一种羧甲基壳聚糖包覆的南极磷虾油纳米脂质体及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种羧甲基壳聚糖包覆的南极磷虾油纳米脂质体，它是以南极磷虾油为原料，将其加入PBS或醋酸缓冲液中，采用高压均质法制得南极磷虾油纳米脂质体，再采用滴定法将南极磷虾油纳米脂质体滴入羧甲基壳聚糖溶液中制得羧甲基壳聚糖包覆南极磷虾油纳米脂质体。本发明专利技术还公开了羧甲基壳聚糖包覆的南极磷虾油纳米脂质体的制备方法。本发明专利技术脂质体形态规则、粒径较小且均一、包封率较高。采用过氧化值法、硫代巴比脱酸法、pH法、浊度测定法分析脂质体在贮藏过程中的氧化稳定性，表明包覆羧甲基壳聚糖能显著降低POV值、TBARS值，较好地抑制pH值降低和浊度升高，很好地保护南极磷虾油纳米脂质体，显著提高其氧化稳定性和贮藏性能。

A kind of carboxymethyl chitosan coated euphausiasuperba oil nano liposome and its preparing method

The invention discloses an Antarctic krill lipid nano carboxymethyl chitosan coated body, which is based on the Antarctic krill oil as raw material, adding PBS or acetic acid buffer solution, to the Antarctic krill oil nano liposome by high-pressure homogenization method, then the titration of Antarctic krill oil will drop into the CMC nano liposome chitosan solution prepared carboxymethyl chitosan coated liposomes of Antarctic krill oil. The invention also discloses a preparation method of Antarctic krill oil liposomes coated by Carboxymethyl chitosan. The liposome has the advantages of regular morphology, small particle size and high encapsulation efficiency of Qie Junyi. The peroxide value and acid removal method, Bobby phosphorothioate pH method, turbidimetric method analysis of oxidative stability of liposomes during storage, showed that coated carboxymethyl chitosan can significantly reduce the POV value, TBARS value, restrain the decrease of pH value and turbidity increase, good protection of the Antarctic krill oil liposomes obviously, improve the oxidation stability and storage performance.

【技术实现步骤摘要】
一种羧甲基壳聚糖包覆的南极磷虾油纳米脂质体及其制备方法
本专利技术属于制备纳米脂质体的
，具体涉及一种羧甲基壳聚糖包覆的南极磷虾油纳米脂质体及其制备方法。
技术介绍
ω-3多不饱和脂肪酸(ω-3PUFA)是对身体健康至关重要的一类脂肪酸，具有抗炎症作用、降低胆固醇水平、预防动脉粥样硬化等功能，但其在人体内不能正常合成，因而被认为是体内的必需脂肪酸，只能从食物中摄取。ω-3PUFA主要分布在鱼类及海洋生物中。鱼油作为保健食品在90年代风靡起来，在如今全球渔业资源衰退的背景下，鱼类的捕捞有所限制，因此，为了满足不久的将来人们对ω-3PUFA的需求，新的ω-3PUFA来源亟需开发。2012年11月北欧海洋油脂会议指出南极磷虾是新型的ω-3PUFA来源。南极磷虾广泛分布于南极海域，是地球最大的单种生物资源之一。研究表明南极磷虾油中富含ω-3PUFA，且EPA和DHA含量在总脂肪酸中的比例高达29.67％。值得注意的是，南极磷虾油的PUFA是以磷脂型态结合ω-3(EPA、DHA)，且磷脂型PUFA的生物利用率(南极磷虾磷脂)比甘油三酯型PUFA(鱼油)高，因此，南极磷虾油因其富含磷脂备受关注。脂质体最早作为药物的载体，广泛应用在医药界。近几年来，脂质体因其良好的生物相容性，缓释性及靶向性，日益成为食品营养成分的新型理想载体。在制备食品级脂质体时，通常会在磷脂中添加其他的辅助剂如表面活性剂、吐温80和胆固醇进行复配，这样的体系其实是个复杂的混合体系。此外，考虑到脂质体中的磷脂易氧化，且结构不稳定等原因，容易在贮藏过程中发生一系列的物理化学变化、导致粒径增大、脂质体聚集等现象发生。因此，本领域有必要开发一种简单且贮藏性能好的新型纳米脂质体体系。
技术实现思路
本专利技术旨在提供一种以南极磷虾油和PBS或醋酸缓冲液制备出纳米脂质体，再采用滴定法制得羧甲基壳聚糖(CMCS)包覆的南极磷虾油纳米脂质体，形态规则、粒径较小且均一且包封率高，显著提高其氧化稳定性和贮藏性能。本专利技术的目的是通过以下技术方案实现的：一种羧甲基壳聚糖包覆的南极磷虾油纳米脂质体，它是在以南极磷虾油为原料制成的南极磷虾油纳米脂质体表面包覆羧甲基壳聚糖。本专利技术所述的羧甲基壳聚糖包覆的南极磷虾油纳米脂质体是通过以下方法制得的：以南极磷虾油为原料，将其加入PBS或醋酸缓冲液中，采用高压均质法制得南极磷虾油纳米脂质体，再采用滴定法将南极磷虾油纳米脂质体滴入羧甲基壳聚糖溶液中制得羧甲基壳聚糖包覆南极磷虾油纳米脂质体。所述的南极磷虾油和PBS或醋酸缓冲液的质量体积比为0.5-2g:100mL，优选为1g:100mL，专利技术人在试验中发现南极磷虾油用量较少时制备效果比较好，用量多了不能形成均一粒度的脂质体，南极磷虾油会析出来，呈膏状。所述的PBS缓冲液由以下方法制得：称取8gNaCl、0.2gKCl、1.44gNa2HPO4、0.24gKH2PO4，加去离子水800mL充分搅拌溶解，然后加入浓盐酸调pH至7.4，最后定容到1L，即得到PBS缓冲液。所述的醋酸缓冲液为浓度为10mM的醋酸缓冲液，由以下方法制得：吸取570μL醋酸，加入900mL去离子水，用氨水调整pH值到7.4，然后定容至1L，即得到10mM醋酸缓冲液。其中，所述的氨水浓度为13.3mol/L。使用PBS和醋酸缓冲液均能达到本专利技术要求的技术效果，调整两种缓冲液的pH值为7.4，能够提高制备和贮藏过程中脂质体的稳定性，确保脂质体的膜不被破坏，不会析出南极磷虾油。所述的南极磷虾油纳米脂质体和羧甲基壳聚糖溶液的体积比为1:1。所述的羧甲基壳聚糖溶液的浓度为0.1～1％(w/v)，优选为0.1％或0.4％。所述的羧甲基壳聚糖溶液通过将羧甲基壳聚糖溶于PBS或10mM醋酸缓冲液中制得。羧甲基壳聚糖(CMCS)是壳聚糖改性后的衍生物，它的水溶性比壳聚糖好。本专利技术的另一个目的是提供一种羧甲基壳聚糖包覆的南极磷虾油纳米脂质体的制备方法，包括：以南极磷虾油为原料，将南极磷虾油加入PBS或醋酸缓冲液中，采用高压均质法制得南极磷虾油纳米脂质体，再采用滴定法将南极磷虾油纳米脂质体滴入羧甲基壳聚糖溶液中制得羧甲基壳聚糖包覆南极磷虾油纳米脂质体。具体步骤如下：(1)、分别配制PBS或醋酸缓冲液、羧甲基壳聚糖溶液；(2)、取南极磷虾油和PBS或醋酸缓冲液，使用乳化分散机，在转速15000-23000rpm下剪切2-5分钟；然后使用高压均质机均质2-5次，得到均匀的粉白色悬浊液，得到南极磷虾油纳米脂质体；(3)、取等体积步骤(2)制得的南极磷虾油纳米脂质体和羧甲基壳聚糖溶液，按照滴速1-3d/s(滴/秒)将南极磷虾油纳米脂质体滴入羧甲基壳聚糖溶液中，边滴加边搅拌；滴加结束后，继续搅拌1-3h，制得羧甲基壳聚糖包覆的南极磷虾油纳米脂质体。步骤(2)中，南极磷虾油和PBS或醋酸缓冲液的质量体积比0.5-2g:100mL，优选为1g:100mL。高压均质机的压力为9000psi。作为优选的技术方案为：取南极磷虾油和PBS或醋酸缓冲液，使用乳化分散机，在转速为21000rpm下剪切4分钟；然后使用高压均质机，在压力为9000psi下均质3次，均质到南极磷虾油与缓冲液充分融合，呈牛奶状，没有多余的南极磷虾油存在。步骤(3)中，作为优选的技术方案为：取等体积步骤(2)制得的南极磷虾油纳米脂质体和羧甲基壳聚糖溶液，在温度20-25℃下，按照滴速为1d/s将南极磷虾油纳米脂质体滴入羧甲基壳聚糖溶液中，边滴加边搅拌羧甲基壳聚糖溶液，确保搅拌均匀；滴加结束后，继续搅拌2h，制得羧甲基壳聚糖包覆的南极磷虾油纳米脂质体。搅拌的转速为200-400r/min，优选为300r/min。可以根据样品量的大小，调整转速，确保搅拌均匀，确保羧甲基壳聚糖与脂质体充分接触，完成包覆。本专利技术的有益效果：1、本专利技术以新型来源—南极磷虾油作为研究材料，南极磷虾油因自身含有丰富的磷脂、少量的甘油二酯、胆固醇和游离脂肪酸，这些表面活性脂质的天然组合(如磷脂、胆固醇等)可以自乳化形成水包油型乳状液，在不需要添加其他辅助物的情况下，只用到南极磷虾油和PBS或醋酸缓冲液就能制备出纳米脂质体。CMCS具有水溶性好，形成溶液透明度高、安全无毒的特点，采用滴定法制备CMCS包覆的南极磷虾油纳米脂质体，形态规则、粒径较小且均一且包封率较高，包封率可高达88.23％。2、考察脂质体在冷藏温度4℃下贮藏36天，POV值、TBARS值、pH和浊度的变化，与传统南极磷虾油纳米脂质体比较，CMCS包覆的南极磷虾油纳米脂质体能显著降低POV值、TBARS值，显著抑制pH值降低和浊度升高，可以显著提高其氧化稳定性和贮藏性能，保护南极磷虾油纳米脂质体。附图说明图1为对比例1脂质体粒径分布图；图2为实施例1脂质体粒径分布图；图3为实施例4脂质体粒径分布图；图4为脂质体的透射电镜图，(A)为对比例1，(B)为实施例1，(C)为实施例4；图5为不同浓度CMCS包覆的南极磷虾油纳米脂质体在贮藏过程中的POV值的变化分析图；图6为不同浓度CMCS包覆的南极磷虾油纳米脂质体在贮藏过程中的TBARS值的变化分析图；图7为不同浓度CMCS包覆的南极磷虾油纳米脂质体在贮藏过程中的pH的变化分析图；图8为不同浓度CMCS包本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种羧甲基壳聚糖包覆的南极磷虾油纳米脂质体，其特征在于它是在以南极磷虾油为原料制成的南极磷虾油纳米脂质体表面包覆羧甲基壳聚糖。

【技术特征摘要】
1.一种羧甲基壳聚糖包覆的南极磷虾油纳米脂质体，其特征在于它是在以南极磷虾油为原料制成的南极磷虾油纳米脂质体表面包覆羧甲基壳聚糖。2.根据权利要求1所述的羧甲基壳聚糖包覆的南极磷虾油纳米脂质体，其特征在于所述的脂质体是通过以下方法制得的：以南极磷虾油为原料，将其加入PBS或醋酸缓冲液中，采用高压均质法制得南极磷虾油纳米脂质体，再采用滴定法将南极磷虾油纳米脂质体滴入羧甲基壳聚糖溶液中制得羧甲基壳聚糖包覆南极磷虾油纳米脂质体。3.根据权利要求2所述的羧甲基壳聚糖包覆的南极磷虾油纳米脂质体，其特征在于所述的南极磷虾油和PBS或醋酸缓冲液的质量体积比为0.5-2g:100mL，优选为1g:100mL。4.根据权利要求2所述的羧甲基壳聚糖包覆的南极磷虾油纳米脂质体，其特征在于所述的醋酸缓冲液为浓度为10mM的醋酸缓冲液。5.根据权利要求2所述的羧甲基壳聚糖包覆的南极磷虾油纳米脂质体，其特征在于所述的南极磷虾油纳米脂质体和羧甲基壳聚糖溶液的体积比为1:1。6.根据权利要求1所述的羧甲基壳聚糖包覆的南极磷虾油纳米脂质体，其特征在于所述的羧甲基壳聚糖溶液的浓度为0.1～1％(w/v)，优选为0.1％或0.4％。7.权利要求1所述的羧甲基壳聚糖包覆的南极磷虾油纳米脂质体的制备方法，其特征在于包括：以南极磷虾油为原料，将南极磷...

【专利技术属性】
技术研发人员：周莉，曾晓雄，
申请(专利权)人：南京农业大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32