一种能够同时繁殖大豆孢囊线虫并进行大豆孢囊线虫抗性筛选方法技术

一种能够同时繁殖大豆孢囊线虫并进行大豆孢囊线虫抗性筛选方法，涉及一种大豆孢囊线虫抗性筛选方法。是要解决现有方法存在统计孢囊数目难度大，费时费力，雄虫难以获得，培养占用空间大的问题。方法：一、将双层滤纸置于培养袋内；二、向培养袋加入无菌水；三、将大豆幼苗的根部放入培养袋中，将培养袋竖直放入夹子内，将夹子悬挂在培养架上培养；四、取出培养袋，滴入大豆孢囊线虫二龄幼虫悬浮液培养；五、收集雄虫，将培养袋内的滤纸连同大豆的根系取出，统计孢囊数目。本方法直接观测孢囊线虫发育状态，快速收集干净的大豆孢囊线虫雄虫，统计孢囊数不需要水冲洗，孢囊清晰易于观察统计，结果平行性好。本发明专利技术用于进行大豆孢囊线虫抗性筛选。

A method for simultaneous screening of soybean cyst nematode and resistance to soybean cyst nematode

The invention discloses a screening method for soybean cyst nematode, which can simultaneously breed soybean cyst nematode, and relates to a screening method for soybean cyst nematode resistance. To solve the existing statistical cyst number is difficult, time-consuming, difficult to obtain male culture, occupies a large space problem. Methods: a double filter paper bag will be placed in culture; two, added to the sterile water bag culture; three, the soybean seedling roots into the culture bag, the culture bag into the clip clip in vertical, hanging in the frame of culture culture; four, remove the culture bag, drops into the two age of soybean cyst nematode larvae suspension culture; five, collect the male, cultivating bag paper with the root system of the soybean cyst number out statistics. The method of direct observation of cyst nematode development status, the rapid collection of clean soybean cyst nematode male, statistics of the number of cysts without water washing, cyst is clear and easy to be observed results of good parallelism. The invention is used for screening the resistance of soybean cyst nematode.

【技术实现步骤摘要】
一种能够同时繁殖大豆孢囊线虫并进行大豆孢囊线虫抗性筛选方法
本专利技术涉及一种大豆孢囊线虫抗性筛选方法。
技术介绍
大豆孢囊线虫(SoybeanCystNematode，SCN，HeteroderaglycinesIchinohe)是一种植物寄生线虫，主要寄生在豆科植物的根部，严重阻碍植株的生长，导致产量下降，造成巨大的经济损失。目前，选用大豆抗孢囊线虫品种是最经济有效的手段，而筛选大豆孢囊线虫抗病品种主要通过温室盆栽法，即普遍采用的塑料钵柱法和PVC管法，即将灭菌的沙和土按照体积比1:1比例混合后装入营养钵或PVC管，把1粒大豆种子种植在混合好的沙土中，萌发后，待子叶展开后接种大豆孢囊线虫二龄幼虫，接种21天后，用大量的清水轻柔的冲洗大豆的根部，将泥沙冲洗干净后统计根上孢囊数目。现有方法存在以下问题：1)、由于大豆是种植在沙土中，统计孢囊数需要用大量的水冲洗，且冲洗时需要格外小心避免孢囊掉落，但仍会有部分孢囊损失，需要大量劳动力，且操作时间长；2)、大豆根不易彻底冲洗干净，为统计孢囊数目增加难度，统计出来的孢囊数平行性差；3)、脱落在土中的雄虫难以获得；4)、群体遗传抗性研究需要进本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种能够同时繁殖大豆孢囊线虫并进行大豆孢囊线虫抗性筛选方法，其特征在于该方法包括以下步骤：一、首先将双层滤纸重叠放置于培养袋内，培养袋开口向上，滤纸上部与生长袋开口处高度一致；二、用移液器向培养袋加入无菌水9～11mL，使培养袋中的滤纸充分浸湿，且保证培养袋底部有无菌水存留；三、将大豆幼苗移到浸湿的滤纸上部，使幼苗的根部通过滤纸的空隙放入培养袋中，保持子叶高于培养袋的上边缘，然后将培养袋竖直放入夹子内，每个夹子中放置两个培养袋，然后将夹子悬挂在培养架上，再将整个培养架置于培养箱中，光照周期为：16h光照，8h黑暗，昼夜温度分别为24℃和22℃，每天向每个培养袋内浇无菌水3‑5mL，每三天向每个...

【技术特征摘要】
1.一种能够同时繁殖大豆孢囊线虫并进行大豆孢囊线虫抗性筛选方法，其特征在于该方法包括以下步骤：一、首先将双层滤纸重叠放置于培养袋内，培养袋开口向上，滤纸上部与生长袋开口处高度一致；二、用移液器向培养袋加入无菌水9～11mL，使培养袋中的滤纸充分浸湿，且保证培养袋底部有无菌水存留；三、将大豆幼苗移到浸湿的滤纸上部，使幼苗的根部通过滤纸的空隙放入培养袋中，保持子叶高于培养袋的上边缘，然后将培养袋竖直放入夹子内，每个夹子中放置两个培养袋，然后将夹子悬挂在培养架上，再将整个培养架置于培养箱中，光照周期为：16h光照，8h黑暗，昼夜温度分别为24℃和22℃，每天向每个培养袋内浇无菌水3-5mL，每三天向每个培养袋内浇5～6mL霍格兰氏营养液，每天保持培养袋底部有1～2mL的存水，滤纸保持湿润；四、植株继续生长5-7天，之后从夹子中取出培养袋，向大豆的主根和侧根周围均匀滴入3mL100条/mL的大豆孢囊线虫二龄幼虫悬浮液，然后将培养袋水平放置在培养箱中进行暗培养；24h后取出培养袋竖直放入培养架的夹子中，在培养箱中继续光照培养15～21天；其中暗培养的条件为：昼夜温度分别为24℃和22℃，湿度80％；光照培养的条件为：昼夜温度分别为24℃和22℃，湿度80％，光照周期：16h光照，8h黑暗，光照强度为18000LX；五、用无菌水在培养袋内冲洗根表面，然后将培养袋内的无菌水收集至灭菌的容器中，完成雄虫收集，在接种大豆孢囊线虫21天后，将培养袋内的滤纸连同大豆的整个根系取出，剪去地上部分，平铺在实验台上，进行孢囊数目统计，然后根据孢囊数目和感病对照品种的孢囊数目比较确定大豆孢囊线虫抗性品种，除去用于统计的孢囊数的样品，剩余的样品在接种大豆孢囊线虫40-45天收集成熟孢囊，用于后续的研究。2.根据权利要求1所述的一种能够同时繁殖大豆孢囊线虫并进行大豆孢囊线虫抗性筛选方法，其特征在于步骤一中所述滤纸的长为15～18cm，宽为12～14cm。3.根据权利要求1所述的一种能够同时繁殖大豆孢囊线虫并进行大豆孢囊线虫抗性筛选方法，其特征在于步骤一中所述培养袋的长为17～19cm，宽为16～18cm。4.根据权利要求1所述的一种能够同时繁殖大豆...

【专利技术属性】
技术研发人员：尤佳，王从丽，胡岩峰，李春杰，
申请(专利权)人：中国科学院东北地理与农业生态研究所，
类型：发明
国别省市：黑龙江,23