一种含有双报告基因的双t-dna载体及其构建方法和应用技术

本发明专利技术提供了一种含有双报告基因的双T-DNA载体及其构建方法与应用。本发明专利技术对传统的双T-DNA载体进行改进，将利用生物安全标记基因和剔除转基因植株选择标记基因这两种方法相结合，将报告基因GUS基因和选择标记基因连入同一个T-DNA区域，将GFP基因和目的基因连入另一个T-DNA区域，得到含有双报告基因的双T-DNA载体，通过后代自交分离检测两个报告基因，剔除目的基因与选择标记基因发生共整合的转基因植株，最终得到只有目的基因而无选择标记的转基因安全植株，快速筛选得到含有目的基因和生物安全标记GFP的转基因安全植株，这样大大节省了人力物力财力，有效提高了基因整合的效率以及安全转基因植株的产生。

【技术实现步骤摘要】
一种含有双报告基因的双T-DNA载体及其构建方法和应用
本专利技术涉及生物
，具体的说，涉及一种含有双报告基因的双T-DNA载体及其构建方法和应用。
技术介绍
粮食问题是各个国家的核心问题，由于环境的恶化，耕地面积的大量减少，人口的不断增长，我国的粮食问题面临着越来越大的挑战，解决好粮食安全问题是保证经济高效和可持续发展的重要前提。实践表明，科学技术的发展与突破是解决粮食问题最重要的途径之一，利用基因工程技术改良农作物品种，提高农作物的品质和产量具有越来越重要的现实意义。转基因技术始于上世纪八十年代，该技术从出现即得到广泛的关注与应用，到现在植物转基因技术已成为提高作物产量、品质，农业资源利用率，改善农业生态环境等的有效手段之一。目前，转基因植物主要包括经济作物、粮食作物、蔬菜、花卉、药用植物、果树以及牧草等。从1996年第一批转基因作物商业化应用以来，转基因作物的种植面积逐年增加，到2012年其种植面积增长了 100倍(ISAAA，2012)，转基因技术亦成为近代农业史上发展利用最快的新技术之一。但是，随着该技术的迅猛发展，人们在关注转基因植物带来巨大经济和社会效本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种构建双T-DNA载体的方法，其特征在于，所述双T-DNA载体为pTRIDT313，包括以下步骤:(1)以pCMBIA1302 载体为模板，以 SEQ ID N0.USEQ ID N0.2 与 SEQ ID N0.3,SEQ IDN0.4所示核苷酸序列为引物，分别进行PCR扩增得到T-DNA左右边界LB和RB，LB引入酶切位点SphI和BglII，RB引入酶切位点SacI和SphI ； (2)将左右边界LB和RB分别连到pMD19-T载体，与骨架载体pCAMBIA1302分别进行酶切，再用T4连接酶进行三片段连接，得到含两套T-DNA边界的双T-DNA载体pTRIDT313。2.含有双报告基因的双T-DNA载体，其特征在于，该载体具有两个T-DNA区域，一个T-DNA区域含有报告基因GUS和选择基因，另一个T-DNA区域含有报告基因GFP和目的基因。3.如权利要 求2所述的含有双报告基因的双T-DNA载体，其特征在于，所述选择基因为潮霉素磷酸转移酶基因hpt、氯霉素磷酸转移酶基因cat、新霉素磷酸转移酶基因npt I1、除草剂抗性Bar基因。4.如权利要求2或3所述的含有双报告基因的双T-DNA载体，其特征在于，其为PTRIDT314。5.如权利要求2或3所述含有双报告基因的双T-DNA载体的构建方法，其特征在于，包括以下步骤: (1)双T-DNA载体的构建，包括:1)以pCMBIA1302 载体为模板，以 SEQ ID N0.1、SEQ ID N0.2 与 SEQ ID N0.3、...

【专利技术属性】
技术研发人员：江千涛，赵珊，王际睿，陈国跃，祁鹏飞，刘亚西，蒲至恩，李伟，魏育明，郑有良，
申请(专利权)人：四川农业大学，
类型：发明
国别省市：