用于蓝舌病病毒型特异性检测的竞争ELISA检测试剂盒及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种用于蓝舌病病毒型特异性检测的竞争ELISA检测试剂盒及其应用。所述试剂盒包括以下两组组分：组分I中包括包被蓝舌病病毒抗原I的酶标板和用于蓝舌病病毒型特异性检测的单克隆抗体I，所述的单克隆抗体I由杂交瘤细胞株1B6分泌产生；组分II中包括包被蓝舌病病毒抗原II的酶标板和用于蓝舌病病毒型特异性检测的单克隆抗体II，所述的单克隆抗体II由杂交瘤细胞株4A‑1G7分泌产生。本发明专利技术利用制备的两株4型BTV VP2单克隆抗体4A‑1G7以及1B6建立了蓝舌病病毒型特异性检测的联合竞争ELISA检测方法，该检测方法短时间内可以用于初步区分不同型蓝舌病感染的动物血清，实验条件要求低，适合于大规模的BTV血清抗体检查。

Competitive ELISA detection kit for bluetongue virus specific detection and its use

The present invention discloses a competitive ELISA detection kit for bluetongue virus specific detection and its use. The kit comprises the following two components: component I comprises coating bluetongue virus antigen I microplate and monoclonal antibodies for bluetongue virus type specific monoclonal antibody I detection, the I from the hybridoma cell strain 1B6 secreted; components included in II package by bluetongue virus II antigen ELISA plate and II monoclonal antibodies for bluetongue virus type specific monoclonal antibody detection, the II produced by hybridoma cell lines secreting 1G7 4A. Joint competition ELISA detection method of the invention was prepared by two strains of type 4 BTV VP2 monoclonal antibody 4A 1G7 and 1B6 established bluetongue virus type specific detection, the detection method of short time can be used to distinguish different types of animal sera of bluetongue virus infection, requirement of experimental conditions for low. BTV serum antibody check scale.

【技术实现步骤摘要】
用于蓝舌病病毒型特异性检测的竞争ELISA检测试剂盒及其应用
本专利技术涉及一种用于蓝舌病毒检测的试剂盒，特别涉及一种用于蓝舌病病毒型特异性检测的竞争ELISA检测试剂盒，还涉及其在蓝舌病毒检测中的应用，本专利技术属于病毒检测

技术介绍
蓝舌病(BT)是一种烈性非接触性传染病，主要经节肢动物(库蠓、伊蚊等)传播，可感染反刍动物如牛、绵羊、山羊、鹿、非洲羚羊、骆驼等。世界动物卫生组织将其列为必须通报的动物疫病，我国将其列为一类动物疫病。BTV广泛分布于热带、亚热带地区，BTV血清型众多，目前至少有27个血清型，新发现的28型和29型正在检测中。通过BT流行病学调查，中国共在31个省、市(区)发现BTV血清阳性家畜，并从云南、湖北和安徽等地自然感染羊体中分离获得BTV，已检测出BTV-1、BTV-2、BTV-3、BTV-4、BTV-5、BTV-7、BTV-12、BTV-15、BTV-16、BTV-24十种血清型。BTV(Bluetonguediseasevirus,BTV)是由10个基因片段组成的双股RNA病毒，分别编码7个结构蛋白(VP1-VP7)和4个非结构蛋白(NS1、N本文档来自技高网...

【技术保护点】
用于蓝舌病病毒型特异性检测的竞争ELISA检测试剂盒，其特征在于包括以下两组组分：组分I中包括包被蓝舌病病毒抗原I的酶标板和用于蓝舌病病毒型特异性检测的单克隆抗体I，所述的单克隆抗体I由杂交瘤细胞株1B6分泌产生，所述的杂交瘤细胞株1B6保藏在中国典型培养物保藏中心，地址在武汉大学，其微生物保藏号为：CCTCC No.C2016107；所述的蓝舌病病毒抗原I为蓝舌病病毒4型VP2蛋白或是含有SEQ ID NO.1所示抗原表位的VP2蛋白的片段；组分II中包括包被蓝舌病病毒抗原II的酶标板和用于蓝舌病病毒型特异性检测的单克隆抗体II，所述的单克隆抗体II由杂交瘤细胞株4A‑1G7分泌产生，所述的...

【技术特征摘要】
1.用于蓝舌病病毒型特异性检测的竞争ELISA检测试剂盒，其特征在于包括以下两组组分：组分I中包括包被蓝舌病病毒抗原I的酶标板和用于蓝舌病病毒型特异性检测的单克隆抗体I，所述的单克隆抗体I由杂交瘤细胞株1B6分泌产生，所述的杂交瘤细胞株1B6保藏在中国典型培养物保藏中心，地址在武汉大学，其微生物保藏号为：CCTCCNo.C2016107；所述的蓝舌病病毒抗原I为蓝舌病病毒4型VP2蛋白或是含有SEQIDNO.1所示抗原表位的VP2蛋白的片段；组分II中包括包被蓝舌病病毒抗原II的酶标板和用于蓝舌病病毒型特异性检测的单克隆抗体II，所述的单克隆抗体II由杂交瘤细胞株4A-1G7分泌产生，所述的杂交瘤细胞株4A-1G7保藏在中国典型培养物保藏中心，地址在武汉大学，其微生物保藏号为：CCTCCNo.C201757；所述的蓝舌病病毒抗原II为蓝舌病病毒4型VP2蛋白或是含有SEQIDNO.2所示抗原表位的VP2蛋白的片段。2.如权利要求1所述的竞争ELISA检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括抗鼠的酶标二抗、阴性对照、阳性对照、稀释液、TMB显色液、洗涤液和终止液。3.如权利要求1或2所述的竞争ELISA检测试剂盒，其特征在于，所述的抗鼠的酶标二抗为HRP标记的山羊抗鼠IgG。4.如权利要求3所述的竞争ELISA检测试剂盒，其特征在于，所述阴性对照为蓝舌病病毒阴性血清；所述阳性对照为蓝舌病病毒4型阳性血清；所述稀释液为含有5w/v％脱脂乳的PBS缓冲液；所述洗涤液为PBS缓冲液。5.如权利要求4所述的竞争ELISA检测试剂盒，其特征在于，所述的PBS缓冲液中包括NaCl8g，KCl0.2g，Na2HP041.44g，KH2PO40.24g，溶解后pH值调为7.4，用去离子水定容至1000mL。6.如权利要求1所述的竞争ELISA检测试剂盒，其特征在于，所述的含有SEQIDNO.1所示抗原表位的VP2蛋白的片段由Genbank登录号为132566356的4型BTV的L2基因的976-1980bp的核苷酸序列编码；所述的有SEQIDNO.2所示抗原表位的VP2蛋白的片段由Genbank登录号为132...

【专利技术属性】
技术研发人员：唐丽杰，王丽，周晗，李佳璇，李一经，姜艳平，崔文，徐义刚，刘敏，乔薪瑗，
申请(专利权)人：东北农业大学，
类型：发明
国别省市：黑龙江,23