检测Ⅰ群禽腺病毒抗体的间接ELISA试剂盒及其检测方法及其应用技术

本发明专利技术公开了一种检测Ⅰ群禽腺病毒抗体的间接ELISA试剂盒及其检测方法及其应用，涉及生物检测技术领域。本发明专利技术的ELISA试剂盒包括：包被酶标板、洗涤液、稀释液、底物显色液、兔抗鸡酶标二抗、终止液、FAVⅠ标准阳性血清和FAVⅠ标准阴性血清；其中，所述包被酶标板是以Ⅰ群禽腺病毒FAVⅠ的重组六邻体蛋白作为包被抗原。本发明专利技术的ELISA试剂盒用于检测Ⅰ群禽腺病毒的抗体，具有高效、灵敏特异性和重复性均良好的优点，且该试剂盒操作简便、快速和成本低廉，适用于临床应用及推广。

【技术实现步骤摘要】
检测Ⅰ群禽腺病毒抗体的间接ELISA试剂盒及其检测方法及其应用
本专利技术涉及生物检测
，尤其涉及一种检测Ⅰ群禽腺病毒抗体的间接ELISA试剂盒及其检测方法及其应用。
技术介绍
禽腺病毒(Fowladenovirus，FAV)是一种无囊膜的双链DNA病毒，可分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ三群，Ⅰ群禽腺病毒(fowladenovirusgroupI，FAVⅠ)具有共同的群抗原，该群病毒代表株为鸡胚致死孤儿病毒(ChickenEmbroLethalOrphanVirus,CELOV)。2015年6月以来，我国多数省份的鸡群爆发安卡拉病(Angraradisease)，病原为Ⅰ群FAV中C种FAV-4型，主要以病禽突然倒地，出现呼吸道症状、神经症状、包涵体肝炎、心包积液综合征和砂囊糜烂为特征。该病主要发生于3周龄的肉鸡，发病1周左右为死亡高峰，死亡率可达20％～80％，给养殖生产造成巨大经济损失。目前，该病仍在我国鸡群中流行。目前对于FAVⅠ传统的实验室诊断方法均存在一定缺陷，如病毒的分离鉴定、中和试验、琼脂扩散试验等方法费时耗力，结果不够精确，PCR、LAMP等对试剂和设备要求较高且不便对大量样品本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测Ⅰ群禽腺病毒抗体的间接ELISA试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：包被酶标板、洗涤液、血清稀释液、底物显色液、兔抗鸡酶标二抗、终止液、FAVⅠ标准阳性血清和FAVⅠ标准阴性血清；其中，所述包被酶标板是以Ⅰ群禽腺病毒FAVⅠ的重组六邻体蛋白作为包被抗原。

【技术特征摘要】
1.一种检测Ⅰ群禽腺病毒抗体的间接ELISA试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：包被酶标板、洗涤液、血清稀释液、底物显色液、兔抗鸡酶标二抗、终止液、FAVⅠ标准阳性血清和FAVⅠ标准阴性血清；其中，所述包被酶标板是以Ⅰ群禽腺病毒FAVⅠ的重组六邻体蛋白作为包被抗原。2.根据权利要求1所述的检测Ⅰ群禽腺病毒抗体的间接ELISA试剂盒，其特征在于，所述Ⅰ群禽腺病毒FAVⅠ的重组六邻体蛋白的核苷酸序列表为SEQ.ID.No.1。3.根据权利要求1所述的检测Ⅰ群禽腺病毒抗体的间接ELISA试剂盒，其特征在于,所述Ⅰ群禽腺病毒FAVⅠ的重组六邻体蛋白的制备方法包括：设计合成引物，以Ⅰ群禽腺病毒FAVⅠ代表株鸡胚致死孤儿病毒基因组为模板，通过PCR扩增得到六邻体蛋白的扩增产物，所述扩增产物连接其表达载体并同时进行双酶切,然后连接，构建重组质粒；将挑选的阳性重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞，获得阳性重组质粒单克隆菌，所述阳性重组质粒单克隆菌在IPTG诱导下进行蛋白表达得到诱导产物，所述诱导产物依次经裂解沉淀、纯化及六阶段梯度复性后得到重组六邻体蛋白；其中，所述合成引物为：上游引物：5'-CGCGGATCCATGACTGCGCTTACTCCCGA-3'，下游引物：5'-CCGCTCGAGCCGCTCGAGCGCCAGCATGTACTGGTAAC-3'。4.根据权利要求1所述的检测Ⅰ群禽腺病毒抗体的间接ELISA试剂盒，其特征在于,所述洗涤液为含0.05％吐温-20的磷酸盐缓冲液，pH为7.4。5.根据权利要求1所述的检测Ⅰ群禽腺病毒抗体的间接ELISA试剂盒，其特征在于,所述血清稀释液为含50g/L脱脂奶粉的磷酸盐缓冲液；所述底物显色液为过氧化...

【专利技术属性】
技术研发人员：张曼，杨书会，
申请(专利权)人：杨凌职业技术学院，兴平市众和现代生态农牧有限公司，
类型：发明
国别省市：陕西,61