非疾病诊断和治疗用途的检测瘦素基因多态性的方法及试剂盒技术

本发明专利技术涉及分子生物学技术领域，公开了一种非疾病诊断和治疗用途的检测瘦素基因多态性的方法及试剂盒。该方法包括下述步骤：（1）以待检测基因组DNA为模板，进行PCR扩增；得到PCR扩增产物；（2）利用限制性内切酶对PCR扩增产物进行酶切，得到酶切产物；（3）对酶切产物进行琼脂糖胶电泳，然后进行胶回收；得到胶回收产物；（4）对胶回收产物进行基因型分析，确定瘦素基因的多态性；其中，步骤（1）中的PCR扩增，使用SEQ ID NO:1所示的上游引物和SEQ ID NO:2所示的下游引物进行。本实施方式通过设计特异性引物对，使得瘦素基因的多态性位点的基因型能够快速、准确的检测，降低他汀类降脂药物导致的肌病副作用的风险，提高了高血脂症患者的降脂疗效。

Methods and kits for detecting leptin gene polymorphisms for non disease diagnosis and therapeutic use

The invention relates to the technical field of molecular biology, and discloses a method and a kit for detecting the polymorphism of the leptin gene for non disease diagnosis and treatment purposes. The method comprises the following steps: (1) for detection of genomic DNA as template for PCR amplification; PCR amplification products; (2) using restriction endonuclease of PCR amplified products were digested by enzyme digestion products; (3) of the digested products by agarose gel electrophoresis, and then get glue glue recovery; recovery of product; (4) genotype analysis of plastic recycling products, to determine the polymorphism of leptin gene; among them, step (1) in the downstream primer PCR amplification, using SEQ ID NO:1 shown upstream primers and SEQ ID NO:2 shown in the. The way through the design of specific primers, the genotype polymorphism of leptin gene can quickly and accurately detect, reduce the risk of statins induced myopathy of side effects, improve the lipid-lowering efficacy for patients with hyperlipidemia.

【技术实现步骤摘要】
非疾病诊断和治疗用途的检测瘦素基因多态性的方法及试剂盒
本专利技术涉及分子生物学
，特别涉及一种非疾病诊断和治疗用途的检测瘦素基因多态性的方法及试剂盒。
技术介绍
高血脂症是一种常见的代谢性疾病，它是引起心脑血管疾病的重要风险因素，与动脉硬化、肾病、糖尿病、肥胖、脂肪肝等疾病有密切关联，尤其是与高血压和心脑血管疾病等相关，严重地危害了人们的健康。他汀类药物是目前临床上应用得最广泛的一类降脂药物，但由于遗传和环境因素导致的个体化差异，他汀类药物的降脂疗效在不同个体中也表现得各不相同。同时，他汀类药物具有严重的肌病副作用很大程度上限制了他汀类药物临床的广泛使用。3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶抑制剂（HMG-CoA）即是临床他汀类药物，由于它可以抑制胆固醇的合成，因此广泛用于降低胆固醇治疗高血脂症患者。HMG-CoA还原酶是胆固醇合成限速酶，他汀类药物能阻断HMG-CoA还原酶的活性。该抑制可导致低密度脂蛋白胆固醇受体水平上调，进而增加低密度脂蛋白的摄入和降解、减少胆固醇累积、减少脂蛋白分泌和胆固醇的合成。尽管HMG-CoA还原酶能有效降低胆固醇水平、降低临床心血管事件达20%本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种非疾病诊断和治疗用途的检测瘦素基因多态性的方法，其特征在于，包括下述步骤：（1）以待检测基因组DNA为模板，进行PCR扩增；得到PCR扩增产物；（2）利用限制性内切酶对所述PCR扩增产物进行酶切，得到酶切产物；（3）对所述酶切产物进行琼脂糖胶电泳，然后进行胶回收；得到胶回收产物；（4）对所述胶回收产物进行基因型分析，确定瘦素基因的多态性；其中，所述步骤（1）中的PCR扩增，使用SEQ ID NO: 1所示的上游引物和SEQ ID NO: 2所示的下游引物进行：SEQ ID NO: 1：5’‑ AGC CAA GGC AAA ATT GAG G ‑3’SEQ ID NO: 2：5’‑ GGA...

【技术特征摘要】
1.一种非疾病诊断和治疗用途的检测瘦素基因多态性的方法，其特征在于，包括下述步骤：（1）以待检测基因组DNA为模板，进行PCR扩增；得到PCR扩增产物；（2）利用限制性内切酶对所述PCR扩增产物进行酶切，得到酶切产物；（3）对所述酶切产物进行琼脂糖胶电泳，然后进行胶回收；得到胶回收产物；（4）对所述胶回收产物进行基因型分析，确定瘦素基因的多态性；其中，所述步骤（1）中的PCR扩增，使用SEQIDNO:1所示的上游引物和SEQIDNO:2所示的下游引物进行：SEQIDNO:1：5’-AGCCAAGGCAAAATTGAGG-3’SEQIDNO:2：5’-GGAGACTGAGGCGGGAGGA-3’。2.根据权利要求1所述的非疾病诊断和治疗用途的检测瘦素基因多态性的方法，其特征在于，所述步骤（1）中进行PCR扩增的反应体系为：待检测基因组DNA模板45ng；上游引物20umol/L0.15ul；下游引物20umol/L0.15ul；dNTPs2.0mmol/l4ul；10×缓冲液1.0ul2.5ul；TaqDNA聚合酶3U0.15ul；加ddH2O补足至25ul。3.根据权利要求1所述的非疾病诊断和治疗用途的检测瘦素基因多态性的方法，其特征在于，所述步骤（1）中进行PCR扩增的反应程序为：预变性：95℃10分钟；变性：94℃30秒；退火：59℃45秒；延伸：68℃4...

【专利技术属性】
技术研发人员：蒋善群，吴素文，
申请(专利权)人：安徽大学，
类型：发明
国别省市：安徽,34