FVIII的位点定向修饰制造技术

本发明专利技术涉及FVIII的位点定向修饰，还涉及因子VIII突变蛋白，其在非N‑末端胺的预定位点共价结合到一个或多个生物相容的聚合物，如聚乙二醇上。突变蛋白缀合物保留了FVIII前凝血剂活性，且具有提高的药物代谢动力学性质。

Site directed modification of FVIII

Site directed modification of the present invention relates to FVIII, is also involved in factor VIII mutant protein, which binds to one or more biocompatible polymers in non covalent N amine end predetermined sites, such as polyethylene glycol. The mutant protein conjugate retains the FVIII pre coagulant activity and has enhanced pharmacokinetic properties.

【技术实现步骤摘要】
FVIII的位点定向修饰本申请是申请日为2005年11月14日、申请号为201310125428.4、专利技术名称为“FVIII的位点定向修饰”的PCT申请的分案申请。与相关申请的交叉参考本申请要求享有2004年11月12日提交的美国专利申请系列号60/627,277的优先权利益，其在这里整体引作参考。
本专利技术涉及因子VIII(FVIII)突变蛋白，其允许在确定的位点偶联一个或多个生物相容的聚合物如聚乙二醇。另外，提供了用于治疗目的的相关的制剂、其剂量及施用方法。这些修饰的FVIII变体和相关的组合物和方法用于给遭受血友病A的个体提供具有减少的注射频率和减少的免疫原性应答的治疗选择。
技术介绍
血友病A是最常见的遗传性凝结障碍，估计的发病率为1/5000男性。它的原因是FVIII的缺乏或结构缺陷，所述FVIII是血液凝结的固有途径中的关键组分。目前血友病A的治疗包含静脉内注射人FVIII。已经重组地生产了人FVIII，作为约300kD的单链分子。它由结构域A1-A2-B-A3-C1-C2组成(Thompson，2003，Semin.Hematol.29，pp.11-22)。前体产本文档来自技高网...

【技术保护点】
具有因子VIII前凝血剂活性的缀合物，其包含在多肽上的一个或多个预定位点共价附着到一个或多个生物相容的聚合物的功能因子VIII多肽，其中所述预定位点不是N‑末端胺。

【技术特征摘要】
2004.11.12 US 60/6272771.具有因子VIII前凝血剂活性的缀合物，其包含在多肽上的一个或多个预定位点共价附着到一个或多个生物相容的聚合物的功能因子VIII多肽，其中所述预定位点不是N-末端胺。2.权利要求1的缀合物，其中所述生物相容的聚合物包含聚乙二醇。3.权利要求2的缀合物，其中所述聚乙二醇包含甲氧基聚乙二醇。4.权利要求3的缀合物，其中所述甲氧基聚乙二醇的大小范围为5kD-64kD。5.权利要求1的缀合物，其中所述生物相容的聚合物共价附着在功能因子VIII多肽的下述位置处或附近的氨基酸残基上：(a)因子VIII清除受体的结合位点，(b)能降解因子VIII的蛋白酶的结合位点，和/或(c)因子VIII抑制性抗体的结合位点。6.权利要求1的缀合物，其中所述生物相容的聚合物共价附着在功能因子VIII多肽的预定位点，从而使得低密度脂蛋白受体相关蛋白与多肽的结合小于与未缀合时的多肽的结合。7.权利要求6的缀合物，其中所述低密度脂蛋白受体相关蛋白与缀合物的结合不到与未缀合时的多肽的结合的1/2。8.权利要求1的缀合物，其中所述生物相容的聚合物共价附着在功能因子VIII多肽的预定位点，从而使得硫酸乙酰肝素蛋白聚糖与多肽的结合小于与未缀合时的多肽的结合。9.权利要求8的缀合物，其中所述硫酸肝素蛋白聚糖与缀合物的结合不到与未缀合时的多肽的结合的1/2。10.权利要求1的缀合物，其中所述生物相容的聚合物共价附着在功能因子VIII多肽的预定位点，从而使得因子VIII抑制性抗体与多肽的结合小于与未缀合时的多肽的结合。11.权利要求10的缀合物，其中所述因子VIII抑制性抗体与缀合物的结合不到与未缀合时的多肽的结合的1/2。12.权利要求1的缀合物，其中所述生物相容的聚合物共价附着在功能因子VIII多肽的预定位点，从而使得低密度脂蛋白受体与多肽的结合小于与未缀合时的多肽的结合。13.权利要求12的缀合物，其中所述低密度脂蛋白受体与缀合物的结合不到与未缀合时的多肽的结合的1/2。14.权利要求1的缀合物，其中所述生物相容的聚合物共价附着在功能因子VIII多肽的预定位点，从而使得血浆蛋白酶对多肽的降解小于对未缀合时的多肽的降解。15.权利要求14的缀合物，其中所述血浆蛋白酶对多肽的降解不到当多肽未缀合时在相同条件下经相同时间段测得的对多肽的降解的1/2。16.权利要求1的缀合物，其中所述生物相容的聚合物共价附着在多肽的因子VIII氨基酸位置81、129、377、378、468、487、491、504、556、570、711、1648、1795、1796、1803、1804、1808、1810、1864、1903、1911、2091、2118和2284之一处。17.权利要求1的缀合物，其中所述生物相容的聚合物共价附着在多肽的一个或多个因子VIII氨基酸位置377、378、468、491、504、556、1795、1796、1803、1804、1808、1810、1864、1903、1911和2284，且其中：(1)缀合物与低密度脂蛋白受体相关蛋白的结合小于未缀合的多肽与低密度脂蛋白受体相关蛋白的结合；(2)缀合物与低密度脂蛋白受体的结合小于未缀合的多肽与低密度脂蛋白受体的结合；或(3)缀合物与低密度脂蛋白受体相关蛋白和低密度脂蛋白受体的结合小于未缀合的多肽与低密度脂蛋白受体相关蛋白和低密度脂蛋白受体的结合。18.权利要求1的缀合物，其中所述生物相容的聚合物共价附着在多肽的一个或多个因子...

【专利技术属性】
技术研发人员：潘小群，JE墨菲，梅柏松，JS斯特劳斯，H坦德拉，陈建敏，T巴内特，唐亮，汪德潜，
申请(专利权)人：拜尔健康护理有限责任公司，
类型：发明
国别省市：美国,US