酸血症等)，临床口服的药物有ACEI，TGF-β抗体，干扰素等，但其疗效并不显著。因此寻找对肾纤维化具有明确治疗效果的药物具有重要的临床意义。白花蛇舌草(HedyotisdiffusaWilld)系茜草科植物，始载于《广西中药志》，收载于2015年版《中国人民共和国》(一部)附录，为中成药的原料药。其性甘、寒，味苦，归胃、大肠、小肠经，具有清热解毒、利湿消肿、活血定痛的功效，应用广泛，用于抗肿瘤、调节免疫、抗氧化、抗炎等病症，具有清热解毒及利湿消痈之功效。车叶草苷酸(Asperulosidicacid)是从白花蛇舌草中提取的一种有效单体，但未见将其应用于治疗肾纤维化的研究报道。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是提供车叶草苷酸的新用途，该新用途是车叶草苷酸制药中的应用。上述应用具体是，车叶草苷酸在制备治疗肾纤维化药物中的应用，其中所述的车叶草苷酸(asperulosideacid)的化学结构如下式所示：上述应用中，所述的车叶草苷酸由以下方法制得：取白花蛇舌草加入体积浓度为75％的乙醇回流提取2次，每次1h，合并提取液减压浓缩，活性炭脱色，高速离心，取上清，真空干燥，得白花蛇舌草粗提物；将粗提物采用体积浓度为30％的甲醇溶解，以ODS柱为固定相，体积浓度为30％的甲醇洗脱，回收甲醇后，真空干燥；然后，以体积浓度为5％的甲醇为流动相，采用制备色谱法分离获得车叶草苷酸。上述应用中，所述的治疗肾纤维化药物可以是常规的口服制剂或注射剂。本专利技术所述应用中的药物可抑制LPS诱导的RAW264.7细胞TNF-α、IL-6、NO水平的升高和炎症因子的表达，治疗各种原因引起的肾炎及继发肾纤维化的效果显著。附图说明图1为各组动物肾功能指标的柱状图。图2为各组动物血清中7天，10天，14天TNF-α、IL-1β、IL-6表达量的柱状图。图3为各组动物的肾组织HE染色切片的显微照片，其中，A为空白组，B为模型组，C为低剂量组，D为中剂量组，E为高剂量组。图4为各组动物的肾组织Masson染色切片的显微照片，A为空白组，B为模型组，C为低剂量组，D为中剂量组，E为高剂量组。图5为LPS诱导的RAW264.7cells细胞IL-6、TNF-α、NO表达水平的柱状图。具体实施方式实施例1(制备车叶草苷酸)取10kg白花蛇舌草加入10倍量体积浓度为75％乙醇回流提取2次，每次1h，60℃减压浓缩至相对密度为1.10-1.20；往浓缩液中加入重量百分比为0.5％的活性炭脱色，高速离心，取上清，真空干燥，得白花蛇舌草粗提物；将粗提物采用30％甲醇溶解，以ODS开口柱为固定相，30％甲醇水溶液洗脱，回收甲醇后，真空干燥。干燥后样品采用5％甲醇溶解，采用高速逆流色谱法分离获得车叶草苷酸。制备条件：YMC-PackODS-A色谱柱(20×250mm，5μm)为色谱柱，以体积浓度为5％的甲醇为流动相，等梯度洗脱60min；检测波长235nm；进样体积100μL。实施例2(片剂)采用湿法制粒的工艺，称量实施例1制备的车叶草苷酸粉末10mg，一水乳糖50-100g和微晶纤维素25-50mg，内加羧甲基纤维素钠1.2mg，过60目筛，混合，再次过筛分散，混合，配制6％的羟丙甲纤维素E5溶液，加入6％的羟丙甲纤维素E5溶液制粒，过20目筛，置于烘箱60℃干燥3h，再加入羧甲基纤维素钠1.2mg，胶体二氧化硅1.2mg和硬脂酸镁1-3mg，混合，使用6.5mm直径的浅弧圆形冲压片，即得。实施例3(丸剂)筛选的处方为：药物︰基质质量比为1︰150，PEG4000:PEG6000质量比为2︰1，料温85℃，滴距5cm，冷却温度10℃，冷凝液为植物油。按处方量精密称取实施例1制备的车叶草苷酸粉末于适量纯化水中，溶解后，加入PEG4000和PEG6000的混合物，置于80℃以上的磁力搅拌器水浴锅中，加热搅拌至全部熔融后，两者混合均匀。用滴管滴入滴丸装置中，控制合适的滴速，使其沉降于冷凝液中，待其冷却成型，取出滴丸，用滤纸除去冷却剂，自然晾干，选丸。即得。实施例4(胶囊剂)称量实施例1制备的车叶草苷酸粉末10mg，一水乳糖50-100g和微晶纤维素25-50g，内加羧甲基纤维素钠1.2mg，过60目筛，混合，再次过筛分散，混合，配制6％的羟丙甲纤维素E5溶液，加入6％的羟丙甲纤维素E5溶液制粒，过20目筛，置于烘箱60℃干燥3h，再加入羧甲基纤维素钠1.2mg，胶体二氧化硅1.2mg和硬脂酸镁1-3mg，混合，填充于羟丙甲纤维素透明胶囊中，即得。实施例5(注射剂)处方为：车叶草苷酸1.04g，依地酸二钠0.0005g，碳酸氢钠0.49g，注射用水加至10ml，亚硫酸氢钠0.02g。在配置的容器中，加处方量80％的注射用水，通氮气饱和，加车叶草苷酸溶解后，分次缓慢加入碳酸氢钠，搅拌使其完全溶解，加入预先配置好的依地酸二钠和亚硫酸氢二钠溶液，搅拌均匀，调节药液pH6.0-6.2，添加氮气饱和的注射用水至足量。用微孔滤膜过滤，溶液中通氮气，并在氮气流下灌封，最后煮沸15min灭菌，即得。实施例6(效果实验)一、UUO肾纤维化动物的建立雄性SD大鼠30只，200-250g，随机分为空白对照组，模型组，低剂量组，中剂量组，高剂量组，每组均6只大鼠。除空白对照组外，其余四组行左侧输尿管结扎术(UUO)构造肾纤维化模型。术前禁食不禁水12h，术前称重，UUO组以10％的水合氯醛(0.3ml/100g)腹腔注射麻醉后，俯卧位固定、局部剪毛、常规皮肤消毒，行左侧耻骨上切口，沿左肾下极寻找到左输尿管，用5－0号丝线上下结扎2处，从中剪断输尿管以防逆行感染，术后把肠胃置于原位，分层缝合关闭腹腔。缝合结束后，先用碘伏消毒，后用75％乙醇擦拭伤口。造模后，待老鼠清醒，腹腔内注射青霉素(160万单位8ml的生理盐水溶解，每次用0.25ml/只的剂量，皮下注射)，连续两天，预防感染。术后第二天，模型组按0.5ml/100g/d的剂量腹腔注射0.9％Nacl溶液，低、中、高剂量组分别按10mg/kg/d、20mg/kg/d和40mg/kg/d的剂量腹腔注射车叶草苷酸溶液，连续14天，每天1次。各组大鼠分别于术后7天，10天，14天眼眶取血，收集全血后静置30分钟，3500r/min离心15分钟，转移血清至离心管，置于-20℃冰箱，备用；在第13天收集给药后0-6小时时本文档来自技高网...

【技术保护点】
车叶草苷酸在制备治疗肾纤维化药物中的应用，其中所述的车叶草苷酸的化学结构如下式所示：

【技术特征摘要】
1.车叶草苷酸在制备治疗肾纤维化药物中的应用，其中所述的车叶草苷酸的化学结构如下式所示：2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的治疗肾纤维化药物是常规的口服制剂或注射剂。3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述的车叶草苷酸由以下方法制得：取白花蛇舌草加入体积浓度为75％的...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘孟华，卢宪媛，唐斓，刘叔文，
申请(专利权)人：南方医科大学，
类型：发明
国别省市：广东,44