滇黄精的育苗方法技术

滇黄精的育苗方法，步骤包括：滇黄精外植体准备，消除褐化培养，愈伤组织诱导、不定芽发生和增殖培养，促进根茎生长的暗培养，试管苗复壮培养，生根培养，炼苗培养；有益效果是：滇黄金外植体在培养基A中进行每隔7天的转接培养，去除组培过程中出现的褐化现象效果显著；同时进行愈伤组织诱导、丛芽发生和增殖培养，提高了繁殖效率，繁殖系数可提高到8.67以上，组培时间可缩短至45 d；暗培养阶段，滇黄精根茎的发达程度大幅提高，成活率可达95%以上；本发明专利技术分阶段采用四种培养基转接培养，克服了滇黄精进行组培育苗时容易滋生真菌和积累病毒的问题，培养出来的种苗适应性及抗逆性极强，降低了组培苗污染率，提高了品种种性的稳定性。

Method for raising seedlings of Polygonatum sibiricum

Breeding method comprises the steps of: Polygonatum Polygonatum explants to eliminate browning culture, callus induction, adventitious bud induction and proliferation culture, promote the growth of rhizome dark culture, plantlet rejuvenation cultivation, rooting culture, Lian Miao Peiyang; the beneficial effect is that Yunnan gold explants in culture cultivation every 7 days the transfer medium A, the effect of browning removal during tissue culture was carried out at the same time; callus induction, bud development and proliferation, improve the efficiency of breeding, propagation coefficient can be increased to more than 8.67, culture time can be shortened to 45 D; dark culture stage, the developed degree of Yunnan Yellow the roots stems significantly increased, the survival rate can reach more than 95%; the four medium transfer culture of the invention in stages, to overcome the Polygonatum group when easy to breed seedling cultivation of fungi and virus accumulation In addition, the seedlings produced in this study have great adaptability and stress resistance, reduce the pollution rate of tissue culture seedlings, and improve the stability of varieties and seeds.

【技术实现步骤摘要】
滇黄精的育苗方法
本专利技术属于中药材组培
，涉及一种滇黄精的育苗方法。
技术介绍
滇黄精（PolygonatumkingianumColl.erHemsl.）为百合科（Liliaceae）黄精属（Polygonatum）多年生草本植物，主要产于云南﹑四川﹑贵州和越南等地，缅甸少有分布；生于林下灌丛或阴湿草坡、岩石上。滇黄精是传统的中药材，其药用部位是根状茎，其性平、味甘，为滋补上品，主要功效是滋阴润燥、补肾益精，用于脾胃虚弱，体倦乏力，口干食少，肺虚燥咳，精血不足，内热消渴。现代药理学研究表明滇黄精也具有免疫激发、增强免疫、延缓衰老、抗病毒等功效，在研究新药和开发保健品方面具有广阔前景。由于滇黄精具有重要药用和食用价值，市场需求量大，野生滇黄精常被掠夺性采挖，资源濒临枯竭，给滇黄精的开发利用和可持续发展带来极其不利的影响。滇黄精的繁殖有有性繁殖和无性繁殖两种。在有性繁殖中，滇黄精种子具有变异大、多样性高、适应性强等特点，但其发育较慢，从播种到长出地上部分需要1年时间，生长及收获周期长。滇黄精的无性繁殖是通过根茎进行繁殖，这种方式在各地使用较为普遍，但是长期的无性繁殖滇黄精的根茎中容易滋生真菌和积累病毒，在进行组培苗时，滇黄精外植体容易褐化，组培苗易被污染，这会导致滇黄精繁殖速度慢，成苗率低，品种种性退化的问题，无法提供大量优质种苗，制约了滇黄精的人工大面积种植。目前，国内有许多关于黄精属一些种组织培养研究的报道，但均未提及外植体易褐化和污染的问题，且其繁殖系数偏低、每一代繁殖需60-90天，育苗周期长、试管苗过渡驯化时成活率低，使得以目前组织培养方法很难实现滇黄精种苗的产业化生产。
技术实现思路
针对现有技术中滇黄精的繁殖存在繁殖速度慢、易褐化、培养周期长、根茎等繁殖体中容易滋生真菌和积累病毒，造成品种种性退化的问题，本专利技术提供一种滇黄精的育苗方法，具体方案包括以下步骤：（1）滇黄精外植体准备：每年春季，将生长旺盛的滇黄精根茎从土中挖出，用毛刷洗去泥土，然后用解剖刀切取带幼芽根茎，用质量比为20%的洗衣粉水溶液浸泡10-15min，置流水下冲洗30-60min；冲洗后放到超净工作台上的烧杯中，烧杯中加入质量比为20%维生素C浸泡5-10min；然后用体积比为75%的乙醇浸泡30s后，转入质量比为0.1%的氯化汞中消毒5-8min，无菌水冲洗8-10次，每次不低于3min，得到滇黄精外植体，备用；（2）消除褐化培养：将准备好的滇黄金外植体接种于培养基A中，在光照度为1500-2000lx，光照时间为8h/d，温度为23±1℃的条件下进行培养，每七天更换新的培养基A继续培养，培养基A的更换次数不少于两次；培养基A是由每升蒸馏水中加入5000-10000mg的聚乙烯比格烷酸酮，1.0-3.0g的活性炭，1.0-10mg的氯化钠，15000mg的蔗糖和5300-5500mg的琼脂粉配制而成，培养基A的PH值在5.4-5.8之间；（3）愈伤组织诱导、不定芽发生和增殖培养：将消除褐化后的滇黄精外植体接入培养基B中，在光照度为1500-2000lx，光照时间为12h/d，温度为23±1℃的条件下同步进行愈伤组织诱导、不定芽发生和增殖培养；培养15d后滇黄精外植体的芽开始萌发长出叶片，并在基部出现愈伤组织，得愈率为91.23%；30d后愈伤组织表面开始出现不定丛芽，不定丛芽中分化出不定芽丛的分化率可达到100%；45d后丛芽分化率可达5.37；培养基B是由每升蒸馏水中加入1.5-2.0mg的玉米素，0.05-0.1mg的萘乙酸，30000mg的蔗糖，5300-5500mg的琼脂配制而成，培养基B的PH值在5.4-5.8之间；（4）促进根茎生长的暗培养：将诱导出的、健壮的不定芽丛分割为2-3株一丛，转接至新鲜的培养基B中，在无光照、温度控制在18±1℃的条件下进行暗培养，愈伤组织增殖、芽丛生长为丛芽的同时，基部根茎增多，30d后可获得根茎发达的丛生状白化试管苗；（5）试管苗复壮培养：将培养基B中根茎发达的白化试管苗带根茎切割为0.5cm×0.5cm大小转入培养基C中；在光照度为1500-2000lx，光照时间为12h/d，温度为23±1℃的条件下进行培养，培养30d后小根茎迅速生长，同时丛芽大量繁殖；45d后可获得生长健壮的试管苗，其繁殖系数可达8.67；培养基C是由每升蒸馏水中加入1.5-2.0mg的玉米素，0.05-0.1mg的萘乙酸，5-10mg的多效唑，30000mg的蔗糖，5300-5500mg的琼脂配制而成，培养基C的PH值在5.4-5.8之间；（6）生根培养：将高为3-4cm长的试管苗接种于培养基D中，在光照度为1500-2000lx，光照时间为12h/d，温度为23±1℃的条件下进行培养，培养45d后获得长势健壮的生根苗；培养基D是由每升蒸馏水中加入0.5-1.5mg的萘乙酸，15000mg的蔗糖，5300-5500mg的琼脂配制而成，培养基D的PH值在5.4-5.8之间；（7）将6-8cm高的生根苗置于室温下炼苗3d后，从培养基中取出生根苗，清洗干净残留在生根苗上的培养基，放入质量浓度0.1-0.2%的多菌灵溶液（质量比）中消毒2-3min，假置在沙床上，保持空气湿度90%以上，用70%遮阳网遮阴，30d后成活率达95%以上；以后每隔10d喷施1次稀释20倍的MS营养液，30d后可移栽大田。采用本技术方案的有益效果是：1、将滇黄金外植体接种于培养基A中进行每隔7天的连续转接培养，能较好的去除滇黄精外植体组培过程中出现的褐化现象。2、在培养基B中，同时进行愈伤组织诱导、丛芽发生和增殖培养，简化了培养程序，提高了繁殖效率，繁殖系数可提高到8.67以上，组培时间可缩短至45d。在培养基B中培养15d后滇黄精外植体的基部出现愈伤组织，得愈率可达到91.23%；30d后愈伤组织表面开始出现不定丛芽，不定丛芽中分化出不定芽丛的分化率可达到100%；45d后丛芽分化率可达5.37。不定芽丛指的是愈伤组织表面已分化出的芽点；不定丛芽则指丛芽生长至肉眼可见幼小植株稚形；丛芽分化率=出现不定丛芽的愈伤组织数/出现不定芽丛的愈伤组织数。3、在育苗过程中暗培养阶段，滇黄精根茎的发达程度大幅提高，保证了移栽的成活率，成活率可达95%以上。4、本专利技术培养工序较为简单，分阶段采用四种培养基转接培养，克服了滇黄精进行组培育苗时容易滋生真菌和积累病毒的问题，培养出来的种苗适应性及抗逆性极强，降低了组培苗污染率，提高了品种种性的稳定性。5、用组织培养技术在培养室内好可实现周年生产，既节约了土地资源，又提高了经济效益，克服了传统繁殖方式无法周年进行生产的难点。具体实施方式实施例1：一种滇黄精的育苗方法，包括以下步骤：（1）滇黄精外植体准备：每年春季，将生长旺盛的滇黄精根茎从土中挖出，用毛刷洗去泥土，然后用解剖刀切取带幼芽根茎，用质量比为20%的洗衣粉水溶液浸泡10min，置流水下冲洗30min；冲洗后放到超净工作台上的烧杯中，烧杯中加入质量比为20%维生素C浸泡5min；然后用体积比为75%的乙醇浸泡30s后，转入质量比为0.1%的氯化汞中消毒5min，无菌水冲洗8次，每次为4min，得到滇黄精外植体，备用；（2）消除褐化培本文档来自技高网...

【技术保护点】
滇黄精的育苗方法，其特征在于，具体方案包括以下步骤：（1）滇黄精外植体准备：每年春季，将生长旺盛的滇黄精根茎从土中挖出，用毛刷洗去泥土，然后用解剖刀切取带幼芽根茎，用质量比为20%的洗衣粉水溶液浸泡10‑15 min，置流水下冲洗30‑60 min；冲洗后放到超净工作台上的烧杯中，烧杯中加入质量比为20%维生素C浸泡5‑10 min；然后用体积比为75%的乙醇浸泡30 s后，转入质量比为0.1%的氯化汞中消毒5‑8 min，无菌水冲洗8‑10次，每次不低于3 min，得到滇黄精外植体，备用；（2）消除褐化培养：将准备好的滇黄金外植体接种于培养基A中，在光照度为1500‑2000 lx，光照时间为8 h/d，温度为23 ± 1℃的条件下进行培养，每七天更换新的培养基A继续培养，培养基A的更换次数不少于两次；培养基A是由每升蒸馏水中加入5000‑10000 mg的聚乙烯比格烷酸酮，1.0‑3.0 g的活性炭，1.0‑10 mg的氯化钠，15000 mg的蔗糖和5300‑5500 mg的琼脂粉配制而成，培养基A的PH值在5.4‑5.8之间；（3）愈伤组织诱导、不定芽发生和增殖培养：将消除褐化后的滇黄精外植体接入培养基B中，在光照度为1500‑2000 lx，光照时间为12 h/d，温度为23 ± 1 ℃的条件下同步进行愈伤组织诱导、不定芽发生和增殖培养；培养15 d后滇黄精外植体的芽开始萌发长出叶片，并在基部出现愈伤组织；30 d后愈伤组织表面开始出现不定丛芽；45 d后丛芽分化率可达5.37；培养基B是由每升蒸馏水中加入 1.5‑2.0 mg的玉米素，0.05‑0.1 mg的萘乙酸，30000 mg的蔗糖，5300‑5500 mg的琼脂配制而成，培养基B的PH值在5.4‑5.8之间；（4）促进根茎生长的暗培养：将诱导出的、健壮的不定芽丛分割为2‑3株一丛，转接至新鲜的培养基B中，在无光照、温度控制在18 ± 1℃的条件下进行暗培养，愈伤组织增殖、芽丛生长为丛芽的同时，基部根茎增多，30 d后可获得根茎发达的丛生状白化试管苗；（5）试管苗复壮培养：将培养基B中根茎发达的白化试管苗带根茎切割为0.5 cm × 0.5 cm大小转入培养基C中；在光照度为1500‑2000 lx，光照时间为12 h/d，温度为23 ± 1 ℃的条件下进行培养，培养30 d后小根茎迅速生长，同时丛芽大量繁殖；45 d后可获得生长健壮的试管苗；培养基C是由每升蒸馏水中加入1.5‑2.0 mg的玉米素，0.05‑0.1 mg的萘乙酸，5‑10 mg的多效唑，30000 mg的蔗糖，5300‑5500 mg的琼脂配制而成，培养基C的PH值在5.4‑5.8之间；（6）生根培养：将高为3‑4 cm长的试管苗接种于培养基D中，在光照度为1500‑2000 lx，光照时间为12 h/d，温度为23 ± 1℃的条件下进行培养，培养45d后获得长势健壮的生根苗；培养基D是由每升蒸馏水中加入0.5‑1.5 mg的萘乙酸，15000 mg的蔗糖，5300‑5500 mg的琼脂配制而成，培养基D的PH值在5.4‑5.8之间；（7）将6‑8 cm高的生根苗置于室温下炼苗3 d后，从培养基中取出生根苗，清洗干净残留在生根苗上的培养基，放入质量浓度0.1‑0.2%的多菌灵溶液（质量比）中消毒2‑3 min，假置在沙床上，保持空气湿度90%以上，用70%遮阳网遮阴，30 d后成活率达95%以上；以后每隔10 d喷施1次稀释20倍的MS营养液，30 d后可移栽大田。...

【技术特征摘要】
1.滇黄精的育苗方法，其特征在于，具体方案包括以下步骤：（1）滇黄精外植体准备：每年春季，将生长旺盛的滇黄精根茎从土中挖出，用毛刷洗去泥土，然后用解剖刀切取带幼芽根茎，用质量比为20%的洗衣粉水溶液浸泡10-15min，置流水下冲洗30-60min；冲洗后放到超净工作台上的烧杯中，烧杯中加入质量比为20%维生素C浸泡5-10min；然后用体积比为75%的乙醇浸泡30s后，转入质量比为0.1%的氯化汞中消毒5-8min，无菌水冲洗8-10次，每次不低于3min，得到滇黄精外植体，备用；（2）消除褐化培养：将准备好的滇黄金外植体接种于培养基A中，在光照度为1500-2000lx，光照时间为8h/d，温度为23±1℃的条件下进行培养，每七天更换新的培养基A继续培养，培养基A的更换次数不少于两次；培养基A是由每升蒸馏水中加入5000-10000mg的聚乙烯比格烷酸酮，1.0-3.0g的活性炭，1.0-10mg的氯化钠，15000mg的蔗糖和5300-5500mg的琼脂粉配制而成，培养基A的PH值在5.4-5.8之间；（3）愈伤组织诱导、不定芽发生和增殖培养：将消除褐化后的滇黄精外植体接入培养基B中，在光照度为1500-2000lx，光照时间为12h/d，温度为23±1℃的条件下同步进行愈伤组织诱导、不定芽发生和增殖培养；培养15d后滇黄精外植体的芽开始萌发长出叶片，并在基部出现愈伤组织；30d后愈伤组织表面开始出现不定丛芽；45d后丛芽分化率可达5.37；培养基B是由每升蒸馏水中加入1.5-2.0mg的玉米素，0.05-0.1mg的萘乙酸，30000mg的蔗糖，5300-5500mg的琼脂配制而成，培养...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄衡宇，郭凤鸣，李继祥，金鹏程，肖文俊，李培源，张靖东，
申请(专利权)人：玉溪市祥馨农业技术开发有限公司，
类型：发明
国别省市：云南,53