一种透明质酸－壳聚糖交联生物相容材料的制备方法，属于生物化学技术领域。本发明专利技术以水溶性碳化亚二胺（ＥＤＣ）作为交联剂，Ｎ－羟基丁二酰亚胺（ＮＨＳ）作为活性助剂，以Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′－四甲基乙二胺（ＴＥＭＥＤ）调节ｐＨ，使透明质酸和壳聚糖进行交联反应，经透析和冷冻干燥制得透明质酸－壳聚糖交联生物相容材料。该材料在药物包埋和组织填充，膜材料等领域具有良好的应用前景。
【技术实现步骤摘要】
一种透明质酸-壳聚糖交联生物相容材料的制备方法，属于生物化学
技术介绍
透明质酸和壳聚糖都是具有优良生物相容性的多糖物质，它们在生物体内具有特殊的生物化学作用。如透明质酸能作为关节润滑剂和伤口促愈剂；壳聚糖在作为伤口愈合剂的同时还具有抗菌的作用。上述两种多糖还能在药物载体，组织填充剂的领域得到应用。由于生物体内都含有透明质酸酶，所以普通的透明质酸在生物体内极其容易分解。为此国内外的学者提出了化学改性的方法，使透明质酸抗降解性能提高。他们大都选择在透明质酸的侧链上，交联上小分子化学物质的方法来提高透明质酸的抗降解性能。但是通过这样方法交联后的透明质酸的衍生物，功能单一，不具有多重的生物功效，特别是这样的生物材料并不是完全的生物相容。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种透明质酸-壳聚糖交联生物相容材料的制备方法，采用透明质酸和壳聚糖交联的方法，获得新型的生物相容性材料。该材料在药物包埋和组织填充，膜材料等领域具有良好的应用前景。本专利技术的技术方案由于透明质酸和壳聚糖上分别有羧基和氨基，所以采用水溶性碳化亚二胺作为交联剂，在N-羟基丁二酰亚胺的作用下使羧基和氨基发生作用，从而使透明质酸和壳聚糖通过仲酰胺键连接在一起。透明质酸和壳聚糖化学交联反应式如下 以水溶性碳化亚二胺作为交联剂，N-羟基丁二酰亚胺作为活性助剂，以N，N，N′，N′-四甲基乙二胺调节pH，使透明质酸和壳聚糖进行交联反应，经透析和冷冻干燥制得透明质酸-壳聚糖交联生物相容材料。具体工艺为(A)透明质酸盐酸溶液配制透明质酸溶解在0.1M HCl溶液中，透明质酸的质量体积浓度为0.005-0.01g/mL，在透明质酸盐酸溶液中加入最终浓度为2M NaCl固体，搅拌溶解，另外称取与透明质酸羧基摩尔数相等的水溶性碳化亚二胺和N-羟基丁二酰亚胺，在少量的超纯水中溶解，然后倒入透明质酸盐酸溶液中，搅拌30分钟。(B)壳聚糖盐酸溶液配制壳聚糖溶解在0.1M HCl溶液中，壳聚糖的质量体积浓度为0.005-0.01g/mL。(C)两种溶液混合和调pH将壳聚糖盐酸溶液注入透明质酸盐酸溶液中，不断充分搅拌，在溶液稳定均一时，向混合液中缓缓加入N，N，N′，N′-四甲基乙二胺，调pH为4-5。或向透明质酸盐酸溶液和壳聚糖盐酸溶液中分别加入N，N，N′，N′-四甲基乙二胺，调pH为4-5，然后将壳聚糖盐酸溶液注入透明质酸盐酸溶液中。(D)交联反应将混合溶液在室温下搅拌反应3-12小时，溶液成凝胶状态。(E)透析和冷冻干燥将搅拌产物在截留分子量为14000的透析袋中透析3天，凝胶状透析产物经过冷冻干燥获得最终网状结构的固体成品。本专利技术的有益效果本专利技术提供了一种透明质酸交联改性的方法，采用透明质酸和壳聚糖交联，获得新型的生物相容性材料。该材料在药物包埋和组织填充，膜材料等领域具有良好的应用前景，拓展了透明质酸的应用领域。根据本专利技术的透明质酸-壳聚糖交联生物相容性材料具有如下特征该材料具有较高的生物稳定性，能耐受高达226℃的温度。同时该材料克服了透明质酸不能抗透明质酸酶和自由基降解的缺点，具有极高生物稳定性，同时由于选用了生物相容性的材料，使该材料能与生物体完全相容。附图说明图1透明质酸-壳聚糖交联产物扫描电镜图具体实施方式实施例1将0.2g(0.5mM)透明质酸和0.2g(1.25mM)壳聚糖分别溶解在20ml 0.1MHCl溶液中，搅拌过夜。向已溶解的透明质酸盐酸溶液中加入最终浓度为2MNaCl固体，充分搅拌溶解。称取0.0956g(0.5mM)EDC和0.0575g(0.5mM)NHS，将它们在5ml超纯水中溶解，然后倒入透明质酸盐酸溶液中，搅拌30min。然后将壳聚糖盐酸溶液注入透明质酸盐酸溶液中，不断充分搅拌。在溶液稳定均一时，向混合液中缓缓加入液体状N，N，N′，N′-四甲基乙二胺，调pH为5.0。在室温下搅拌12h。将搅拌产物装入截留分子量为14000的透析袋中，在1M NaCl溶液中透析2天，然后在超纯水中透析一天。透析产物经过冷冻干燥获得网状材料。实施例2将0.1g透明质酸和0.2g壳聚糖分别溶解在20ml 0.1M HCl溶液中，搅拌过夜。向已溶解的透明质酸盐酸溶液中加入最终浓度为2M NaCl固体，充分搅拌溶解。称取0.0478g EDC和0.0288g NHS，将它们在5ml超纯水中溶解，然后倒入透明质酸盐酸溶液中，搅拌30min。然后将壳聚糖盐酸溶液注入透明质酸盐酸溶液中，不断充分搅拌。在溶液稳定均一时，向混合液中缓缓加入液体状N，N，N′，N′-四甲基乙二胺，调pH为4.5。在室温下搅拌9h。将搅拌产物装入截留分子量为14000的透析袋中，在1M NaCl溶液中透析2天，然后在超纯水中透析一天。透析产物经过冷冻干燥获得网状材料。实施例3将0.2g透明质酸和0.1g壳聚糖分别溶解在20ml 0.1M HCl溶液中，搅拌过夜。向已溶解的透明质酸盐酸溶液中加入最终浓度为2M NaCl固体，充分搅拌溶解。称取0.0956g EDC和0.0575g NHS，将它们在5ml超纯水中溶解，然后倒入透明质酸盐酸溶液中，搅拌30min。向两多糖溶液中分别加入液体状N，N，N′，N′-四甲基乙二胺，调pH为4.0。然后将壳聚糖盐酸溶液注入透明质酸盐酸溶液中，在室温下搅拌6h。将搅拌产物装入截留分子量为14000的透析袋中，在1M NaCl溶液中透析2天，然后在超纯水中透析1天。透析产物经过冷冻干燥获得网状材料。实施例4 将0.1g透明质酸和0.1g壳聚糖分别溶解在20ml 0.1M HCl溶液中，搅拌过夜。向已溶解的透明质酸盐酸溶液中加入最终浓度为2M NaCl固体，充分搅拌溶解。称取0.0478g EDC和0.0288g NHS，将它们在5ml超纯水中溶解，然后倒入透明质酸盐酸溶液中，搅拌30min。向两多糖溶液中分别加入液体状N，N，N′，N′-四甲基乙二胺，调pH为4.0。然后将壳聚糖盐酸溶液注入透明质酸盐酸溶液中，在室温下搅拌3h。将搅拌产物装入截留分子量为14000的透析袋中，在1M NaCl溶液中透析2天，然后在超纯水中透析1天。透析产物经过冷冻干燥获得网状材料。权利要求1.一种透明质酸-壳聚糖交联生物相容材料的制备方法，其特征是以水溶性碳化亚二胺作为交联剂，N-羟基丁二酰亚胺作为活性助剂，以N，N，N′，N′-四甲基乙二胺调节pH，使透明质酸和壳聚糖进行交联反应，经透析和冷冻干燥制得透明质酸-壳聚糖交联生物相容材料；(A)透明质酸盐酸溶液配制透明质酸溶解在0.1M HCl溶液中， 透明质酸的质量体积浓度为0.005-0.01g/mL，在透明质酸盐酸溶液中加入最终浓度为2M NaCl固体，搅拌溶解，另外称取与透明质酸羧基摩尔数相等的水溶性碳化亚二胺和N-羟基丁二酰亚胺，在少量的超纯水中溶解，然后倒入透明质酸盐酸溶液中，搅拌30分钟；(B)壳聚糖盐酸溶液配制壳聚糖溶解在0.1M HCl溶液中，壳聚糖的质量体积浓度为0.005-0.01g/mL；(C)两种溶液混合和调pH将壳聚糖盐酸溶液注入透明质酸盐酸溶液中，不断充分搅拌，在溶液稳定均一时，向混合液中缓缓加入N，N，N′，N′-四甲基乙二胺，调pH为4-5；或向透明质酸盐本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种透明质酸－壳聚糖交联生物相容材料的制备方法，其特征是以水溶性碳化亚二胺作为交联剂，Ｎ－羟基丁二酰亚胺作为活性助剂，以Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′－四甲基乙二胺调节ｐＨ，使透明质酸和壳聚糖进行交联反应，经透析和冷冻干燥制得透明质酸－壳聚糖交联生物相容材料；（Ａ）透明质酸盐酸溶液配制：透明质酸溶解在０．１ＭＨＣｌ溶液中，透明质酸的质量体积浓度为０．００５－０．０１ｇ／ｍＬ，在透明质酸盐酸溶液中加入最终浓度为２ＭＮａＣｌ固体，搅拌溶解，另外称取与透明质酸羧基摩尔数相等的水溶性碳化亚二胺和Ｎ－羟基丁二酰亚胺，在少量的超纯水中溶解，然后倒入透明质酸盐酸溶液中，搅拌３０分钟；（Ｂ）壳聚糖盐酸溶液配制：壳聚糖溶解在０．１ＭＨＣｌ溶液中，壳聚糖的质量体积浓度为０．００５－０．０１ｇ／ｍＬ；（Ｃ）两种溶液混合和调ｐＨ：将壳聚糖盐酸溶液注入透明质酸盐酸溶液中，不断充分搅拌，在溶液稳定均一时，向混合液中缓缓加入Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′－四甲基乙二胺，调ｐＨ为４－５；或向透明质酸盐酸溶液和壳聚糖盐酸溶液中分别加入Ｎ，Ｎ，Ｎ′，Ｎ′－四甲基乙二胺，调ｐＨ为４－５，然后将壳聚糖盐酸溶液注入透明质酸盐酸溶液中；（Ｄ）交联反应：将混合溶液在室温下搅拌反应３－１２小时，溶液成凝胶状态；（Ｅ）透析和冷冻干燥：将搅拌产物在截留分子量为１４０００的透析袋中透析３天，凝胶状透析产物经过冷冻干燥获得最终网状结构的固体成品。...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：陈坚，邓禹，刘龙，堵国成，李秀芬，刘登如，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：32[中国|江苏]
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