一种体外诱导扩增人抗原非特异性调节性T细胞的方法技术

本发明专利技术提供了一种体外诱导扩增人抗原非特异性调节性T细胞的方法，分离来源丰富的人外周血

Method for in vitro induction and amplification of non-specific regulatory T cell of human antigen

The present invention provides a method for in vitro induction and amplification of non-specific regulatory T cells of human antigens, and isolates the abundant peripheral blood of the human origin

【技术实现步骤摘要】
一种体外诱导扩增人抗原非特异性调节性T细胞的方法
本专利技术涉及生物医学
，特别涉及一种体外诱导扩增人抗原非特异性调节性T细胞的方法。
技术介绍
细胞、组织或器官移植是治疗器官严重功能障碍或终末期功能衰竭的主要方案，在绝大多数情况下，器官捐献者(供者)与接受移植者(受者)是遗传背景不同的个体，因此，不可避免会发生急、慢性免疫排斥反应，而这正是影响移植治疗效果最主要的原因。介导免疫排斥反应的主体是受者体内的效应细胞，它们识别外来移植物抗原后活化、增殖并分泌大量效应分子，直接和/或间接地导致移植物损伤，目前，需要使用免疫抑制药物来控制效应细胞的功能，但是，长期服用免疫抑制药物会带来机会性感染、恶性肿瘤、心血管疾病、神经毒性等毒副作用，而且难以阻止慢性排斥导致的移植物功能丧失。因此，医学工作者正努力寻找新的抑制排斥反应的方法，以替代这些化学药物。大量实验研究表明，一类具有免疫负性调节功能的细胞能有效抑制效应细胞的功能，其中最重要的是调节性T细胞(Treg)。获得足够数量Treg的方法主要分两类，一类是分离出天然存在于机体内的Treg，然后在体外扩增，由于天然Treg的数量极少，需要进本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种体外诱导扩增人抗原非特异性调节性T细胞的方法，其特征在于：步骤包括：S1、从人外周血中分离出外周血单个核细胞PBMC；S2、去除非CD4

【技术特征摘要】
1.一种体外诱导扩增人抗原非特异性调节性T细胞的方法，其特征在于：步骤包括：S1、从人外周血中分离出外周血单个核细胞PBMC；S2、去除非CD4+T细胞，再去除CD25+T细胞，从而得到CD4+CD25-CD45RA+T细胞；S3、将CD4+CD25-CD45RA+T细胞重悬于含5～10％AB型人血清或自体血清的AMI-VCTS培养基，计数细胞总量，加入1～4倍细胞数量的抗CD3/CD28磁珠或抗CD3/CD28抗体、和终浓度为500～2000U/ml的rhIL-2，刺激培养6～12天诱导结束，培养过程中每2～3天补加一次rhIL-2；S4、计数获得的活细胞量，取部分诱导后的T细胞进行表型和纯度的鉴定；S5、将剩余诱导后的T细胞重悬于含5～10％人血清的AMI-VCTS培养基，加入终浓度为50～300U/ml的rhIL-2，培养1～2天以静息诱导后的T细胞；分选活细胞后，取部分细胞进行混合淋巴细胞培养，其余细胞用含人血清白蛋白的生理盐水重悬。2.如权利要求1所述的体外诱导扩增人抗原非特异性调节性T细胞的方法，其特征在于：步骤S5所述混合淋巴细胞培养为：以步骤S1所述PBMC为反应细胞，以不同个体的灭活PBMC为刺激细胞或者将抗CD3/CD28抗体作为刺激源，进行混合淋巴细胞培养，在混合淋巴细胞培养体系中加入步骤S5所述分选的活细胞共同培养3～6天，通过流式细胞术检测反应细胞的增殖水平。3.如权利要求2所述的体外诱导扩增人抗原非特异性调节性T细胞的方法，其特...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈刚，王璐，
申请(专利权)人：华中科技大学同济医学院附属同济医院，武汉复衡生物医学技术开发有限公司，
类型：发明
国别省市：湖北,42