The invention relates to a method for extracting endophytic bacteria DNA from a plant root, and relates to a method for extracting bacterial DNA. The invention aims to solve the problem that the existing method for extracting the bacteria DNA from the root causes the contamination of the rhizosphere bacteria DNA to the bacterial DNA in the root of the plant itself, and the extraction time is long. Method: one, the root samples were placed in sterile centrifuge tube flushing; two, added to the SDS solution in the centrifuge tube washed, rinsed with sterile water; three, ethanol washing plant roots were rinsed with sterile water; four, the samples were transferred to clean surface sterilized mortar, cutting, grinding plant root samples; five, extraction of plant root samples of endophytic bacteria DNA. The method simplifies the extraction step, reduces the chance that the manual tedious process will cause pollution to the DNA, and eliminates the purification steps of the DNA, thereby improving the extraction efficiency, saving time and labor. The invention is used for extracting endophytic bacteria DNA from plant roots.
【技术实现步骤摘要】
一种提取植物根部内生细菌DNA的方法
本专利技术涉及一种细菌DNA的提取方法。
技术介绍
植物内生细菌是植物微生态系统的组成成分,具有促进植物生长和拮抗病原菌的作用。了解植物内生细菌多样性,对于探究不同寄主植物在不同生长环境下的内生细菌群落结构差异和发现功能菌株等具有重要意义。近年来快速发展的分子生物学技术已经成为研究植物内生细菌的重要手段,这些技术应用的前提是需要从土壤中提取出高质量的植物内生细菌DNA,以满足下游PCR、酶切和测序等操作的需求。现有对根部内生细菌DNA的提取,前处理主要是利用NaClO、酒精或无菌水清洗多次,然后就开始研磨,很容易使紧紧贴附在植物根部表面的微小土壤颗粒不能被彻底清洗,这样提取过程中来自土壤颗粒DNA也会被提取出来,造成根际细菌DNA对植物本身根部内生细菌DNA的污染。另外,现有提取方法在清洗完根部组织后一般采用手动法提取和纯化,效率低,提取时间大约在3小时左右。
技术实现思路
本专利技术是要解决现有对根部内生细菌DNA的提取方法容易造成根际细菌DNA对植物本身根部内生细菌DNA的污染,以及提取时间长的问题,提供一种提取植物根部内生细菌DNA的方法。本专利技术提取植物根部内生细菌DNA的方法,包括以下步骤:一、将植物根部样品放入无菌离心管,手动颠倒离心管3~5次,以便使无菌水冲洗掉植物根部样品表面残留浮土,冲洗至植物体表面没有浮土残留;二、向装有植物根部样品的离心管中加入质量浓度0.04%~0.06%的SDS溶液,直至SDS溶液没过样品,手动颠倒离心管数次,弃去SDS溶液,再用无菌水冲洗数次,直至离心管内没有SDS溶液的泡沫留 ...
【技术保护点】
一种提取植物根部内生细菌DNA的方法,其特征在于该方法包括以下步骤:一、将植物根部样品放入无菌离心管,手动颠倒离心管3~5次,冲洗至植物体表面没有浮土残留;二、向装有植物根部样品的离心管中加入质量浓度0.04%~0.06%的SDS溶液,直至SDS溶液没过样品,手动颠倒离心管3~5次,弃去SDS溶液,再用无菌水冲洗3~5次,直至离心管内没有SDS溶液的泡沫留下;三、用体积浓度为70%~75%的乙醇溶液冲洗植物根部样品2~3次,再用无菌水冲洗2~3次;四、然后将表面冲洗干净的植物根部样品转移到灭菌研钵中,用灭菌剪刀将样品剪碎,充分研磨植物根部样品;五、然后使用Fast DNA SPIN Kit for Soil试剂盒提取植物根部样品中的内生细菌DNA。
【技术特征摘要】
1.一种提取植物根部内生细菌DNA的方法,其特征在于该方法包括以下步骤:一、将植物根部样品放入无菌离心管,手动颠倒离心管3~5次,冲洗至植物体表面没有浮土残留;二、向装有植物根部样品的离心管中加入质量浓度0.04%~0.06%的SDS溶液,直至SDS溶液没过样品,手动颠倒离心管3~5次,弃去SDS溶液,再用无菌水冲洗3~5次,直至离心管内没有SDS溶液的泡沫留下;三、用体积浓度为70%~75%的乙醇溶液冲洗植物根部样品2~3次,再用无菌水冲洗2~3次;四、然后将表面冲洗干净的植物根部样品转移到灭菌研钵中,用灭菌剪刀将样品剪碎,充分研磨植物根部样品;五、然后使用FastDNASPINKitforSoil试剂盒...
【专利技术属性】
技术研发人员:于镇华,王光华,金剑,刘俊杰,李彦生,叶海波,喻江,
申请(专利权)人:中国科学院东北地理与农业生态研究所,
类型:发明
国别省市:黑龙江,23
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