一种猪肾细胞缺铁模型及其建立方法技术

本发明专利技术公开了一种猪肾细胞缺铁模型及其建立方法，其中，建立方法的步骤包括：S1猪肾细胞培养；S2缺铁诱导：在猪肾细胞的基础培养液中加入缺铁诱导剂，致使猪肾细胞产生缺铁应激，得到猪肾细胞缺铁模型。本发明专利技术能为深入探索和预防新生动物缺铁性贫血提供可靠的技术和方法。

A porcine kidney cell model of iron deficiency and establishment method

The invention discloses a porcine kidney cell model of iron deficiency and establishment method, which method comprises the steps of S1 pig kidney cell culture; S2: iron deficiency induced in liquid iron deficiency induced by adding agent based pig kidney cell culture, resulting in pig kidney cells to produce iron deficiency stress, from porcine kidney cell model of iron deficiency. The invention can provide reliable techniques and methods for further exploration and prevention of iron deficiency anemia in newborn animals.

【技术实现步骤摘要】
一种猪肾细胞缺铁模型及其建立方法
本专利技术属于生物领域，具体涉及一种猪肾细胞缺铁模型及其建立方法。
技术介绍
铁是生物体需要量最大而又最易产生代谢障碍的必需微量元素，铁摄入不足会引起动物机体贫血或相关功能障碍。因此，缺铁模型的建立对缺铁性疾病的研究至关重要。目前的一些缺铁模型的方法为：剪尾放血法或是用低铁饲料喂养。迄今，没有关于猪肾缺铁细胞建立的方法和模型。
技术实现思路
本专利技术的目的是：提供一种猪肾细胞缺铁模型及其建立方法，为深入探索和预防新生动物缺铁性贫血提供可靠的缺铁模型。本专利技术提供的技术方案：一种猪肾细胞缺铁模型的建立方法，包括以下步骤：S1猪肾细胞培养；S2缺铁诱导：在猪肾细胞的基础培养液中加入缺铁诱导剂，致使猪肾细胞产生缺铁应激，得到猪肾细胞缺铁模型。进一步的，所述缺铁诱导剂为去铁胺。进一步的，所述步骤S2缺铁诱导的具体方法为：在猪肾细胞的基础培养液中加入去铁胺溶液孵育12～48小时，得到猪肾细胞缺铁模型；所述去铁胺溶液的浓度为：75～125μM。进一步的，所述步骤S2缺铁诱导的具体方法为：收集猪肾细胞对数期细胞，调整细胞悬液浓度104个/ml，每孔加入2～3ml；在36～37℃、4～6%CO2培养箱内进行培养；至细胞单层铺满孔底加入去铁胺溶液孵育12～48小时，得到猪肾细胞缺铁模型；所述去铁胺溶液的浓度为：75～125μM。进一步的，所述步骤S1猪肾细胞培养中选取的猪肾细胞为新生仔猪的肾细胞。进一步的，所述步骤S1猪肾细胞培养的具体方法为：选用原代的猪肾细胞，以DMEM含血清培养液为基础培养液，在36～37℃、4～6%CO2培养箱内进行培养。进一步的，所述的猪肾细胞缺铁模型的肾细胞抑制率为0～15%。进一步的，所述的猪肾细胞缺铁模型的铁含量为100～180μg/dL。本专利技术至少具有以下优点之一：一．本专利技术提供了一种猪肾细胞缺铁模型及其建立方法，为深入探索和预防新生动物缺铁性贫血提供可靠的技术和方法。二．由于肾脏是合成促红细胞生成素（EPO）的主要场所，与红细胞生成和血红蛋白合成密切相关，因此本专利技术猪肾细胞缺铁模型是研究铁营养及预防贫血的优良的细胞材料。三．本专利技术制得的猪肾细胞缺铁模型活性好，肾细胞抑制率低，缺铁效果明显。四．本专利技术的建立方法简单，易操作，重复性强。附图说明图1正常猪肾细胞的细胞形态；图2猪肾细胞缺铁模型的细胞形态；图3去铁铵浓度对猪肾细胞的抑制率的影响；图4去铁铵浓度对猪肾细胞铁含量的影响；图5去铁铵孵育时间对猪肾细胞的抑制率的影响。具体实施方式实施例1一种猪肾细胞缺铁模型的建立方法，包括以下步骤：S1猪肾细胞培养：选用原代的猪肾细胞，以DMEM含血清培养液为基础培养液，在36℃、4%CO2培养箱内进行培养。其中，猪肾细胞为新生仔猪的肾细胞。这是由于新生仔猪一般出生后如不补铁，7天内会出现严重贫血症状。而肾脏是合成促红细胞生成素（EPO）的主要场所，与红细胞生成和血红蛋白合成密切相关。选用新生仔猪的肾细胞建立缺铁模型，易操作，重复性好。S2缺铁诱导：在猪肾细胞的基础培养液中加入缺铁诱导剂，致使猪肾细胞产生缺铁应激，得到猪肾细胞缺铁模型。其中，所述缺铁诱导剂为去铁胺。去铁胺的浓度为：75μM。在猪肾细胞的基础培养液中加入去铁胺孵育12小时，得到猪肾细胞缺铁模型。本专利技术得到的猪肾细胞缺铁模型的肾细胞抑制率为0～15%；猪肾细胞缺铁模型的铁含量为100～180μg/dL。实施例2一种猪肾细胞缺铁模型的建立方法，包括以下步骤：S1猪肾细胞培养：选用原代的猪肾细胞，以DMEM含血清培养液为基础培养液，在37℃、6%CO2培养箱内进行培养。S2缺铁诱导：收集猪肾细胞对数期细胞，调整细胞悬液浓度104个/ml，每孔加入2mL；在37℃、6%CO2培养箱内进行培养；至细胞单层铺满孔底加入缺铁诱导剂进行孵育，其中，去铁胺的浓度为：125μM。在猪肾细胞的基础培养液中加入去铁胺孵育48小时，得到猪肾细胞缺铁模型。本专利技术得到的猪肾细胞缺铁模型的肾细胞抑制率为0～15%；猪肾细胞缺铁模型的铁含量为100～180μg/dL。实施例3一种猪肾细胞缺铁模型的建立方法，包括以下步骤：S1猪肾细胞培养：选用原代的猪肾细胞，以DMEM含血清培养液为基础培养液，在37℃、6%CO2培养箱内进行培养。S2缺铁诱导：收集猪肾细胞对数期细胞，调整细胞悬液浓度104个/ml，每孔加入3ml；在37℃、6%CO2培养箱内进行培养；至细胞单层铺满孔底加入缺铁诱导剂进行孵育，其中，去铁胺的浓度为：100μM。在猪肾细胞的基础培养液中加入去铁胺孵育24小时，得到猪肾细胞缺铁模型。本专利技术得到的猪肾细胞缺铁模型的肾细胞抑制率为0～15%；猪肾细胞缺铁模型的铁含量为100～180μg/dL。猪肾细胞缺铁模型的细胞形态S1猪肾细胞培养：选用原代的猪肾细胞（由本实验室细胞库提供），以DMEM含血清培养液（10%胎牛血清）为基础培养液，在36～37℃、4～6%CO2培养箱内进行培养。S2缺铁诱导：在猪肾细胞的基础培养液中加入缺铁诱导剂，致使猪肾细胞产生缺铁应激，得到猪肾细胞缺铁模型。具体方法为：收集猪肾细胞对数期细胞，调整细胞悬液浓度104个/ml，每孔加入2.5ml；在36～37℃、4～6%CO2培养箱内进行培养；至细胞单层铺满孔底加入缺铁诱导剂去铁胺（DFO）；设置7个实验组，每组重复5次。在这7个实验组的基础培养液中分别加入0μM、25μM、50μM、75μM、100μM、125μM、150μMDFO致使细胞产生缺铁应激。再于0h、12h、24h、48h、56h、64h、72h观察细胞状态变化，其中显微镜放大倍数为100倍。可以看到正常猪肾细胞呈现多角形，如图1所示；去铁胺DFO处理细胞形态变长，如图2所示。不同去铁铵浓度对猪肾细胞的抑制率的影响实验步骤S1猪肾细胞培养：选用原代的猪肾细胞（由本实验室细胞库提供），以DMEM含血清培养液（10%胎牛血清）为基础培养液，在36～37℃、4～6%CO2培养箱内进行培养。步骤S2缺铁诱导：收集猪肾细胞对数期细胞，调整细胞悬液浓度104个/ml，每孔加入2.5ml；在36～37℃、4～6%CO2培养箱内进行培养；至细胞单层铺满孔底加入缺铁诱导剂去铁胺（DFO）；设置7个实验组，每组重复5次。在这7个实验组的基础培养液中分别加入0μM、25μM、50μM、75μM、100μM、125μM、150μMDFO致使细胞产生缺铁应激。孵育24h后进行肾细胞抑制率检测。检测方法：采用MTT法，收集汇合的细胞，于每孔中加入20μlMTT溶液（5mg/ml，即0.5%MTT），继续培养4h，吸去孔内培养液。每孔加入150μl二甲基亚砜，置摇床上低速振荡10min。在酶联免疫检测仪OD490nm处测量各孔的吸光值。结果如图3所示，随DFO浓度增加，肾细胞抑制率升高，浓度过大会对肾细胞产生毒性；DFO的时用浓度为75～125μM，优选100μM。此时，猪肾细胞的抑制率较低，活性较强。不同去铁铵浓度对猪肾细胞铁含量的影响步骤S1猪肾细胞培养：选用原代的猪肾细胞（由本实验室细胞库提供），以DMEM含血清培养液（10%胎牛血清）为基础培养液，在36～37℃、4～6%CO2培养箱内进行培养。步骤S2缺铁诱导中本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种猪肾细胞缺铁模型的建立方法，其特征在于，包括以下步骤 ：S1猪肾细胞培养 ；S2缺铁诱导：缺铁诱导剂，致使猪肾细胞产生缺铁应激，得到猪肾细胞缺铁模型。

【技术特征摘要】
1.一种猪肾细胞缺铁模型的建立方法，其特征在于，包括以下步骤：S1猪肾细胞培养；S2缺铁诱导：缺铁诱导剂，致使猪肾细胞产生缺铁应激，得到猪肾细胞缺铁模型。2.根据权利要求1所述的一种猪肾细胞缺铁模型的建立方法，其特征在于，所述缺铁诱导剂为去铁胺。3.根据权利要求2所述的一种猪肾细胞缺铁模型的建立方法，其特征在于，所述步骤S2缺铁诱导的具体方法为：在猪肾细胞的基础培养液中加入去铁胺溶液孵育12～48小时，得到猪肾细胞缺铁模型；所述去铁胺溶液的浓度为：75～125μM。4.根据权利要求3所述的一种猪肾细胞缺铁模型的建立方法，其特征在于，所述步骤S2缺铁诱导的具体方法为：收集猪肾细胞对数期细胞，调整细胞悬液浓度104个/ml，每孔加入2～3ml；在36～37℃、4～6%CO2培养箱内进行培养；至细胞单层铺满孔底加入去铁胺溶液孵育12～...

【专利技术属性】
技术研发人员：李美荃，郭荣富，张春勇，陈克嶙，安清聪，
申请(专利权)人：云南农业大学，
类型：发明
国别省市：云南,53