具有人源化分化簇47基因的非人动物制造技术

本发明专利技术提供了非人动物及其制备和使用方法和组合物，其中所述非人动物包含人源化的内源分化簇(CD)基因，具体地讲人源化的CD47基因。在一些实施方案中，所述非人动物可描述为具有内源CD47基因的遗传修饰，使得所述非人动物表达包括人部分和非人部分(例如，鼠科部分)的CD47多肽。

A non-human animal with a humanized differentiation cluster 47 gene

The present invention provides non-human animals, and methods and compositions for the preparation and use thereof, wherein the non-human animal comprises a humanized endogenous differentiation cluster (CD) gene, specifically a humanized CD47 gene. In some embodiments, the non-human animal may be described as a genetic modification with an endogenous CD47 gene such that the non-human animal expresses a CD47 polypeptide comprising a human and a non-human part (e.g., a mouse section).

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】相关专利申请的交叉引用本申请要求2014年12月5日提交的美国专利申请序列号62/087,992的优先权，该专利据此全文以引用方式并入本文。序列表以引用方式并入序列表为2015年11月23日创建的名称为32584_10108WO01_SequenceListing.txt、大小为96.0KB的ASCII文本文件，其经由EFS-Web提交给美国专利及商标局，并且以引用方式并入本文中。
技术介绍
癌症治疗可分为四种主要类别：化疗/放疗、激素治疗、靶向治疗和免疫治疗。医学研究和开发的重点集中于靶向治疗并且已获得重大改进，但癌症仍然是患者和全球卫生保健行业的重大挑战。该重大挑战部分是由于癌细胞能够避开先天性和适应性免疫系统的监测机制，这在一定程度上是吞噬清除抑制的结果。目前，不存在这样的体内系统，该体内系统任选地确定设计为激活癌细胞的吞噬清除的新癌症疗法的治疗潜力，以及确定癌细胞如何向巨噬细胞和吞噬细胞提供抑制信号的分子层面。此类系统提供了测定体内吞噬作用和巨噬细胞功能的来源，以及目标为通过向免疫系统发起促吞噬信号而提供抗肿瘤环境的新癌症疗法的鉴定。
技术实现思路
本专利技术涵盖以下认知，即期望对非人动物进行工程化，以允许用于鉴定和开发新癌症治疗剂的改进的系统。本专利技术还涵盖以下认知，即期望对非人动物进行工程化，以允许对人造血干细胞的改进的植入。另外，本专利技术还涵盖以下认知，即具有人源化CD47基因和/或以其他方式表达、包含或产生人或人源化CD47多肽的非人动物对于例如用于鉴定和开发癌症治疗剂是所期望的，所述治疗剂克服了CD47阻断相关的全身毒性并且克服了CD47介导的肿瘤细胞吞噬作用抑制，并且提供了用于植入人造血干细胞的更有效的体内系统，所述人造血干细胞提供了许多广泛的人细胞类型稳态的增加。在一些实施方案中，本专利技术提供具有包含CD47基因的基因组的非人动物，所述CD47基因包含来自两种不同物种(例如人和非人)的遗传物质。在一些实施方案中，如本文所述的非人动物的CD47基因编码包含人和非人部分的CD47多肽，其中所述人和非人部分连接在一起并且形成功能性CD47多肽。在一些实施方案中，本专利技术的非人动物包含含有内源部分和人部分的CD47基因，其中所述内源和人部分可操作地连接至内源启动子。在一些实施方案中，内源部分包含内源CD47基因的外显子1和外显子7下游的外显子。在某些实施方案中，内源CD47基因的外显子1和外显子7下游的外显子与表3中呈现的小鼠CD47基因的对应的外显子1和外显子7下游的外显子具有至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少98％的同一性。在一些实施方案中，内源CD47基因的外显子1和外显子7下游的外显子与表3中呈现的小鼠CD47基因的对应的外显子1和外显子7下游的外显子相同。在一些实施方案中，人部分编码人CD47多肽的氨基酸16-292。在一些实施方案中，人部分编码人CD47多肽的氨基酸19-292。在一些实施方案中，人部分编码人CD47多肽的氨基酸19-141。在一些实施方案中，人部分编码人CD47多肽的氨基酸19-127。在一些实施方案中，人部分包含人CD47基因的外显子2-7。在一些实施方案中，人CD47基因的外显子2-7与表3中呈现的人CD47基因的对应的外显子2-7具有至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少98％的同一性。在一些实施方案中，人CD47基因的外显子2-7与表3中呈现的人CD47基因的对应的外显子2-7相同。在一些实施方案中，本专利技术的非人动物包含含有人CD47多肽的胞外部分和内源CD47多肽的胞内部分的CD47多肽。在一些实施方案中，CD47多肽包含人CD47多肽的跨膜部分。在其他实施方案中，CD47多肽包含非人CD47多肽的跨膜部分。在一些实施方案中，CD47多肽在非人动物的细胞中由非人信号肽翻译。在某些实施方案中，非人信号肽是啮齿动物(例如，小鼠或大鼠)信号肽。在一些实施方案中，本专利技术的CD47多肽从内源非人CD47基因表达。在一些实施方案中，内源CD47多肽的胞内部分包含胞质内尾部，所述胞质内尾部具有的氨基酸序列与表3中呈现的小鼠CD47多肽的胞质内尾部具有至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少98％的同一性。在一些实施方案中，内源CD47多肽的胞内部分包含胞质内尾部，所述胞质内尾部具有的氨基酸序列与表3中呈现的小鼠CD47多肽的胞质内尾部相同。在一些实施方案中，人CD47多肽的胞外部分包含与人CD47多肽的残基19-141对应的氨基酸。在一些实施方案中，人CD47多肽的胞外部分包含与人CD47多肽的残基19-127对应的氨基酸。在一些实施方案中，人CD47多肽的胞外部分包含这样的氨基酸序列：其与表3中呈现的人CD47多肽的胞外部分的对应的氨基酸序列具有至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少98％的同一性。在一些实施方案中，人CD47多肽的胞外部分包含氨基酸序列，所述氨基酸序列与表3中呈现的人CD47多肽的胞外部分的对应的氨基酸序列相同。在一些实施方案中，本专利技术提供如本文所述的由非人动物的CD47基因编码的CD47多肽。在某些实施方案中，编码的CD47多肽包含与SEQIDNO:17、SEQIDNO:18、SEQIDNO:19或SEQIDNO:20具有至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少98％的同一性的氨基酸序列。在某些实施方案中，编码的CD47多肽包含与SEQIDNO:17、SEQIDNO:18、SEQIDNO:19或SEQIDNO:20相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，本专利技术提供人源化CD47基因，所述人源化CD47基因包含可操作地连接至人CD47基因的一个或多个外显子的非人CD47基因的一个或多个外显子。在某些实施方案中，本专利技术的人源化CD47基因包含编码CD47多肽的胞内部分的非人外显子和编码人CD47多肽的胞外部分的人外显子。在一些实施方案中，人源化CD47基因还包含编码人CD47多肽的跨膜部分的人外显子。在某些实施方案中，本专利技术的人源化CD47基因包含编码CD47多肽的全部或部分信号肽和胞内部分的非人外显子，以及编码CD47多肽的胞外部分和任选的跨膜部分的人外显子。在一些实施方案中，本专利技术提供来自如本文所述的非人动物的分离的细胞或组织。在一些实施方案中，本专利技术提供包含如本文所述的CD47基因的分离的细胞或组织。在一些实施方案中，细胞选自树突状细胞、淋巴细胞(例如，B细胞或T细胞)、巨噬细胞和单核细胞。在一些实施方案中，组织选自脂肪、膀胱、大脑、乳房、骨髓、眼、心、肠、肾、肝、肺、淋巴结、肌肉、胰腺、血浆、血清、皮肤、脾、胃、胸腺、睾丸、卵子以及它们的组合。在一些实施方案中，本专利技术提供非人胚胎干细胞，其基因组包含如本文所述的CD47基本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种包含含有内源部分和人部分的CD47基因的啮齿动物，其中所述内源部分和人部分可操作地连接至内源CD47启动子。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.12.05 US 62/087,9921.一种包含含有内源部分和人部分的CD47基因的啮齿动物，其中所述内源部分和人部分可操作地连接至内源CD47启动子。2.根据权利要求1所述的啮齿动物，其中所述内源部分包含内源CD47基因的外显子1和外显子7下游的外显子。3.根据权利要求2所述的啮齿动物，其中所述内源CD47基因的外显子1和外显子7下游的外显子与表3中呈现的小鼠CD47基因的对应的外显子1和外显子7下游的外显子具有至少90％或至少95％的同一性。4.根据权利要求1-3中任一项所述的啮齿动物，其中所述人部分编码人CD47多肽的氨基酸16-292。5.根据权利要求1-3中任一项所述的啮齿动物，其中所述人部分包含人CD47基因的外显子2-7。6.根据权利要求5所述的啮齿动物，其中所述人CD47基因的所述外显子2-7与表3中呈现的人CD47基因的所述对应的外显子2-7具有至少50％的同一性。7.根据权利要求5所述的啮齿动物，其中所述人CD47基因的所述外显子2-7与表3中呈现的人CD47基因的所述对应的外显子2-7具有至少60％的同一性。8.根据权利要求5所述的啮齿动物，其中所述人CD47基因的所述外显子2-7与表3中呈现的人CD47基因的所述对应的外显子2-7具有至少70％的同一性。9.根据权利要求5所述的啮齿动物，其中所述人CD47基因的所述外显子2-7与表3中呈现的人CD47基因的所述对应的外显子2-7具有至少80％的同一性。10.根据权利要求5所述的啮齿动物，其中所述人CD47基因的所述外显子2-7与表3中呈现的人CD47基因的所述对应的外显子2-7具有至少90％的同一性。11.根据权利要求5所述的啮齿动物，其中所述人CD47基因的所述外显子2-7与表3中呈现的人CD47基因的所述对应的外显子2-7具有至少95％的同一性。12.根据权利要求5所述的啮齿动物，其中所述人CD47基因的所述外显子2-7与表3中呈现的人CD47基因的所述对应的外显子2-7是相同的。13.一种表达CD47多肽的啮齿动物，所述CD47多肽包含人CD47多肽的胞外部分和任选的跨膜部分，以及内源CD47多肽的胞内部分。14.根据权利要求13所述的啮齿动物，其中所述CD47多肽在所述啮齿动物的细胞中由啮齿动物信号肽翻译。15.根据权利要求13所述的啮齿动物，其中所述内源CD47多肽的所述胞内部分包含胞质内尾部，所述胞质内尾部具有的氨基酸序列与表3中呈现的小鼠CD47多肽的胞质内尾部具有至少50％的同一性。16.根据权利要求13所述的啮齿动物，其中所述内源CD47多肽的所述胞内部分包含胞质内尾部，所述胞质内尾部具有的氨基酸序列与表3中呈现的小鼠CD47多肽的胞质内尾部具有至少60％的同一性。17.根据权利要求13所述的啮齿动物，其中所述内源CD47多肽的所述胞内部分包含胞质内尾部，所述胞质内尾部具有的氨基酸序列与表3中呈现的小鼠CD47多肽的胞质内尾部具有至少70％的同一性。18.根据权利要求13所述的啮齿动物，其中所述内源CD47多肽的所述胞内部分包含胞质内尾部，所述胞质内尾部具有的氨基酸序列与表3中呈现的小鼠CD47多肽的胞质内尾部具有至少80％的同一性。19.根据权利要求13所述的啮齿动物，其中所述内源CD47多肽的所述胞内部分包含胞质内尾部，所述胞质内尾部具有的氨基酸序列与表3中呈现的小鼠CD47多肽的胞质内尾部具有至少90％的同一性。20.根据权利要求13所述的啮齿动物，其中所述内源CD47多肽的所述胞内部分包含胞质内尾部，所述胞质内尾部具有的氨基酸序列与表3中呈现的小鼠CD47多肽的胞质内尾部具有至少95％的同一性。21.根据权利要求13所述的啮齿动物，其中所述内源CD47多肽的所述胞内部分包含胞质内尾部，所述胞质内尾部具有的氨基酸与表3中呈现的小鼠CD47多肽的胞质内尾部是相同的。22.根据权利要求13-21中任一项所述的啮齿动物，其中所述人CD47多肽的胞外部分包含与人CD47多肽的残基19-141对应的氨基酸。23.根据权利要求13-21中任一项所述的啮齿动物，其中所述人CD47多肽的胞外部分包含氨基酸序列，所述氨基酸序列与表3中呈现的人CD47多肽的胞外部分的对应的氨基酸序列具有至少50％的同一性。24.根据权利要求13-21中任一项所述的啮齿动物，其中所述人CD47多肽的胞外部分包含氨基酸序列，所述氨基酸序列与表3中呈现的人CD47多肽的胞外部分的对应的氨基酸序列具有至少60％的同一性。25.根据权利要求13-21中任一项所述的啮齿动物，其中所述人CD47多肽的胞外部分包含氨基酸序列，所述氨基酸序列与表3中呈现的人CD47多肽的胞外部分的对应的氨基酸序列具有至少70％的同一性。26.根据权利要求13-21中任一项所述的啮齿动物，其中所述人CD47多肽的胞外部分包含氨基酸序列，所述氨基酸序列与表3中呈现的人CD47多肽的胞外部分的对应的氨基酸序列具有至少80％的同一性。27.根据权利要求13-21中任一项所述的啮齿动物，其中所述人CD47多肽的胞外部分包含氨基酸序列，所述氨基酸序列与表3中呈现的人CD47多肽的胞外部分的对应的氨基酸序列具有至少90％的同一性。28.根据权利要求13-21中任一项所述的啮齿动物，其中所述人CD47多肽的胞外部分包含氨基酸序列，所述氨基酸序列与表3中呈现的人CD47多肽的胞外部分的对应的氨基酸序列具有至少95％的同一性。29.根据权利要求13-21中任一项所述的啮齿动物，其中所述人CD47多肽的胞外部分包含氨基酸序列，所述氨基酸序列与表3中呈现的人CD47多肽的胞外部分的对应的氨基酸序列是相同的。30.根据权利要求1-29中任一项所述的啮齿动物，其中所述啮齿动物还包含编码SIRPα多肽的SIRPα基因，所述SIRPα多肽包含人SIRPα多肽的胞外部分和内源SIRPα多肽的胞内部分，其中任选地所述SIRPα基因包含内源SIRPα基因的外显子1、外显子5、外显子6、外显子7和外显子8和人SIRPα基因的外显子2-4。31.根据权利要求1-30中任一项所述的啮齿动物，其中所述啮齿动物是大鼠或小鼠。32.一种CD47多肽，其由根据权利要求1-31中任一项所述的啮齿动物的基因编码。33.根据权利要求32所述的CD47多肽，其中所述编码的多肽包含与SEQIDNO:17、SEQIDNO:18、SEQIDNO:19或SEQIDNO:20具有至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或更多同一性的氨基酸序列。34.一种分离的啮齿动物细胞或组织，所述啮齿动物细胞或组织的基因组包含编码连接至内源CD47多肽的胞内部分的人CD47多肽的胞外部分和任选的跨膜部分的CD47基因。35.根据权利要求34所述的分离的细胞或组织，其中所述CD47基因可操作地连接至啮齿动物CD47启动子。36.根据权利要求34或权利要求35所述的分离的细胞或组织，其中所述CD47基因包含人CD47基因的外显子2-7。37.根据权利要求34-36中任一项所述的分离的啮齿动物细胞或组织，其中所述细胞或组织还包含编码SIRPα多肽的SIRPα基因，所述SIRPα多肽包含人SIRPα多肽的胞外部分和内源SIRPα多肽的胞内部分。38.根据权利要求34-37中任一项所述的分离的啮齿动物细胞或组织，其中所述啮齿动物细胞或组织是小鼠细胞或小鼠组织或大鼠细胞或大鼠组织。39.一种啮齿动物胚胎干细胞，所述啮齿动物胚胎干细胞的基因组包含编码连接至内源CD47多肽的胞内部分的人CD47多肽的胞外部分和任选的跨膜部分的CD47基因。40.根据权利要求39所述的啮齿动物胚胎干细胞，其中所述CD47基因包含可操作地连接至内源CD47启动子的人CD47基因的外显子2-7。41.根据权利要求39或权利要求40所述的啮齿动物胚胎干细胞，其中所述啮齿动物胚胎干细胞是小鼠胚胎干细胞，并且来自129品系、C57BL品系或它们的混合物。42.根据权利要求41所述的啮齿动物胚胎干细胞，其中所述啮齿动物胚胎干细胞是小鼠胚胎干细胞，并且是129和C57BL品系的混合物。43.根据权利要求39-42中任一项所述的啮齿动物胚胎干细胞，其中所述啮齿动物胚胎干细胞的所述基因组还包含编码SIRPα多肽的SIRPα基因，所述SIRPα多肽包含人SIRPα多肽的胞外部分和内源SIRPα多肽的胞内部分，其中任选地所述SIRPα基因包含内源SIRPα基因的外显子1、外显子5、外显子6、外显子7和外显子8和人SIRPα基因的外显子2-4。44.根据权利要求39、权利要求40或权利要求43中任一项所述的啮齿动物胚胎干细胞，其中所述啮齿动物胚胎干细胞是小鼠或大鼠胚胎干细胞。45.一种啮齿动物胚胎，其由根据权利要求39-44中任一项所述的胚胎干细胞产生。46.根据权利要求45所述的啮齿动物胚胎，其中所述胚胎是小鼠或大鼠胚胎。47.一种制备从内源CD47基因座表达CD47多肽的啮齿动物的方法，其中所述CD47多肽包含人序列，所述方法包括：(a)将基因组片段插入啮齿动物胚胎干细胞中的内源CD47基因座，所述基因组片段包含编码全部或部分的人CD47多肽的核苷酸序列，从而形成人源化CD47基因；(b)获得包含(a)所述的人源化CD47基因的啮齿动物胚胎干细胞；以及(c)使用(b)所述的啮齿动物胚胎干细胞形成啮齿动物。48.根据权利要求47所述的方法，其中所述人序列包含与人CD47多肽的残基19-127、残基19-141、残基19-292或残基16-292对应的氨基酸。49.根据权利要求47或权利要求48所述的方法，其中所述核苷酸序列包含人CD47基因的外显子2-7。50.根据权利要求47-4...

【专利技术属性】
技术研发人员：C·居雷尔，E·约费，A·穆希卡，G·瑟斯顿，
申请(专利权)人：瑞泽恩制药公司，
类型：发明
国别省市：美国;US