一种与生殖支原体MgPa特异结合的受体蛋白及其分离方法和用途技术

本发明专利技术提供了一种与生殖支原体MgPa特异结合的受体蛋白及其分离方法和用途，本发明专利技术首先筛选得到了位于人尿道上皮细胞膜表面的受体蛋白——亲环蛋白。所述蛋白分离自人尿道上皮细胞的细胞膜蛋白，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，由165个氨基酸组成。本发明专利技术利用改进的VOPBA方法筛选rMgPa在人尿道上皮细胞膜上的受体，为进一步阐明Mg可能的黏附和致病机制，为进一步设计受体模拟分子和拮抗分子阻挡Mg黏附入侵宿主细胞，为Mg感染防治提供前期实验基础。因此所述受体蛋白CypA能够用于制备治疗或预防生殖支原体感染性疾病的靶向药物中。

Receptor protein specifically combined with Mycoplasma MgPa and its isolation method and use

The present invention provides a combination with Mycoplasma specific MgPa receptor protein and its separation method and application thereof. The invention firstly screened receptor protein in human urothelial cell membrane surface of cyclophilin. The separation of cell membrane from human urothelial cell protein of the protein, the nucleotide sequence of SEQ ID NO.1 shows, consisting of 165 amino acids. The screening of rMgPa in human urothelial cell membrane receptor by using improved VOPBA method, in order to further clarify the possible pathogenic mechanism of adhesion and Mg, and molecular antagonists block Mg adhesion invasion of host cell receptor for further design of simulation, provide experimental basis for the prevention and treatment of Mg infection. Thus, the receptor protein CypA can be used in the preparation of a targeted drug for the treatment or prevention of Mycoplasma infectious diseases.

【技术实现步骤摘要】
一种与生殖支原体MgPa特异结合的受体蛋白及其分离方法和用途
本专利技术涉及一种与生殖支原体MgPa特异结合的受体蛋白——亲环蛋白(CyclophilinA,CypA)，还提供了该蛋白的分离方法和用途，属于生物工程和疾病诊断与防治

技术介绍
生殖支原体(Mycoplasmagenitalium，Mg)是首次从一名非淋菌性尿道炎患者尿道分泌物中分离出的一种泌尿生殖道感染支原体。临床研究表明，女性感染Mg可引起宫颈炎、盆腔炎和不孕等；而男性感染则可引起急慢性非淋菌性尿道炎和不育；另外，Mg感染还与人类免疫缺陷病毒(HIV)的机会感染密切相关，是HIV的协同因子，故称之为艾滋病相关支原体。病原体和宿主细胞膜上相应的受体蛋白的结合是病原体感染宿主的第一步，对其能否感染宿主细胞至关重要。研究表明，Mg必须先黏附于泌尿生殖道或呼吸道黏膜上皮细胞才能感染宿主并定植于感染部位或侵入细胞内。支原体没有细胞壁，但在Mg的膜上存在较多的膜蛋白。Mg通过细胞膜上的膜蛋白介导其定植到宿主细胞表面而感染致病。生殖支原体黏附蛋白(Mycoplasmagenitaliumproteinofadhesion本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种与生殖支原体MgPa特异结合的受体蛋白，其特征在于：所述蛋白分离自人尿道上皮细胞的细胞膜蛋白，命名为亲环蛋白，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，由165个氨基酸组成。

【技术特征摘要】
1.一种与生殖支原体MgPa特异结合的受体蛋白，其特征在于：所述蛋白分离自人尿道上皮细胞的细胞膜蛋白，命名为亲环蛋白，其核苷酸序列如SEQIDNO.1所示，由165个氨基酸组成。2.权利要求1所述的受体蛋白的分离制备方法，其特征在于包括以下步骤：(1)、对生殖支原体的膜蛋白MgPa进行表达、纯化，制得重组蛋白rMgPa；(2)、采用超声破碎法提取人尿道上皮细胞的膜蛋白；(3)、采用改进的病毒铺覆蛋白印迹技术筛选步骤(2)中制得的膜蛋白中与重组蛋白rMgPa特异结合的膜蛋白，筛选得到一条约17KDa的蛋白；(4)、将步骤(3)中得到的约17KDa蛋白进行质谱分析鉴定，即得到权利要求1所述的受体蛋白CypA。3.根据权利要求2所述的受体蛋白的分离制备方法，其特征在于：步骤(2)中，取培养形态良好的人尿道上皮细胞，胰蛋白酶消化5min，加入培养基终止消化，离心6min后收集细胞沉淀；然后加入PBS轻轻吹打细胞沉淀，洗三次；再加入细胞裂解液冰浴20min，加入蛋白酶抑制剂PMSF，超声破碎，10W，5s/次，间歇15s，共计30次，然后2500rpm/min离心10min，取上清离心30min，沉淀用PBS重悬，-80℃保存，即获得人尿道上皮细胞的膜蛋白提取物。4.根据权利要求2所述的受体蛋白的分离制备方法，其特征在于：步骤(3)的具体步骤为：a、SDS-PAGE将步骤(2)中提取的人尿道上皮细胞...

【专利技术属性】
技术研发人员：曾燚华，邓湘赢，王丽，
申请(专利权)人：南华大学，
类型：发明
国别省市：湖南,43