用于获得高产量重组蛋白表达的基于MGMT的方法技术

本发明专利技术涉及用于获得高产量重组蛋白表达的基于MGMT的方法。本发明专利技术公开了一种宿主细胞中蛋白生产的新型增强子。其公开了一种用于在这些细胞中表达重组蛋白的载体，包括编码a)分泌肽信号、b)6‑甲基鸟嘌呤‑DNA‑甲基转移酶(MGMT,EC 2.1.1.63)及其突变体或催化结构域、和c)重组蛋白的核苷酸序列。所述MGMT酶优选是所谓的SNAP蛋白。

MGMT based method for obtaining high yield recombinant protein expression

The present invention relates to MGMT based methods for obtaining high yield recombinant protein expression. The present invention discloses a novel enhancer for the production of proteins in a host cell. It discloses a carrier for recombinant protein expression in these cells, including encoding a) secreting peptide signal, b) 6 methylguanine DNA methyltransferase (MGMT, EC 2.1.1.63) and its mutant or catalytic domain, and C) the nucleotide sequence of the recombinant protein. The MGMT enzyme is preferably a so-called SNAP protein.

【技术实现步骤摘要】
用于获得高产量重组蛋白表达的基于MGMT的方法本申请是申请号201180065989.9，申请日为2011年12月9日，专利技术名称为“用于获得高产量重组蛋白表达的基于MGMT的方法”的中国专利申请的分案申请。
本专利技术涉及遗传工程和分子生物学领域。特别是，本专利技术涉及一种宿主细胞中蛋白生产的新型增强子。此外，本专利技术涉及含有编码所述增强子蛋白的DNA序列的载体，及其用于表达重组蛋白的用途，如工业用酶或药用蛋白，包括真核(例如，哺乳动物，如人)和病毒蛋白。
技术介绍
蛋白生产系统，其中在重组生物体或细胞中生产兴趣多肽或蛋白，是商业生物技术的主干。最早的系统，基于在宿主如大肠杆菌中的细菌表达，已加入了基于真核宿主的系统，特别是培养的哺乳动物细胞、培养的以及整个昆虫形式的昆虫细胞，和转基因哺乳动物如绵羊和山羊。原核细胞培养系统易于维护且操作便宜。然而，原核细胞不能进行真核蛋白的翻译后修饰。此外，许多蛋白不能正确折叠，需要特殊的程序使其重新折叠，这增加了生产成本。真核细胞培养系统已经描述了多种应用。例如，哺乳动物细胞能够进行翻译后修饰，且通常产生正确折叠的和可溶性蛋白。哺乳动物细胞系本文档来自技高网...

【技术保护点】
SEQ ID NO：2所示的6‑甲基鸟嘌呤‑DNA‑甲基转移酶突变体用于增强异源蛋白在感染有复制型或缺陷型载体的宿主细胞中的生产的用途。

【技术特征摘要】
2010.12.09 EP 10306389.7;2011.07.08 US 61/505,6941.SEQIDNO：2所示的6-甲基鸟嘌呤-DNA-甲基转移酶突变体用于增强异源蛋白在感染有复制型或缺陷型载体的宿主细胞中的生产的用途。2.根据权利要求1所述的用途，其中所述异源蛋白以回收的细胞培养上清的至少40mg/L或以上得以表达。3.根据权利要求1所述的用途，其中所述异源蛋白以融合多肽的形式表达，所述融合多肽至少包含：i)在所述宿主细胞中具有功能的肽分泌信号，ii)所述6-甲基鸟嘌呤-DNA-甲基转移酶突变体，以及iii)所述异源蛋白。4.根据权利要求1所述的用途，其中所述异源蛋白由载体所编码，所述载体包含在单一开放阅读框中编码的以下核苷酸序列，按照5'至3'的方向：a)在所述宿主细胞中具有功能的肽分泌信号，b)所述6-甲基鸟嘌呤-DNA-甲基转移酶突变体，以及c)所述异源蛋白。5.根据权利要求4所述的用途，其中所述开放阅读框可操作地与诱导型启动子结合，所述诱导型启动子在相同宿主细胞中与肽信号同样是有功能的。6.根据权利要求5所述的用途，其中所述分泌肽信号和所述诱导型启动子在果蝇S2细胞中是有功能的。7.根据权利要求1至6任一项所述的用途，其中所述异源蛋白是细菌免疫原性蛋白或病毒免疫原性蛋白。8.根据权利要求1至6任一项所述的用途，其中所述异源蛋白是细胞因子。9.根据权利要求1至6任一项所述的用途，其中所述异源蛋白是抗肿瘤蛋白。10.根据权利要求1至6任一项所述的用途，其中所述异源蛋白是抗原。11.根据权利要求1至6任一项所述的用途，其中所述异源蛋白是微生物多肽。12.根据权利要求1至6任一项所述的用途，其中所述异源蛋白是病毒多肽。13.根据权利要求1至6任一项所述的用途，其中所述异源蛋白是寄生虫多肽。14.根据权利要求1至6任一项所述的用途，其中所述异源蛋白是抗凝血剂。15.根据权利要求1至6任一项所述的用途，其中所述异源蛋白是激素。16.根据权利要求1至6任一项所述的用途，其中所述异源蛋白是治疗性酶。17.根据权利要求1至6任一项所述的用途，其中所述异源蛋白是单克隆抗体。18.根据权利要求1至6任一项所述的用途，其中所述异源蛋白是血液因子。19.根据权利要求1至6任一项所述的用途，其中所述异源蛋白是生长因子。20.根据权利要求7所述的用途，其中所述细菌免疫原性蛋白或病毒免疫原性蛋白选自：来自登革、日本脑炎、蜱传播脑炎、黄热、乌苏图、罗西奥、穆雷脑炎、威塞尔斯布朗、兹卡或西尼罗病毒的EDIII蛋白，来自裂谷热或托斯卡纳病毒的核蛋白N，来自基孔肯雅病毒的E2包膜蛋白的可溶形式，西尼罗病毒E包膜蛋白的可溶形式。21.根据权利要求10所述的用途，其中所述抗原是癌抗原。22.根据权利要求1至6任一项所述的用途，其中所述异源蛋白选自：IFN-α、颗粒酶M、FasL、SSX2、NERCMSL、hSULF2ΔTMD和CNTN4。23.根据权利要求1所述的用途，其中所述6-甲基鸟嘌呤-DNA-甲基转移酶突变体由SEQIDNO：1或SEQIDNO：47的DNA序列编码。24.根据权利要求4所述的用途，其中所述载体还编码至少一个肽切割位点。25.根据权利要求24所述的用途，其中所述至少一个肽切割位点位于6-甲基鸟嘌呤-DNA-甲基转移酶突变体和异源蛋白之间。26.根据权利要求4所述的用途，其中所述载体还编码标记。27.根据权利要求26所述的用途，其中所述标记位于异源蛋白的C端。28.根据权利要求26所述的用途，其中所述载体还编码间隔序列。29.根据权利要求28所述的用途，其中所述间隔序列位于所述6-甲基鸟嘌呤-DNA-甲基转移酶突变体和所述异源蛋白之间，和/或所述异源蛋白和所述标记之间。30.根据权利要求1所述的用途，其中所述异源蛋白由载体所编码，所述载体包含在单一开放阅读框中编码的以下核苷酸序列，按照5'至3'的方向：-肽BiP昆虫信号，-SEQIDNO：2所示的SNAP蛋白，-权利要求22所定义的所述异源蛋白，-肠激酶肽切割位点，-多聚组氨酸标记，和-两条具有氨基酸序列甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸-丝氨酸的间隔序列。31.根据权利要求1所述的用途，其中所述异源蛋白由载体所编码，所述载体包含在单一开放阅读框中编码的以下核苷酸序列，按照5'至3'的方向：-BiP样肽信号，-SEQIDNO：2所示的SNAP蛋白，-权利要求22所定义的所述异源蛋白，-proTEV肽切割位点，-多聚组氨酸标记，和-两条具有氨基酸序列甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸-丝氨酸的间隔序列。32.根据权利要求1所述的用途，其中所述异源蛋白由载体所编码，所述载体包含在单一开放阅读框中编码的以下核苷酸序列，按照5'至3'的方向：a)BiP样肽信号，b)SEQ...

【专利技术属性】
技术研发人员：P·德普雷斯，S·波卢斯，E·克吕布莱特，
申请(专利权)人：巴斯德研究所，
类型：发明
国别省市：法国,FR