流式细胞术检测鸡外周血T淋巴细胞亚群的方法技术

本发明专利技术公开了一种流式细胞术检测鸡外周血T淋巴细胞亚群的方法，包括以下步骤：取鸡外周静脉血，制备抗凝血，用淋巴细胞分离液处理获得外周血白细胞；用PBS液对所述外周血白细胞离心洗涤后，制备单细胞悬液；吸取所述单细胞悬液，分别加入抗鸡CD3、CD4、CD8单克隆抗体，旋涡混匀，于4℃避光染色；染色后，用PBS液洗涤并重悬细胞，使用流式细胞仪进行检测；分析检测结果，获得鸡外周血T淋巴细胞亚群比例。本发明专利技术流式细胞术检测鸡外周血T淋巴细胞亚群的方法，针对样本前处理、检测时电压和荧光补偿的调节、结果分析时的处理方式的不同造成检测结果波动大、不稳定的问题，建立了一种稳定规范的鸡外周血T淋巴细胞亚群的检测方法。

【技术实现步骤摘要】
流式细胞术检测鸡外周血T淋巴细胞亚群的方法
本专利技术属于细胞检测
，具体地说，涉及一种流式细胞术检测鸡外周血T淋巴细胞亚群的方法。
技术介绍
流式细胞术(FlowCytometry，FCM)是一种对单个细胞表面或细胞内化学成分进行定量分析和分选的新技术。FCM主要通过采集前向散射光(FSC)和侧向散射光(SSC)将细胞大小和细胞内粒度不同的细胞分开。并通过识别细胞表面和细胞内特异的荧光标记，实现对DNA、RNA、细胞因子、细胞表面抗原等的检测。该技术作为一种快速细胞分析技术，不仅应用于免疫学、微生物学等基础医学研究，更广泛应用于肿瘤学、血液学等临床检测。流式细胞术可以通过识别细胞表面特异的免疫荧光信号，来实现T淋巴细胞亚群的检测，有助于评价机体的细胞免疫功能。此外，还可以应用流式细胞术来评价单克隆抗体的特异性，在单克隆抗体制备中选出最优的标记信号(例如在检测鸡外周血T淋巴细胞时，PE标记比FITC标记的CD3有更广的检测范围)。在临床和科学研究中发现，样本前处理、检测时电压和荧光补偿的调节、结果分析时的处理方式在一定程度上都会影响检测结果，造成检测值波动范围大、检测结果不稳定本文档来自技高网...

【技术保护点】
流式细胞术检测鸡外周血T淋巴细胞亚群的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1，取鸡外周静脉血，制备抗凝血，用淋巴细胞分离液处理获得外周血白细胞；步骤2，用PBS液对所述外周血白细胞离心洗涤后，制备单细胞悬液；步骤3，吸取所述单细胞悬液，分别加入抗鸡CD3、CD4、CD8单克隆抗体，旋涡混匀，于4℃避光染色，作为检测管；同时准备好阴性设置管；步骤4，染色后，用PBS液洗涤并重悬细胞，使用流式细胞仪进行检测；步骤5，分析检测结果，获得鸡外周血T淋巴细胞亚群比例。

【技术特征摘要】
1.流式细胞术检测鸡外周血T淋巴细胞亚群的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1，取鸡外周静脉血，制备抗凝血，用淋巴细胞分离液处理获得外周血白细胞；步骤2，用PBS液对所述外周血白细胞离心洗涤后，制备单细胞悬液；步骤3，吸取所述单细胞悬液，分别加入抗鸡CD3、CD4、CD8单克隆抗体，旋涡混匀，于4℃避光染色，作为检测管；同时准备好阴性设置管；步骤4，染色后，用PBS液洗涤并重悬细胞，使用流式细胞仪进行检测；步骤5，分析检测结果，获得鸡外周血T淋巴细胞亚群比例。2.如权利要求1所述的流式细胞术检测鸡外周血T淋巴细胞亚群的方法，其特征在于，所述用淋巴细胞分离液处理获得外周血白细胞，具体为：于流式管中按照体积比1:1先后添加淋巴细胞分离液和抗凝血，保证抗凝血与淋巴细胞分离液分界清晰，离心分离后获得外周血白细胞。3.如权利要求2所述的流式细胞术检测鸡外周血T淋巴细胞亚群的方法，其特征在于，所述离心分离的转速为2500r/min，时间为15min。4.如权利要求1所述的流式细胞术检测鸡外周血T淋巴细胞亚群的方法，其特征在于，所述制备单细胞悬液具体为：将外周血白细胞用预冷的PBS液洗涤后重悬，调整为细胞浓度1×106-1×107个/mL的单细胞悬液，于4℃保存备用。5.如权利要求1所述的流式细胞术检测鸡外周血T淋巴细胞亚群的方法，其特征在于，所述染色的时间为...

【专利技术属性】
技术研发人员：彭西，张泽钧，袁施彬，吴邦元，
申请(专利权)人：西华师范大学，
类型：发明
国别省市：四川,51