稳定敲低Numb和Numblike的细胞系及其构建方法技术

本发明专利技术公开了一种稳定敲低Numb和Numblike的细胞系，包括真核表达载体，所述真核表达载体包括用于抑制Numb表达的序列、以及U6启动子和用于抑制Numb?Numblike表达的序列。这种稳定敲低Numb和Numblike的细胞系，通过抑制Numb和Numblike的mRNA的转录，以明显降低Numb和Numblike的蛋白表达量。该稳定表达细胞系的建立，不仅成功在体外模拟了乳腺癌细胞Numb和Numblike的表达状态为研究Numb和Numblike在乳腺癌中的作用提供了模型，而且也为Numb和Numblike的功能的研究提供了帮助。本发明专利技术还提供一种上述定敲低Numb和Numblike的细胞系的构建方法。

【技术实现步骤摘要】
稳定敲低Numb和Numbl ike的细胞系及其构建方法
本专利技术涉及细胞学领域,尤其涉及一种稳定敲低Numb和Numblike的细胞系及其构建方法。
技术介绍
Numb是第一个被发现决定多细胞生物不对称细胞分裂的信号蛋白。在果蝇中，Numb通过促进Notch泛素化拮抗Notch信号通路,从而决定子细胞的命运。后来的研究表明Numb是细胞内吞调节蛋白，并用通过内吞参与调节神经细胞的粘附，轴突的生长及细胞迁移等过程。然而，Numb可能还有一些附加功能，以证明Numb被认为在乳腺癌细胞中是肿瘤抑制剂。在乳腺癌细胞中常表现Numb低表达，而研究表明在主要的乳腺癌细胞中Numb低表达导致了 P53水平的降低并升高了药物抗性，同时这种Numb的低表达也提高了 Notch受体的活性。因此，在这一类癌症中，Numb低表达这一单独的事件就决定了一个致癌基因(Notch)的激活和p53肿瘤抑制通路的衰减。后来研究发现Numb与肿瘤抑制基因p53、泛素化蛋白HDM2形成三聚体抑制p53的泛素化，从而调节肿瘤的恶性程度。Numb的抑癌作用还不止于。研究表明，小脑颗粒细胞前体细胞(granulec本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种稳定敲低Numb和Numblike的细胞系,其特征在于,包括真核表达载体,所述真核表达载体包括用于抑制Numb表达的序列、以及U6启动子和用于抑制Numb Numblike表达的序列。2.如权利要求1所述的稳定敲低Numb和Numblike的细胞系,其特征在于,所述用于抑制Numb表达的序列为SEQ ID N0.1所示的核苷酸序列。3.如权利要求1所述的稳定敲低Numb和Numblike的细胞系,其特征在于,所述U6启动子和用于抑制Numb Numblike表达的序列为SEQ ID N0.2所示的核苷酸序列。4.如权利要求1所述的稳定敲低Numb和Numblike的细胞系,其特征在于,所述细胞系为MCF-1OA细胞系。5.如权利要求1所述的稳定敲低Numb和Numblike的细胞系,其特征在于,所述真核表达载体为PGIPZ质粒。6.如权利要求5所述的稳定敲低Numb和Numblike的细胞系,其特征在于,所述用于抑制Numb表达的序列插入到所述pGIPZ质粒的shRNA插入区。7.如权利要求5所述的稳定敲低Numb和Numblike的细胞系,其特征在于,所述U6启动子和用于抑制Numb Numblike表达的序列插入到所述p...

【专利技术属性】
技术研发人员：邵喜明，杨诗涵，李红昌，李华顺，
申请(专利权)人：深圳先进技术研究院，
类型：发明
国别省市：