【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】核酸组装系统
本专利技术涉及制备宿主细胞文库的方法。本专利技术还涉及制备核酸文库的方法和涉及制备具有期望性质的宿主细胞的方法。本专利技术进一步涉及根据这些方法制备的宿主细胞文库、核酸文库和具有期望性质的宿主细胞。
技术介绍
生物体尤其是微生物，可用于生产生物和化学产品，所述化学产品有时比使用化学合成或石油基化学品具有更少的花费和更小的环境影响。一些微生物提供容易被遗传修饰的优势。通过对天然的或修饰的代谢通路操作和通过引入新的通路，微生物可被改造为生产感兴趣的产品。在给定的通路中，很多多肽具有将底物经一系列中间产物转化成产物的活性。许多微生物具有类似的通路——如果不是一样的通路的话，但是当比较两种不同的生物体时，可以或多或少的效率在通路的平行步骤中实现特定类型的活性。例如，对于共享共同通路的两种生物体，对通路中平行活性负责的对应多肽可以不同的效率或不同的速度影响活性。因此，尽管相关的或不相关的生物体可具有类似的或相同的通路，不同微生物中每种活性受影响的效率或速度可能不同。 需要其中可利用这种天然变异和其他类型变异的方法。
技术实现思路
本文提供了用于优化经改...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.制备宿主细胞文库的方法，其中多个所述宿主细胞包含在靶基因座处的组装的多核苷酸，所述方法包括: (a)提供包含两个或更多个多核苷酸亚组的多个多核苷酸，其中: (i)每个多核苷酸亚组中的多个多核苷酸包含编码肽或多肽的序列和/或调节序列； (?)每个多核苷酸亚组编码的多个肽或多肽，或每个多核苷酸亚组中包含的多个调节序列共享活性和/或功能； (iii)至少一个多核苷酸亚组包含至少两个不同的多核苷酸种类； (iv)每个多核苷酸亚组的多个多核苷酸包含能够与来自一个或更多个其他多核苷酸亚组的多个多核苷酸同源重组的序列；和 (V)两个多核苷酸亚组中的多个多核苷酸包含能够与宿主细胞中的靶基因座同源重组的核苷酸序列；和 (b)通过在宿主细 中体内进行同源重组在所述靶基因座处组装所述多个多核苷酸， 从而产生宿主细胞文库，所述多个宿主细胞文库包含在所述靶基因座处组装的多核苷酸。2.根据权利要求1所述的方法，其中有至少约四个多核苷酸亚组。3.根据权利要求1或2所述的方法，其中有约20个或更少的多核苷酸亚组。4.根据前述权利要求任一项所述的方法，其中在(V)中，所述两个多核苷酸亚组之一中的多个多核苷酸能够与所述靶基因座的5’序列同源重组并且所述两个多核苷酸亚组中另一个亚组的多个多核苷酸能够与所述靶基因座的3’序列同源重组。5.根据前述权利要求任一项所述的方法，其中至少一个多核苷酸亚组中的多个多核苷酸包含编码标记基因的序列，所述序列有或没有(一条或多条)调节序列。6.根据前述权利要求任一项所述的方法，其中至少两个多核苷酸亚组中的至少两个多核苷酸是不同的。7.根据前述权利要求任一项所述的方法，其中除了包含能够与靶基因座同源重组的序列的所述两个多核苷酸亚组和包含编码标记基因的序列的任何多核苷酸亚组之外，所有多核苷酸亚组中的至少两个多核苷酸是不同的。8.根据前述权利要求任一项所述的方法，其中文库中至少约50%的宿主细胞在一个或更多个靶基因座处具有至少一个组装的多核苷酸。9.根据前述权利要求任一项所述的方法，其中所述文库中至少约70%的所述宿主细胞具有至少一个组装的多核苷酸，所述组装的多核苷酸包含来自每个多核苷酸亚组的一个多核苷酸。10.根据前述权利要求任一项所述的方法，其中所述宿主细胞文库包括至少约1000个不同的组装的多核苷酸。11.根据前述权利要求任一项所述的方法，其中至少一个组装的多核苷酸包含生物通路的每个成员。12.根据权利要求11所述的方法，其中所述生物通路确保在宿主细胞中生产感兴趣的化合物。13.根据权利要求12所述的方法，其中所述感兴趣的化合物是初级代谢产物、二级代谢产物、多肽或多肽的混合物。14.根据前述权利要求任一项所述的方法，其中所述至少一个多核苷酸亚组编码多肽的变体和/或包括调节序列的变体。15.根据权利要求14所述的方法，其中所述变体包含基因簇的成员。16.根据权利要求14或15所述的方法，其中所述变体是等位基因或多肽或调节序列的种类变体。17.根据权利要求14至16任一项...
【专利技术属性】
技术研发人员：约翰尼斯·安德列什·劳博斯，伯纳德·迈瑞克，理查德·克尔曼，本·达尔克·登，
申请(专利权)人：帝斯曼知识产权资产管理有限公司，
类型：发明
国别省市：
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