拮抗黄芪根腐病的芽孢杆菌菌株及其发酵培养基制造技术

本发明专利技术提供一种拮抗黄芪根腐病的细菌菌株及其发酵培养基，属于微生物技术领域。所述菌株，它是保藏号为CGMCC No.14244的甲基营养型芽孢杆菌(Bacillus methylotrophicus)。所述菌株的发酵培养基，其配方为：葡萄糖20.0～25.0g/L、胰蛋白胨20.0～25.0g/L、花生饼粉15.0～25.0g/L、CaCO3 2.0～2.2g/L、MnSO4 0.0005～0.0006％。所述菌株培养物对黄芪根腐病菌(Fusarium solani和Fusarium acuminatum)抑制作用显著，离体防病试验中，在不同的处理组下，均具有明显的保护、治疗和拮抗防病效果。

Bacillus strain resisting astragalus root rot disease and fermentation medium thereof

The invention provides a bacterial strain resisting astragalus root rot disease and a fermentation medium thereof, belonging to the field of microbial technology. The strain, it is for the preservation of CGMCC No.14244 Bacillus methylotrophicus (Bacillus methylotrophicus). The fermentation medium of strain, the formula is: glucose 20 ~ 25.0g/L, 20 ~ 25.0g/L, peptone peanut powder 15 ~ 25.0g/L, 2 ~ 2.2g/L, MnSO4 CaCO3 0.0005 ~ 0.0006%. The strain was cultured on Astragalus root rot (Fusarium solani and Fusarium acuminatum) significantly inhibited, in vitro trials, in different treatment groups, have the protection, treatment and prevention of the antagonistic effect is obvious.

【技术实现步骤摘要】
拮抗黄芪根腐病的芽孢杆菌菌株及其发酵培养基
本专利技术涉及微生物领域，具体提供一株能够拮抗黄芪根腐病菌(Fusariumacuminatum、Fusariumsolani)和具有促进植株生长能力的芽孢杆菌(Bacillusmethylotrophicus)SXKF16-2及其发酵培养基。
技术介绍
黄芪是我国中药方剂中的大宗药材，性温，味甘，具补气固表，托疮生肌等功效，被广泛用于临床各科，素有“十药八芪”之称。由于黄芪极高的药用价值，以及其药理作用研究的不断深入、药用范围的不断拓宽，国内外市场对黄芪的需求量日益增大。黄芪主产于甘肃、内蒙、山西等地。近年来，随着种植面积的扩大，轮作周期缩短，重茬和迎茬面积增加，致使黄芪根腐病在上述主产区均已普遍发生，且危害逐年加重，成为制约黄芪产业可持续发展的重要因素。根腐病是一类极具毁灭性的土传病害，素有“植物癌症”之称。在黄芪上，更是因其多年生特性，积重难返、难以防控。黄芪根腐病由多种病原菌混合侵染引起，主要包括腐皮镰孢菌(Fusariumsolani)、锐顶镰刀菌(Fusariumacuminatum)、尖镰孢菌(Fusariumoxysporum)、立枯丝核菌(Rhizoctoniasolani)、链铬孢属真菌等(Alternariaspp.)等，镰刀菌为最主要的致病菌属。目前，化学防治作为黄芪根腐病最主要的防治方法，虽然见效快、作用强，但化学农药高毒性、高残留、高污染的特点，极易导致病菌抗药性增加、生态系统破坏。同时，还可导致有效成分含量的降低，严重影响临床用药安全和国际市场竞争力。为了避免中药材病害防治中的农药污染，保证绿色生产，国家制定了一系列的无公害生产条例，并在《中药材GAP栽培技术》中明确规定了禁止使用的剧毒农药和部分高毒农药。与化学农药相比，生物防治因具有对非靶标生物安全，毒副作用小，环境兼容性好，生产原料来源广泛等优点而越来越受到重视。因此，黄芪根腐病的防控应首先立足于生物防治，特别是生物农药的推广和使用，而获得高效拮抗菌是生物农药开发的基础。芽孢杆菌作为土壤和植物微生态区系的优势生物种群，具有很强的抗菌防病及抗逆能力，特别是由于其在定殖力、繁殖力、稳定性、以及与化学农药的相容性等方面，明显优于非芽孢杆菌和真菌，因而在土传病害的生物防治中更是显示出了极高的应用价值。目前，国内外利用芽孢杆菌防治大田作物根部病害的报道有很多，且不少制剂已商业化。已报道的生防芽孢杆菌有：枯草芽孢杆菌(B.subtilis)、多粘芽孢杆菌(B.polymyxa)、蜡状芽孢杆菌(B.cereus)、蜡状芽孢杆菌蕈状菌变种(B.cereusvar.mycoides)、巨大芽孢杆菌(B.megaterium)和短小芽孢杆菌(B.pumilus)等。已投放市场并用于大田作物和蔬菜土传病害防治的芽孢杆菌制剂主要包括：美国的枯草芽孢杆菌制剂GB03、MBI600、QST713和解淀粉枯草芽孢杆菌变种(B.subtilisvar.amyloliquefaciensFZB24)制剂等；国内的枯草芽孢杆菌制剂则有“百抗”、“麦丰宁”、“纹曲宁”等，但针对中药材土传病害仅有一种芽孢杆菌制剂(登记证号LS2001821)可用于三七根腐病防治。因此，根据黄芪产业发展和根腐病防治的实际需要，筛选获得对黄芪根腐病具显著抑制作用，且兼具促生功能的芽孢杆菌，对开发黄芪根腐病专用芽孢杆菌生防制剂，实现中药材土传病害的生物防治，具有十分重要的意义。
技术实现思路
本专利技术目的之一是针对黄芪根腐病的两种优势致病镰刀菌(Fusariumsolani和Fusariumacuminatum)，提供一株抑菌效果良好，且兼具促进植物生长能力的多功能芽孢杆菌菌株。该菌株可用于黄芪根腐病生防制剂的开发，缓解黄芪根腐病的发生蔓延和化学农药施用带来的不良影响。本专利技术目的之二是提供多功能拮抗促生芽孢杆菌菌株的发酵培养基配方，用于黄芪根腐病生防制剂的制备和生产。为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：本专利技术所提供的多功能拮抗促生芽孢杆菌为菌株SXKF16-2，该菌株经鉴定，其分类命名为甲基营养型芽孢杆菌(Bacillusmethylotrophicus)，微生物保藏号是：CGMCCNo.14244；保藏时间：2017年6月15号；保藏地址：北京市朝阳区北辰西路，中国科学院微生物研究所；保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC)。本专利技术所述的甲基营养型芽孢杆菌(Bacillusmethylotrophicus)SXKF16-2对黄芪根腐病的优势病原菌(Fusariumsolani、Fusariumacuminatum)具有很强的拮抗作用，其无菌发酵液在离体防病试验中，在不同的处理组下(保护性、治疗性和拮抗性)，均具有显著的防病效果。本专利技术所述的甲基营养型芽孢杆菌(Bacillusmethylotrophicus)SXKF16-2主要通过其发酵液中的抗菌物质显著抑制Fusariumsolani与Fusariumacuminatum的菌丝生长和孢子萌发，从而起到抑菌防病作用。本专利技术所述的甲基营养型芽孢杆菌(Bacillusmethylotrophicus)SXKF16-2具有多种促生性能，分别为：溶磷、固氮、解淀粉酶活性和产IAA能力。本专利技术提供的甲基营养型芽孢杆菌(Bacillusmethylotrophicus)SXKF16-2的发酵培养基配方为：葡萄糖20.0～25.0g/L、胰蛋白胨20.0～25.0g/L、花生饼粉15.0～25.0g/L，CaCO32.0～2.2g/L、MnSO40.0005～0.0006％。发酵培养基的最优配比为：葡萄糖22.32g/L、胰蛋白胨23.60g/L、花生饼粉17.39g/L、CaCO32.0g/L、MnSO40.0006％。本专利技术所述的多功能拮抗菌—甲基营养型芽孢杆菌(Bacillusmethylotrophicus)SXKF16-2有以下几个优点：本专利技术所述的多功能拮抗菌SXKF16-2分离自山西黄芪主产区(浑源)健康黄芪植株根际土壤，并非源自其他生境，根际定殖效果较好，安全可靠，对黄芪无致病侵染能力。本专利技术所述的多功能拮抗菌SXKF16-2是通过活体拮抗、发酵液抑菌、离体防病试验等大量筛选工作获得的，对黄芪根腐病的2种优势病原菌(Fusariumsolani和Fusariumacuminatum)均具有显著的抑制作用，且在离体防病试验中，对黄芪根腐病显示出了保护、治疗和拮抗等多种防病效果。本说明所述的多功能拮抗菌SXKF16-2兼具溶磷、固氮、产解淀粉酶、产IAA等促生性能。本说明所述的多功能拮抗菌SXKF16-2的发酵液对高温、紫外线和强酸/强碱等不良环境具有很高的耐受性，能够满足在黄芪适生地土壤和气候条件下保持良好防病效果的要求。附图说明图1为甲基营养型芽孢杆菌SXKF16-2无菌发酵液的抑菌效果图，图中：左图靶标菌为Fusariumsolani；右图靶标菌为Fusariumacuminatum。图2为甲基营养型芽孢杆菌SXKF16-2无菌发酵滤液对菌丝生长的抑制作用，图中：左图靶标菌为Fusariumsolani；右图靶标菌为Fusariumacum本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种拮抗黄芪根腐病的芽孢杆菌菌株，它是保藏号为CGMCC No.14244的甲基营养型芽孢杆菌(Bacillus methylotrophicus)菌株。

【技术特征摘要】
1.一种拮抗黄芪根腐病的芽孢杆菌菌株，它是保藏号为CGMCCNo.14244的甲基营养型芽孢杆菌(Bacillusmethylotrophicus)菌株。2.一种拮抗黄芪根腐病的芽孢杆菌菌株的发酵培养基，其配方为：葡萄糖20.0～25.0g/L、胰蛋白胨20.0～25.0g/L、花生饼粉15.0～25.0g/L、CaCO32.0～2.2g/L、MnSO40.0005～0.0006％。3.如权利要求2所述一种拮抗黄芪根腐病的芽孢杆菌菌株的发酵培养基，其配方为：葡...

【专利技术属性】
技术研发人员：高芬，秦雪梅，王梦亮，雷振宏，
申请(专利权)人：山西大学，
类型：发明
国别省市：山西,14