通过微阵列分析鉴定的甘蓝型油菜种子特异性启动子制造技术

提供了利用获自甘蓝型油菜的基因调控元件在植物细胞和/或植物组织中表达转基因的构建体和方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】通过微阵列分析鉴定的甘蓝型油菜种子特异性启动子优先权声明本申请要求2015年1月6日提交的主题为“BRASSICANAPUSSEEDSPECIFICPROMOTERSIDENTIFIEDBYMICROARRAYANALYSIS”的美国临时专利申请系列号62/100,394的申请日的利益，将此专利完整并入本文。专利
本专利技术一般而言涉及植物分子生物学领域，更具体地说，涉及转基因在植物中的表达领域。背景许多植物物种能够被转基因转化，以引入农艺学上期望的性状或特征。得到的转基因植物物种被开发和/或修饰为具有特定的期望性状。通常，期望的性状包括例如，提高营养价值质量，增加产量，赋予抗虫性或抗病性，增加干旱和胁迫耐受性，提高园艺质量(例如，着色和生长)，赋予除草剂耐受性，使得能够从植物生产在工业上有用的化合物和/或材料，和/或使得能够生产药物。通过植物转化技术来生产包含叠加在单个基因组基因座处的多个转基因的转基因植物物种。植物转化技术的结果是，转基因被导入植物细胞中，回收在植物基因组中含有转基因的稳定整合拷贝的能育转基因植物、并且后续通过植物基因组的转录和翻译而表达转基因，从而生成具有期望性状和表型的转基因植物。然而期望有这样的机制，能够产生高表达被构建为性状堆叠(traitstack)的多个转基因的转基因植物物种。同样，期望有这样的机制，能够在植物的特定组织或器官内表达转基因。例如，可以借助土传病原体，用病原体抗性基因转化植物基因组，使得病原体抗性蛋白在植物根内强表达，从而增加植物对感染的抵抗力。或者，可以在处于特定的生长或发育阶段(例如细胞分裂或伸长)的植物组织中表达转基因。此外，可以在植物的叶和茎组织中表达转基因。本文中描述了甘蓝型油菜ACCOX基因启动子调控元件、含有甘蓝型油菜ACCOX基因启动子调控元件的构建体/载体、以及利用甘蓝型油菜ACCOX基因启动子调控元件的方法。概要本文公开了用于在植物细胞和/或植物组织中表达转基因的序列、构建体和方法。在一个实施方案中，本公开涉及包含与转基因可操作连接的启动子的基因表达盒，其中该启动子包含在严格条件下与这样的多核苷酸探针杂交的多核苷酸，该多核苷酸探针包含与SEQIDNO:1的互补物的至少90％序列同一性。在进一步的实施方案中，该启动子包含与SEQIDNO:1具有至少90％序列同一性的多核苷酸。在另外的实施方案中，启动子包含含有内含子的多核苷酸。在其他实施方案中，所述内含子与水稻肌动蛋白内含子、玉米泛素内含子或拟南芥泛素10内含子具有至少90％序列同一性。在一个实施方案中，启动子包含含有5′非翻译区的多核苷酸。在其他实施方案中，所述可操作连接的转基因编码多肽或小RNA。在后续的实施方案中，所述转基因选自下组：杀虫抗性转基因、除草剂耐受性转基因、氮利用效率转基因、水分利用效率转基因、营养品质转基因、DNA结合转基因、和选择标志物转基因。在又另一个实施方案中，所述基因表达盒进一步包含3′-非翻译区。在一个实施方案中，该3′-非翻译区包含与SEQIDNO:2具有至少90％序列同一性的多核苷酸。在一个实施方案中，重组载体包含所述基因表达盒。在实施方案的一个另外的方面，该重组载体选自下组：质粒、粘粒、细菌人工染色体、病毒、和噬菌体。在一个实施方案中，转基因细胞包含所述基因表达盒。在该实施方案的一个后续的方面，该细胞是转基因植物细胞。在一个实施方案中，转基因植物包含所述转基因植物细胞。在该实施方案的一个另外的方面，该转基因植物是单子叶植物或双子叶植物。在该实施方案的其他方面，该双子叶植物选自下组：拟南芥属植物、烟草植物、大豆植物、卡诺拉植物和棉花植物。在一个实施方案中，从转基因植物获得转基因种子。在一个后续的实施方案中，该启动子是组织优先启动子。在一个另外的实施方案中，该组织优先启动子是胚珠或种子组织优先启动子。在一个实施方案中，该种子组织优先启动子是胚乳组织优先启动子。在又另一个实施方案中，启动子包含SEQIDNO:1的核苷酸1-1483的多核苷酸序列。在一个实施方案中，本公开涉及包含在严格条件下与多核苷酸探针杂交的合成多核苷酸的转基因细胞，所述多核苷酸探针包含SEQIDNO:1的互补物的至少90％序列同一性。在一个另外的实施方案中，该合成多核苷酸与SEQIDNO:1具有至少90％序列同一性。在另外的实施方案中，合成多核苷酸包括含有内含子的多核苷酸。在其他实施方案中，所述内含子与水稻肌动蛋白内含子、玉米泛素内含子或拟南芥泛素10内含子具有至少90％序列同一性。在一个实施方案中，该合成多核苷酸包含5′非翻译区。在一个另外的实施方案中，该转基因细胞是转基因植物细胞。在后续的实施方案中，该转基因植物细胞是通过植物转化方法产生的。在一个另外的实施方案中，植物转化方法选自下组：土壤杆菌介导的转化法、生物射弹转化法、碳化硅转化法、原生质体转化法、和脂质体转化法。在一个实施方案中，转基因植物包含所述转基因植物细胞。在一个另外的实施方案中，该转基因植物是单子叶植物或双子叶植物。在其他实施方案中，该单子叶植物选自下组：玉米植物、水稻植物、和小麦植物。在该实施方案的其他方面，该双子叶植物选自下组：拟南芥属植物、烟草植物、大豆植物、卡诺拉植物和棉花植物。在一个实施方案中，从转基因植物获得转基因种子。在一个另外的实施方案中，该启动子是组织优先启动子。在一个另外的实施方案中，该组织优先启动子是胚珠或种子组织优先启动子。在一个实施方案中，该种子组织优先启动子是胚乳组织优先启动子。在另一个实施方案中，该合成多核苷酸包含SEQIDNO:1的核苷酸1-1483的多核苷酸序列。在一个实施方案中，本公开涉及纯化的多核苷酸启动子，其中该启动子包含在严格条件下与这样的多核苷酸探针杂交的多核苷酸，所述多核苷酸探针包含SEQIDNO:1的互补物的至少90％序列同一性。在进一步的实施方案中，所述纯化的多核苷酸启动子与SEQIDNO:1具有至少90％序列同一性。在另外的实施方案中，所述纯化的多核苷酸启动子包含含有内含子的多核苷酸。在其他实施方案中，所述内含子与水稻肌动蛋白内含子、玉米泛素内含子或拟南芥泛素10内含子具有至少90％同一性。在一个实施方案中，所述纯化的多核苷酸启动子包含5′非翻译区。在另一个实施方案中，该纯化的多核苷酸与转基因可操作连接。在后续的实施方案中，所述可操作连接的转基因编码多肽或者是小RNA。在一个实施方案中，基因表达盒包含与转基因可操作连接的纯化的多核苷酸序列，其与3′-非翻译区可操作连接。在一个实施方案中，该3′-非翻译区包含与SEQIDNO:2具有至少90％序列同一性的多核苷酸。在另一个实施方案中，所述转基因选自下组：杀虫抗性转基因、除草剂耐受性转基因、氮利用效率转基因、水分利用效率转基因、营养品质转基因、DNA结合转基因、和选择标志物转基因。在一个实施方案中，重组载体包含所述基因表达盒。在另外的实施方案中，重组载体选自下组：质粒载体、粘粒载体和BAC载体。在一个实施方案中，转基因细胞包含所述基因表达盒。在一个后续的实施方案中，该转基因细胞是转基因植物细胞。在一个实施方案中，转基因植物包含所述转基因植物细胞。在一个另外的实施方案中，该转基因植物是单子叶或双子叶植物。在又另外的本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种基因表达盒，其包含与转基因可操作连接的启动子，其中该启动子包含在严格条件下与多核苷酸探针杂交的多核苷酸，所述多核苷酸探针包含SEQ ID NO:1的互补物的至少90％的序列同一性。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.01.06 US 62/100,3941.一种基因表达盒，其包含与转基因可操作连接的启动子，其中该启动子包含在严格条件下与多核苷酸探针杂交的多核苷酸，所述多核苷酸探针包含SEQIDNO:1的互补物的至少90％的序列同一性。2.权利要求1的基因表达盒，其中该多核苷酸与SEQIDNO:1具有至少90％序列同一性。3.权利要求1的基因表达盒，其中该多核苷酸包含内含子。4.权利要求3的基因表达盒，其中该内含子与选自下组的内含子具有至少90％的序列同一性：水稻肌动蛋白内含子、玉米泛素内含子、和拟南芥(Arabadiopsisthaliana)泛素10内含子。5.权利要求1的基因表达盒，其中该多核苷酸包含5′-非翻译区。6.权利要求1的基因表达盒，其中该可操作连接的转基因编码多肽或小RNA。7.权利要求1的基因表达盒，其中该转基因选自下组：杀虫抗性转基因、除草剂耐受性转基因、氮利用效率转基因、水分利用效率转基因、营养品质转基因、DNA结合转基因、和选择标志物转基因。8.权利要求1的基因表达盒，其进一步包含3′非翻译区。9.权利要求8的基因表达盒，其中该3′非翻译区与SEQIDNO:2具有至少90％序列同一性。10.一种重组载体，其包含权利要求1的基因表达盒。11.权利要求10的重组载体，其中该载体选自下组：质粒、粘粒、细菌人工染色体、病毒、和噬菌体。12.一种转基因细胞，其包含权利要求1的基因表达盒。13.权利要求12的转基因细胞，其中该转基因细胞是转基因植物细胞。14.一种转基因植物，其包含权利要求13的转基因植物细胞。15.权利要求14的转基因植物，其中该转基因植物是单子叶植物或双子叶植物。16.权利要求15的转基因植物，其中该双子叶植物选自下组：拟南芥属(Arabidopsis)植物、烟草植物、大豆植物、卡诺拉植物、和棉花植物。17.一种转基因种子，其来自权利要求14的转基因植物。18.权利要求1的基因表达盒，其中所述启动子是组织优先启动子。19.权利要求1的基因表达盒，其中所述组织优先启动子是胚珠或种子组织优先启动子。20.权利要求1的基因表达盒，其中该启动子包含SEQIDNO:1的核苷酸1-1483的多核苷酸序列。21.一种转基因细胞，其包含在严格条件下与多核苷酸探针杂交的合成多核苷酸，所述多核苷酸探针包含与SEQIDNO:1的互补物的至少90％的序列同一性。22.权利要求21的转基因细胞，其中该合成多核苷酸与SEQIDNO:1具有至少90％序列同一性。23.权利要求21的转基因细胞，其中该合成多核苷酸包含内含子。24.权利要求21的转基因细胞，其中该内含子与选自下组的内含子具有至少90％的序列同一性：水稻肌动蛋白内含子、玉米泛素内含子、和拟南芥泛素10内含子。25.权利要求21的转基因细胞，其中该合成多核苷酸包含5′非翻译区。26.权利要求21的转基因细胞，其中该转基因细胞是转基因植物细胞。27.权利要求26的转基因细胞，其中该转基因植物细胞是通过植物转化方法产生的。28.权利要求27的转基因细胞，其中该植物转化方法选自下组：土壤杆菌介导的转化法、生物射弹转化法、碳化硅转化法、原生质体转化法、和脂质体转化法。29.一种转基因植物，其包含权利要求26的转基因植物细胞。30.权利要求29的转基因植物，其中该转基因植物是单子叶植物或双子叶植物。31.权利要求30的转基因植物，其中该双子叶植物选自下组：拟南芥属植物、烟草植物、大豆植物、卡诺拉植物和棉花植物。32.一种转基因种子，其来自权利要求29的转基因植物。33.权利要求21的转基因细胞，其中该启动子是组织优先启动子。34.权利要求21的转基因细胞，其中该组织优先启动子是胚珠或种子组织优先启动子。35.权利要求21的转基因细胞，其中该合成多核苷酸包含SEQIDNO:1的核苷酸1-1483的多核苷酸序列。36.一种纯化的多核苷酸序列，其中该纯化的多核苷酸序列包含在严格条件下与下述多核苷酸探针杂交的多核苷酸，该多核苷酸探针包含与SEQIDNO:1的互补物的至少90％的序列同一性。37.权利要求36的纯化的多核苷酸序列，其中该纯化的多核苷酸与SEQIDNO:1具有至少90％序列同一性。38.权利要求36的纯化的多核苷酸序列，其中该纯化的多核苷酸包含内含子。39.权利要求36的纯化的多核苷酸序列，其中该内含子与选自下组的内含子具有至少90％的序列同一性：水稻肌动蛋白内含子、玉米泛素内含子、和拟南芥泛素10内含子。40.权利要求36的纯化的多核苷酸序列，其中该纯化的多核苷酸包含5′非翻译区。41.权利要求36的纯化的多核苷酸序列，其中该纯化的多核苷酸序列与转基因可操作连接。42.权利要求41的可操作连接的转基因，其中该可操作连接的转基因编码多肽或为小RNA。43.一种基因表达盒，其包含权利要求41的与转基因可操作连接的纯化的多核苷酸序列，该序列与3′-非翻译区可操作连接。44.权利要求43的基因表达盒，其中该3′非翻译区与SEQIDNO:2具有至少90％序列同一性。45.权利要求43的基因表达盒，其中该转基因选自下组：杀虫抗性转基因、除草剂耐受性转基因、氮利用效率转基因、水分利用效率转基因、营养品质转基因、DNA结合转基因、和选择标志物转基因。46.一种重组载体，其包含权利要求43的基因表达盒。47.权利要求46的重组载体，其中该载体选自下组：质粒载体、粘粒载体、和BAC载体。48.一种转基因细胞，其包含权利要求43的基因表达盒。49.权利要求48的转基因细胞，其中该转基因细胞是转基因植物细胞。50.一种转基因植物，其包含权利要求49的转基因植物细胞。51.权利要求50的转基因植物，其中该转基因植物是单子叶植物或双子叶植物。52.权利要求51的转基因植物，其中该双子叶植物选自下组：拟南芥属植物、烟草植物、大豆植物、卡诺拉植物、和棉花植物。53.一种转基因种子，其来自权利要求50的转基因植物。54.权利要求36的纯化的多核苷酸序列，其中该纯化的多核苷酸序列促进转基因的组织优先表达。55.权利要求54的纯化的多核苷酸序列，其中该纯化的多核苷酸序列促进转基因的胚珠或种子组织优先表达。56.权利要求36的纯化的多核苷酸序列，其中该纯化的多核苷酸序列包含SEQIDNO:1的核苷酸1-1483的多核苷酸序列。57.一种在转基因植物中表达异源编码序列的方法，该方法包括：用基因表达盒转化植物细胞，所述基因表达盒包含与异源编码序列可操作连接的多核苷酸序列，所述多核苷酸序列包含与SEQIDNO:1的至少90％序列同一性，所述异源编码序列与3′-非翻译区可操作连接；分离包含该基因表达盒的经...

【专利技术属性】
技术研发人员：H·J·巴特勒，S·A·贝文，C·M·拉森，W·莫斯卡尔，D·O·冈萨雷斯，
申请(专利权)人：美国陶氏益农公司，
类型：发明
国别省市：美国,US