一种流行性乙型脑炎的重组酶常温扩增核酸（RT‑RPA）试纸条检测试剂盒及应用制造技术

本发明专利技术公开一种检测流行性乙型脑炎的重组酶常温扩增核酸(RT‑RPA)试纸条试剂盒及应用。该试剂盒包含核苷酸序列如权利要求1所示的引物组和核酸检测试纸条。该试剂盒的使用方法如下：首先配置RT‑RPA反应体系，进行常温恒温反应；恒温反应所得产物用核酸检测试纸条检测后直接进行判读：阳性结果为出现两条红色条带，一条位于检测区内，另一条位于质控区内；阴性结果仅在质控区一条红色条带，在检测区内无红色条带出现。本发明专利技术系首次采用RPA‑核酸试纸条技术建立快速检测猪JEV的方法，具有操作简单，特异性好，且反应结果易于观察，安全无污染等特点，非常适用于临床现场检测。

The recombinant enzyme at room temperature for epidemic encephalitis B nucleic acid amplification (RT RPA) strip test kit and Application

The invention discloses a recombinant enzyme at room temperature for detecting Japanese encephalitis nucleic acid amplification (RT RPA) test kit and application. The kit comprises a nucleotide sequence, such as a primer set and a nucleic acid detection test strip as shown in claim 1. The using method of the kit are as follows: first, configure the RT RPA reaction system, room temperature and constant temperature reaction; isothermal reaction product obtained by nucleic acid detection strip directly after interpretation: positive results for two red bands, one is located in the detection area, another is located in the control area; only negative results in the control area of a red band in the detection area of red bands. The method of the invention for the first time using RPA technology to establish nucleic acid strip for rapid detection of porcine JEV, has the advantages of simple operation, good specificity, and the reaction results easy to observe the characteristics of safety and no pollution, is suitable for clinical testing.

【技术实现步骤摘要】
一种流行性乙型脑炎的重组酶常温扩增核酸（RT-RPA）试纸条检测试剂盒及应用
本专利技术涉及生物
，具体涉及一种检测流行性乙型脑炎病毒的等温扩增技术与封闭式侧向流层析技术相结合的试剂盒及应用。
技术介绍
流行性乙型脑炎又称日本乙型脑炎(Japaneseencephalitis，JE)，简称乙脑，是由流行性乙型脑炎病毒(Japaneseencephalitisvirus，JEV)引起的一种中枢神经系统的急性人畜共患传染病，被世界动物卫生组织(OIE)列为二类动物疫病，被我国卫生部列为乙类传染病。该传染病主要以三带缘库蚊(Culextritaeniorhynchus)作为主要的传播媒介，以高热和狂暴或者沉郁等神经症状为主要特征。流行性乙型脑炎的爆发具有明显的季节性和一定的地理分布区，多发生于夏秋季节蚊类孳生的季节，属于自然疫源性虫媒传染病。乙型脑炎主要流行于热带、亚热带和温带地区，特别是亚洲东部、东南部的水稻产区，气候温暖、潮湿多雨，蚊虫大量孳生时最为流行，故该病大规模流行呈现一定的周期性。乙型脑炎流行初期主要发生在日本、朝鲜和中国等温带地区，日本于1924年首次证实该病，并分离到本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于快速检测流行性乙型脑炎的重组酶常温扩增核酸(RT‑RPA)试纸条试剂盒，其特征在于包含如下引物组和核酸检测试纸条：所述的引物组的核苷酸序列如下所示：上游引物：5’‑(Biotin)CGGAAAACCATGGGAATTACTCAGCGCAA‑3’下游引物：5’‑CATGTGCCTCTTCAAATTCCATGAGGAGTTC‑3’探针：5’‑(Fitc(FAM))CTCCTTGGTTCACAATCCAGTGTGACTTCTC(THF)CATAATCACCAAGCT(C3spacer)‑3’。

【技术特征摘要】
1.一种用于快速检测流行性乙型脑炎的重组酶常温扩增核酸(RT-RPA)试纸条试剂盒，其特征在于包含如下引物组和核酸检测试纸条：所述的引物组的核苷酸序列如下所示：上游引物：5’-(Biotin)CGGAAAACCATGGGAATTACTCAGCGCAA-3’下游引物：5’-CATGTGCCTCTTCAAATTCCATGAGGAGTTC-3’探针：5’-(Fitc(FAM))CTCCTTGGTTCACAATCCAGTGTGACTTCTC(THF)CATAATCACCAAGCT(C3spacer)-3’。2.根据权利要求1所述的检测流行性乙型脑炎病毒的RT-RPA核酸试纸条试剂盒，其特征在于：所述的核酸检测试纸条为通用型核酸检测试纸条。3.根据权利要求2所述的检测流行性乙型脑炎病毒的RT-RPA核酸试纸条试剂盒，其特征在于：还包含全封闭式靶核酸扩增物快速检测装置；全封闭式靶核酸扩增物快速检测装置为将通用型核酸检测试纸条置入一个掌上塑料检测装置内得到。4.根据权利要求1所述的检测流行性乙型脑炎病毒的RT-RPA核酸试纸条试剂盒，其特征在于：还包含TwistAmpTMnfokit包括重组酶聚合酶冻干酶粉、水解缓冲液RehydrationBuffer、280mM醋酸镁溶液。5.根据权利要求1～4任一项所述的检测流行性乙型脑炎病毒的RT-RPA核酸试纸条试剂盒的应用，其特征在于包含以下...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈金顶，张静远，梁辉，邓少锋，朱梦娇，赵明秋，丁红星，
申请(专利权)人：华南农业大学，
类型：发明
国别省市：广东,44