一种胰高血糖素卵黄抗体的制备方法技术
Preparation method of glucagon egg yolk antibody
The invention relates to the technical field of immunology, and discloses a preparation method of glucagon egg yolk antibody. The preparation method of the invention using carbon two imine method of glucagon was conjugated with bovine serum protein, immune antigen; immune antigen to immunize laying hens, egg yolk antibody obtained from extraction, egg yolk antibody extracts; yolk antibody will crude extracts were purified by glucagon yolk purified antibody. The present invention by glucagon and bovine serum protein coupled to form antigen and antigen antibody immune optimization, extraction, antibody purification process, to obtain high titer antibody, the amount of glucagon yolk antibody.
【技术实现步骤摘要】
一种胰高血糖素卵黄抗体的制备方法
本专利技术涉及免疫学
，具体涉及一种胰高血糖素卵黄抗体的制备方法。
技术介绍
胰高血糖素(升糖素)是一种由胰脏胰岛α-细胞分泌的激素，是由29个氨基酸组成直链多肽，分子量为3485道尔顿。胰高血糖素是一种促进分解代谢的激素，它具有很强的促进糖原分解和糖异生作用，使血糖明显升高，1mol/L的激素可使3×106mol/L的葡萄糖迅速从糖原分解出来。胰高血糖素还可激活脂肪酶，促进脂肪分解，同时又能加强脂肪酸氧化，使酮体生成增多。胰高血糖素分泌过多会使血糖浓度增大，所以2型糖尿病的发生与发展中不仅是胰岛素功能和分泌异常所致，胰高血糖素也在发挥重要作用，而且也可能是糖尿病发病的一个独立因素。胰高血糖素异常升高是导致2型糖尿病患者血糖偏高的重要因素，检测胰高血糖素水平有助于临床准确判断糖尿病患者病情。目前已知检测胰高血糖素的方法主要是放射性免疫法(RIA)，也有报道采用胰高血糖素单抗依据免疫学原理进行检测的方法，如专利CN105116140A。卵黄抗体是近年来受到广大关注的一个方向，通过免疫母鸡得到免疫后的鸡蛋，从鸡蛋中提取抗体。单抗...
【技术保护点】
一种胰高血糖素卵黄抗体的制备方法，其特征在于，包括：步骤1、利用碳二亚胺法将胰高血糖素与牛血清蛋白进行偶联，得到免疫抗原；步骤2、将免疫抗原免疫产蛋鸡，取鸡蛋蛋黄提取抗体，获得卵黄抗体粗提物；步骤3、将卵黄抗体粗提物进行纯化，获得胰高血糖素卵黄抗体纯品。
【技术特征摘要】
1.一种胰高血糖素卵黄抗体的制备方法，其特征在于，包括：步骤1、利用碳二亚胺法将胰高血糖素与牛血清蛋白进行偶联，得到免疫抗原；步骤2、将免疫抗原免疫产蛋鸡，取鸡蛋蛋黄提取抗体，获得卵黄抗体粗提物；步骤3、将卵黄抗体粗提物进行纯化，获得胰高血糖素卵黄抗体纯品。2.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，步骤1为：称取胰高血糖素和N-羟基琥珀酰亚胺完全溶于DMF中，再加入DCC反应，反应液离心后收取上清液，将上清液滴加到溶有BSA的缓冲液中进行反应，然后将所得反应液透析，得到免疫抗原。3.根据权利要求2所述制备方法，其特征在于，步骤1为：称取0.1mmol胰高血糖素，0.15mmolN-羟基琥珀酰亚胺完全溶于1ml的DMF中，再加入0.12mmol的DCC，置于4℃下反应搅拌12小时或搅拌过夜；反应后将反应液10000r/min离心10min，离心后收取上清液，将上清液缓慢滴加到溶有2mmolBSA的PBS中，4℃下反应搅拌12小时或搅拌过夜；反应后将反应液放入透析袋中，在4℃条件下用磷酸缓冲盐溶液透析三天，每天换三次透析液，得到免疫抗原。4.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，步骤2为：步骤2.1、将免疫抗原免疫产蛋鸡；步骤2.2、取免疫鸡蛋蛋黄采用PEG6000三步提纯法进行粗提纯，获得卵黄抗体粗提物。5.根据权利要求4所述制备方法，其特征在于，...
【专利技术属性】
技术研发人员：赵肃清，夏娜娜，吕瑞，梁雨昕，陈莹珊，
申请(专利权)人：广东工业大学，
类型：发明
国别省市：广东,44
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