M‑CSF特异性单克隆抗体及其应用制造技术

本发明专利技术提供了基于RX1或RX‑1衍生的M‑CSF特异性抗体，以及包含这种抗体的药物组合物，含有药物组合物的药盒，和预防和治疗骨质溶解病患者的骨质损失的方法。

M CSF specific monoclonal antibody and its application

The present invention provides a RX1 or RX 1 derived M CSF specific antibody based, and pharmaceutical compositions containing such antibody, kits containing a pharmaceutical composition, and methods of prevention and treatment of patients with osteolytic disease of bone loss.

【技术实现步骤摘要】
M-CSF特异性单克隆抗体及其应用本申请要求2004年1月7日提交的美国临时申请号60/535,181和2004年6月2日提交的美国临时申请号60/576,417的优先权，将其各自全文纳入本文作为参考。
本专利技术涉及通过给予患者来预防和治疗骨质溶解、癌转移以及癌转移相关骨质损失的方法。专利技术背景癌转移是癌症病人手术后或治疗后复发的主要原因。尽管作了广泛努力来发展治疗方法，但癌转移基本上仍然很难治疗。骨骼是多种人类癌症(例如，乳腺癌、肺癌、前列腺癌和甲状腺癌)转移的最常见部位之一。溶骨性转移的发生因难以控制的疼痛、骨折高度敏感、神经压迫和高血钙症而引发严重的病症。尽管这些临床问题十分严重，但是几乎没有治疗癌转移相关骨质损失的治疗方法。破骨细胞介导骨质的重吸收(readsorption)。破骨细胞是由造血细胞分化而来的多核细胞。通常认为，破骨细胞是由骨髓中造血干细胞衍生的单核前体细胞融合形成的，而不是由不完全细胞分裂形成的(Chambers，BoneandMineralResearch,6：1-25，1989；等，ClinOrthopRelatR。120：201-228，1976；Kahn等，Nature258：325-327，1975，Suda等，EndoerRev13：66-80，1992；Walker，Science180:875,1973；Walker，Science190:785-787,1975；Walker,Science190:784-785,1975)。它们和单核细胞-巨噬细胞细胞系拥有共同的干细胞(Ash等，Nature283:669-670,1980,Kerby等,J.BoneMinverRes7:353-62,1992)。破骨前体细胞向成熟的多核破骨细胞分化需要各种不同因素，包括激素的和局部刺激(Athanasou等，BoneMiner3:317-333,1988；Feldman等，Endocrinology107:1137-1143，1980；Walker，Science190:784-785，1975；Zheng等,HistochemJ23:180-188,1991)，而且活的骨骼和骨细胞也被证实在破骨细胞的发育中起着重要作用(Hagenaars等，BoneMiner6:179-189,1989)。成骨细胞或骨髓基质细胞也是破骨细胞分化所需要的。这些细胞所产生的支持破骨细胞生成的因子之一是巨噬细胞集落刺激因子，M-CSF(Wiktor-Jedrzejczak等，ProcNatlAcadSciUSA87:4828-4832,1990；Yoshida等,Nature345:442-444,1990)。NF-κB配体的受体活化因子(RANKL,也称为TRANCE,ODF或OPGL)是另一种信号(Suda等，EndoerRev13:66-80,1992),通过该信号成骨细胞/基质细胞刺激破骨细胞生成和通过位于破骨细胞和破骨前体细胞上的受体——RANK(TRANCER)——进行再吸收(Lacey等,Cell93:165-176,1998；Tsuda等，BiochemBiophysResCo234:137-142,1997；Wong等，JExpMed186:2075-2080,1997；Wong等，JBiol.Chem272:25190-25194,1997；Yasuda等,Endocrinology139:1329-1337,1998；Yasuda等,ProcNatlAcadSciUS95:3579-3602,1998)。成骨细胞还分泌一种强烈抑制破骨细胞生成的蛋白，称为骨保护素(osteoprotegerin，OPG,也称为OCIF)，该蛋白作用是RANKL的假受体，因此抑制破骨细胞和成骨细胞之间通过RANK和RANKL传递的正向信号。破骨细胞负责溶解矿物质和有机骨基质(Blair等，JCellBiol102:1164-1172,1986)。破骨细胞代表终末分化细胞，表现出独特的极化形态，具有特殊化的细胞膜区域和几种细胞膜和胞质标记，例如耐酒石酸的酸性磷酸酶(TRAP)(Anderson等1997)，碳酸酐酶II(Vaananen等,Histochemistry78:481-485,1983),降钙素受体(Warshafsky等，Bone6:179-185,1985)和玻璃体结合蛋白受体(Davies等，JCellBiol109:1817-1826,1989)。多核破骨细胞通常含有不到10个细胞核，但它们可含有直径在10和100μm之间的多达100个细胞核(等,ClinOrthopRelatR120:201-228,1976)。这使它们在光学显微镜下较易鉴定。处于活跃状态时，这些细胞具有很多液泡，而且还含有许多线粒体，表明有很高的新陈代谢率(Mundy，骨代谢疾病和矿物代谢疾病的初级读本(PrimerontheMetabolicBoneDiseasesanddisordersofminealmetabolism),18-22页,1990)。因为破骨细胞在溶骨性骨质转移中起主要作用，所以该领域需要新的药物和方法来防止破骨细胞的激活和作用。因此，该领域仍需要鉴定用于防止或治疗骨质溶解或癌转移，包括溶骨性骨质转移的新药剂和方法。专利技术概述本专利技术的材料和方法填补了该领域先前提到的和其它相关的需求。在本专利技术的一个实施方式中，提供了能特异性结合于具有图4、14和15所列氨基酸序列的鼠单克隆抗体RX1、MC1或MC3中任一种相同的M-CSF表位的非鼠单克隆抗体，包括功能片段。在一相关实施方式中，提供上述抗体，所述抗体选自多克隆抗体；包括HumanEngineeredTM抗体的单克隆抗体；人源化抗体；人抗体；嵌合抗体；Fab，F(ab’)2；Fv；ScFv或SCA抗体片段；双抗体；直链抗体；或这些抗体中任何一种的突变蛋白，优选保留至少10-7、10-8或10-9或更高的结合亲和力。也考虑能与具有图4所列氨基酸序列的单克隆抗体RX1、MC1和/或MC3竞争结合M-CSF大于75％的非鼠单克隆抗体，包括功能片段。在另一实施方式中，提供了非鼠单克隆抗体，包括功能片段，其中所述非鼠单克隆抗体或其功能片段能结合包含图12氨基酸98-105中至少4、5、6、7或8个连续残基的M-CSF表位。在另一实施方式中，本专利技术提供非鼠单克隆抗体包括功能片段，其中所述非鼠单克隆抗体或其功能片段能结合包含图12氨基酸65-73或138-144中至少4、5、6、7或8个连续残基的M-CSF表位(对应于5H4或MC3识别的M-CSF表位)。在又一实施方式中，提供了能结合包含图12氨基酸98-105的M-CSF表位的上述抗体或片段。在一相关实施方式中，提供的上述抗体包含图4A的CDR3。在另一实施方式中，提供的抗体包含图4A所列鼠抗体RX1的至少1、2、3、4、5或6个CDR。包含鼠抗体RX1的至少1、2、3、4或5个CDR的这种抗体也可包含图16A-B所列抗体5H4的6个CDR的至少1、2、3、4或5个CDR。或者，包含鼠抗体RX1的至少1、2、3、4或5个CDR的抗体也可包含图16A-B所列抗体MC1的6个CDR的本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种非鼠抗体，该抗体与单克隆抗体RX1竞争与M‑CSF结合大于75％，其中所述单克隆抗体RX1包含SEQ ID NO：2和4分别所列的重链和轻链氨基酸序列。

【技术特征摘要】
2004.01.07 US 60/535,181;2004.06.02 US 60/576,4171.一种非鼠抗体，该抗体与单克隆抗体RX1竞争与M-CSF结合大于75％，其中所述单克隆抗体RX1包含SEQIDNO：2和4分别所列的重链和轻链氨基酸序列。2.如权利要求1所述的抗体，所述抗体能特异性结合与单克隆抗体RX1相同的M-CSF表位，其中所述单克隆抗体RX1包含SEQIDNO：2和4分别所列的重链和轻链氨基酸序列。3.如权利要求2所述的抗体，所述抗体结合的M-CSF表位包含SEQIDNO：120或121的至少4个连续残基。4.如权利要求2所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：C·刘，D·L·齐默尔曼，G·M·哈罗，K·科特斯，W·M·卡瓦诺，L·龙，M·考尔德伦卡西，A·H·霍维茨，
申请(专利权)人：诺华疫苗和诊断公司，爱克索马技术有限公司，
类型：发明
国别省市：美国,US