用于重组土壤杆菌基因缺陷菌株的方法和组合物技术

本公开提供了用于生产和使用相对于亲本菌株在RecA活性中有缺陷的根癌土壤杆菌菌株(例如LBA4404)的新组合物和方法。还公开了与根癌土壤杆菌的其他基因缺陷型菌株的组合。具体地，提供了两个示例性的recA减毒株：UIA777，其中氯霉素抗性基因破坏recA基因；和UIA770，其中卡那霉素抗性基因破坏recA基因。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于重组土壤杆菌基因缺陷菌株的方法和组合物相关申请的交叉引用本申请要求根据2015年9月4日提交的美国临时申请序列号62/045,947在35USC§119(e)下的权益，其全部内容通过引用并入本文。对电子提交的序列表的援引序列表的正式副本通过EFSWeb以电子方式提交，其为ASCII格式的序列表，名称为“76018_ST25.txt”，于2015年9月2日创建，大小为73.9千字节，并与本申请同时递交。包含在该ASCII格式化文档中的序列表是说明书的一部分，其全部内容通过引用并入本文。
技术介绍
土壤杆菌介导的植物转化导致T链整合在植物细胞的基因组内。T链含有基因表达盒，这些基因表达盒由被精确地设计为将启动子连接到感兴趣的基因和3'非翻译区(UTR)的基因调控元件组成。这些序列相对于彼此被精确地设计，以最佳地驱动目的基因的表达以产生蛋白质。基因调控元件的稳定性对于感兴趣的基因的最佳表达是至关重要的。包含在T链内的多核苷酸序列的些许修饰可能会减少乃至消除感兴趣的基因的表达。根癌土壤杆菌(LBA4404)菌株通常用于将T链整合到植物细胞的基因组内。参见：Ooms,G.,Hooykaas,P.本文档来自技高网...

【技术保护点】
根癌土壤杆菌的修饰菌株，其中所述修饰的菌株相对于其亲本菌株在遗传重组途径中有缺陷。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.09.04 US 62/045,9471.根癌土壤杆菌的修饰菌株，其中所述修饰的菌株相对于其亲本菌株在遗传重组途径中有缺陷。2.权利要求1的修饰菌株，其中所述菌株在至少一种选自下组的重组途径中有缺陷：RecA，RecB，RecD，RecF，RecG，RecJ，RecN，RecO，RecQ，RecR和RecX。3.权利要求2的修饰菌株，其中所述菌株在RecA活性中有缺陷。4.权利要求2的修饰菌株，其中所述recA基因包含与SEQIDNO:10或11具有至少85％序列同一性的多核苷酸序列。5.权利要求3的修饰菌株，其中所述菌株还在选自下组的活性中有缺陷：RecB，RecD，RecF，RecG，RecJ，RecN，RecO，RecQ，RecR和RecX。6.权利要求3的修饰菌株，其中基因组recA基因通过该recA基因中的序列的缺失、重排或插入而被修饰。7.权利要求3的修饰菌株，其中基因组recA基因通过缺失包含该recA基因的基因组序列而被修饰。8.权利要求3的修饰菌株，其中基因组recA基因通过在该recA基因内插入序列而被修饰，从而破坏RecA蛋白的表达。9.权利要求8的修饰菌株，其中插入的序列包含选择标志物基因。10.权利要求9的修饰菌株，其中所述选择标志物包含抗生素抗性基因，所述抗生素抗性基因选自下组：氯霉素抗性基因，卡那霉素抗性基因，壮观霉素抗性基因，庆大霉素抗性，或其组合。11.权利要求3的修饰菌株，其中在从该菌株制备的提取物中检测不到RecA活性。12.权利要求3的修饰菌株，其中使用Western印迹分析检测不到RecA蛋白。13.权利要求3的修饰菌株，其中使用Northern印迹分析检测不到RecAmRNA。14.权利要求3的修饰菌株，其中使用Southern印迹分析检测不到recA基因。15.权利要求4的修饰菌株，其中所述recA基因编码SEQIDNO:的蛋白质。16.权利要求1的修饰菌株，其中所述菌株包含Ti质粒。17.权利要求16的修饰菌株，其中所述Ti质粒包含pAL4404Ti质粒，或衍生自pAL4404Ti质粒。18.权利要求1的修饰菌株，其中所述菌株包含二元质粒。19.权利要求18的修饰菌株，其中所述二元质粒包含农艺性状的基因，所述农艺性状选自下组：杀虫抗性性状、除草剂耐受性状、氮利用效率性状、水分利用效率性状、营养品质性状、DNA结合性状、选择标志物性状、及其组合。20.权利要求1的修饰菌株，其中所述菌株包含三元质粒。21.权利要求1的修饰菌株，其中所述亲本菌株是根癌土壤杆菌(LBA4404)。22.一种包含来自根癌土壤杆菌的经修饰的recA基因的质粒，其中所述recA基因在修饰前与SEQIDNO:10或11具有至少85％序列同一性，并且所述经修...

【专利技术属性】
技术研发人员：M·古普塔，S·班尼特，S·库马尔，D·默洛，N·萨尔德赛，
申请(专利权)人：美国陶氏益农公司，
类型：发明
国别省市：美国,US