一种异源表达群体感应淬灭酶的方法技术

技术编号:16121994 阅读:434 留言:0更新日期:2017-09-01 17:26
本发明专利技术的目的是提供一种在产酶溶杆菌中异源表达群体感应淬灭酶的方法。本发明专利技术通过启动子的选择优化,利用高效恒定表达启动子PgroEL,实现了来自于海洋细菌耐油具柄菌的群体感应淬灭酶基因momL在陆生菌产酶溶杆菌中的异源表达,使构建的工程菌株具有抗菌及群体感应淬灭酶双重活性。并且,本发明专利技术将产酶溶杆菌的黄色素合成基因簇中的酮还原酶基因作为重组载体的整合位点,通过同源重组导致黄色素基因插入失活,而使菌落呈乳白色的方法,来筛选目标重组菌株,筛选效率大大提高。

A method for heterologous expression of quorum sensing quenching enzymes

The object of the present invention is to provide a method for heterologous expression of quorum sensing quenching enzymes in an enzyme producing bacillus. The present invention through optimization of promoter, promoter of PgroEL by high performance constant, realized from the Yu Haiyang group induction quenching oil resistant bacterial strains stipitate killing enzyme gene momL in terrestrial bacterium Lysobacter coli heterologous expression of the constructed engineering bacteria with antibacterial and group induction quenching double enzyme activity. Moreover, the invention will produce yellow strain pheromone biosynthesis gene cluster in ketoreductase gene as the integration sites of the recombinant vector by homologous recombination, resulting in yellow pigment gene insertion inactivation, and the method of colony was milky white, to screen the target recombinant strains, screening efficiency is greatly improved.

【技术实现步骤摘要】
一种异源表达群体感应淬灭酶的方法
本专利技术属于有益微生物构建
,具体涉及一种在产酶溶杆菌中异源表达群体感应淬灭酶的方法。
技术介绍
产酶溶杆菌广泛生存于土壤和水环境中,能够分泌一系列胞外酶及具有抗植物真菌病原菌活性的次级代谢产物,是溶杆菌属中最具有生物防治潜力的一种革兰氏阴性菌。近年来,产酶溶杆菌作为一种新的生物防治剂被普遍用于防治由真菌引起的农作物病害,如产酶溶杆菌OH11对立枯丝核菌、瓜果腐酶、辣椒疫霉菌表现出较强的抑制活性,并且对番茄青枯病也具有很好的防治作用,其防治效果达86.4%(Borasretal.1993);产酶溶杆菌3.1T8对坪草腐霉枯萎病菌具有拮抗作用,其产生的脂肪酶对腐霉根冠腐病存在抑制作用(Brederodeetal.1991),此外,3.1T8也能够对立枯丝核菌、瓜果腐酶、辣椒疫霉菌、番茄枯萎菌、番茄叶霉菌、黄瓜褐斑病菌进行抑制(Folmanetal.2003);产酶溶杆菌N4-7对由夏季斑枯病菌引起的草坪夏季斑枯病具有较好的生物防治作用(Kobayashietal.1996);产酶溶杆菌C3可以用于防治由单孢锈菌引起的大豆锈病,平脐蠕孢菌引起的高本文档来自技高网...
一种异源表达群体感应淬灭酶的方法

【技术保护点】
一种重组表达载体,其特征在于,所述的重组表达载体,其中使用的启动子的核苷酸序列为SEQ ID NO:1。

【技术特征摘要】
1.一种重组表达载体,其特征在于,所述的重组表达载体,其中使用的启动子的核苷酸序列为SEQIDNO:1。2.权利要求1所述的重组表达载体的用途,是在产酶溶杆菌中重组表达外源基因。3.如权利要求2所述的用途,其特征在于,所述的外源基因为群体感应淬灭酶MomL。4.权利要求1所述的重组表达载体将群体感应淬灭酶MomL整合到产酶溶杆菌的黄色素合成基因簇中的应用。5.如权利要求4所述的应用,其特征在于,所述的群...

【专利技术属性】
技术研发人员:王岩张晓华李慧杜良成
申请(专利权)人:中国海洋大学
类型:发明
国别省市:山东,37

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