重组制备的因子VIII的新型保护组合物制造技术

本发明专利技术提供一种无组氨酸的组合物，所述组合物包括：高纯度因子VIII(r‑因子VIII)；精氨酸和/或蔗糖；防止或至少抑制因子VIII的表面吸附的表面活性剂；用于因子VIII的特定稳定化的一定量的氯化钙。

A novel protective composition of recombinant factor VIII

The present invention provides a composition without histidine, the composition comprises: high purity factor VIII (R factor VIII); arginine and / or sucrose; surface active agent to prevent or at least an inhibitor of VIII adsorbed on the surface; for a certain amount of specific stabilizing factor VIII of calcium chloride.

【技术实现步骤摘要】
重组制备的因子VIII的新型保护组合物(本申请是申请日为2009年9月3日、申请号为200980134370.1(国际申请号为PCT/EP2009/061402)的专利技术申请的分案申请。)
本专利技术涉及具有保护高纯度重组制备的因子VIII(r-因子VIII)能力的冷冻干燥的制剂。本专利技术还涉及在冷冻干燥之前的以及在将冷冻干燥的固体制剂复溶(reconstitution)至可注射液体之后的r-因子VIII的液体制剂。
技术介绍
因子VIII是与血液凝固过程有关的重要血浆蛋白质。这一凝固因子的缺乏导致血友病A，血友病A是一种必须通过因子VIII替代疗法来治疗的威胁生命的疾病。通常，提纯的血浆源性因子VIII(p-因子VIII)的浓缩物已经被用于替代疗法。最近，已经可以获得重组制备的因子VIII(r-因子VIII)，其提供不依赖血浆捐献的补充，降低了病毒传播性疾病的风险。因子VIII是复杂的分子，并且是与活性随时间降低有关的非常敏感的蛋白质。在血液中，其他血液蛋白质如人类血清白蛋白(HSA)和冯维勒布兰德因子(vonWillebrandfactor，vWF)协助维持因子VIII的凝固活性。然而，由于病毒传播风险的原因，期望避免在r-因子VIII的药物制剂中存在通过血浆提纯获得的蛋白质。因此，提供其他药学可接受赋形剂的组合物以保护r-因子VIII防止引起活性降低的物理和化学降解以及聚集是必要的。为防止在长期存储期间蛋白质活性降低所通常采用的技术是通过冻干法(冷冻干燥)制备干燥的固体药物制剂。在制药工艺期间、在长期存储期间以及在冷冻干燥的制剂被复溶至施用的溶液之后，药物赋形剂也必须保护因子VIII。因子VIII的DNA序列被分为6个结构域；3个A结构域、2个C结构域和1个B结构域，并且这种蛋白质含有针对其他凝血因子、vWF、磷脂和金属离子的相互作用位点。因子VIII蛋白质的最小活性形式缺少B结构域并且由与90kDa的重链结合的80kDa的轻链构成(WangW.等,2003)。目前市场上有全长r-因子VIII药物产品(Bayer公司的CSLBehring公司的Baxter公司的和Baxter公司的和B结构域剔除r-因子VIII药物产品(Wyeth公司的和Wyeth公司的)。在因子VIII的药物制剂中，所有组分都需要仔细地选择。每种赋形剂都提供保护功能从而在制药工艺、长期存储以及最终复溶和对患者施用过程中保持因子VIII的高收率。另外，考虑所有赋形剂的临床安全。冻干法的目的(Manning,M.C.等,1989,Tang,X.等,2004,Schwegman,J.J.等,2005)在于将水从制剂中去除，因为在水相中经常发生不利的物理和化学反应。在冷冻干燥过程中以及在存储期间需要冷冻/冻干保护剂从而通过在蛋白质周围形成无定形基体来保护蛋白质。加入膨胀剂(bulkingagent)作为块体形成剂(cakeformer)从而在冷冻干燥期间提供机械支撑并且增加药物产品的干重量。因此膨胀剂有助于提供冷冻干燥产品的均匀质量和外观。可以加入缓冲剂以将pH保持在对于蛋白质而言以及对于产品的治疗用途而言合适的值。由于因子VIII的高效力的原因，因子VIII在治疗溶液中的浓度低。另外，因子VIII易于吸附到表面，这使得表面吸附成为在制造期间以及在产品复溶之后活性降低的主要原因。对于目前市售的因子VIII产品而言，通常要求在其临界胶束浓度(cmc)以上使用表面活性剂，所述临界胶束浓度是表面活性剂形成胶束聚集体的溶液浓度。含有聚氧乙烯的非离子洗涤剂(detergent)的cmc值是温度依赖性的，因为在较低的温度下cmc值变得更高(Alexandridis,P.等,1994,Nilsson,M.等,2007)。泊洛沙姆188(Poloxamer188)的cmc在37℃下为至少20-30mg/ml(Kabanov,A.V.等,1995,Alexandridis,P.等,1994,Moghimi,S.M.等,2004)并且在20℃下升高至100mg/ml(Nakashima,K.等,1994)。因此，根据这些报道，在25℃下泊洛沙姆188的cmc在20-100mg/ml的范围内。已经表明金属离子与因子VIII的轻链和重链的结合有关(WangW等,2003)，因此在因子VIII的制剂中通常存在钙离子(Ca2+)以保持80kDa链和90kDa链的复合体的结合。已经做出了大量的努力来寻找因子VIII的合适的制剂，例如：等(1997)的出版物描述了一种制剂，其包含用作膨胀剂的氯化钠，以及表面活性剂、氯化钙和用作稳定剂的蔗糖以及用作缓冲剂的组氨酸。US-B-7247707(Besman等)公开了无白蛋白的制剂，其包含300至500mM氯化钠、1％至4％的选自蔗糖、海藻糖、棉子糖和精氨酸的稳定剂、1至5mMCaCl2以及缓冲剂，所述缓冲剂优选为组氨酸。在组合物中还包括最多0.1％浓度的表面活性剂。US-A-5874408(Nayar)描述了重组因子VIII的制剂，其包含甘氨酸、组氨酸、蔗糖、CaCl2和少量的氯化钠。Nayar发现组氨酸在冷冻干燥的因子VIII制剂中具有去稳作用，目前在所有市售的r-因子VIII制剂中加入组氨酸作为缓冲剂。然而，通过加入盐、甘氨酸和蔗糖克服了这种效应。US-A-4877608(Lee等)描述了在水溶液中的高纯因子VIII蛋白质制剂的用途，所述制剂主要含有具有至少130IU/mg的活性的治疗活性因子VIII；0.4至1.2M氯化钠、氯化钾或其混合物；1.5至40mM氯化钙和1至50mM组氨酸以及任选地最多10％的选自甘露醇、蔗糖和麦芽糖的糖。US-A-2005/0256038(White等)教导了冷冻干燥的因子VIII组合物，其包含表面活性剂、氯化钙、蔗糖、氯化钠、柠檬酸三钠和没有氨基酸的缓冲剂。WO-A-99/10011(Kanellos等)公开了具有高纯度血浆因子VIII的热处理的制剂。所述制剂包含稳定有效量的蔗糖、海藻糖和至少一种氨基酸。所述氨基酸优选赖氨酸，但是其他可以使用的氨基酸为异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、甲硫氨酸、苯基丙氨酸、苏氨酸、色氨酸、缬氨酸、丙氨酸、精氨酸、组氨酸、脯氨酸、丝氨酸和甘氨酸。EP-A-1016673(等)教导了包含用作稳定剂的非离子表面活性剂和具有大于5000IU/mg比活性的因子VIII的制剂的用途。进而指出表面活性剂浓度应当在临界胶束浓度以上，为至少0.01mg/ml的量。US-B-6887852(Paik等)描述了冷冻干燥的因子VIII制剂，其包含用作稳定剂的L-精氨酸、L-异亮氨酸和L-谷氨酸的混合物。基本制剂包含少量的氯化钠、氯化钙和组氨酸。不向组合物中加入表面活性剂，因为所述制剂显示出比包含表面活性剂的制剂更好的稳定性。US-A-5565427(Freudenberg)教导了因子VIII的稳定溶液的用途，其包含洗涤剂和氨基酸或其一种盐。蛋白质的比活性为至少2000IU/mg。US-A-5328694(Schwinn)公开了稳定的可注射溶液，其包含从血浆中提纯的因子VIII以及二糖和一种或多种氨基酸的组合。优选地，所述氨基酸为赖氨酸或甘氨酸。
技术实现思路
本专利技术涉及高纯度的重组本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种无组氨酸的组合物，包括：高纯度因子VIII(r‑因子VIII)；精氨酸和/或蔗糖；防止或至少抑制因子VIII的表面吸附的表面活性剂；用于因子VIII的特定稳定化的一定量的氯化钙。

【技术特征摘要】
2008.09.03 EP 08163554.2;2008.09.03 US 61/136,4021.一种无组氨酸的组合物，包括：高纯度因子VIII(r-因子VIII)；精氨酸和/或蔗糖；防止或至少抑制因子VIII的表面吸附的表面活性剂；用于因子VIII的特定稳定化的一定量的氯化钙。2.如权利要求1所述的无组氨酸组合物，其中如果精氨酸和/或蔗糖用作冷冻/冻干保护剂而不用作膨胀剂，则加入氯化钠作为膨胀剂。3.如权利要求1所述的无组氨酸组合物，其中基本上不存在氯化钠，特别是在精氨酸用作冷冻/冻干保护剂和膨胀剂的情况下。4.如权利要求1至3中任一项所述的组合物，其中所述r-因子VIII为自然因子VIII的剔除衍生物，所述剔除衍生物部分或完全缺少自然因子VIII的B结构域。5.如权利要求1至4中任一项所述的组合物，所述组合物为冷冻干燥形式。6.如权利要求1至4中任一项所述的组合物，所述组合物为待冷冻干燥的溶液的形式或由冷冻干燥的组合物和稀释剂制备的复溶溶液的形式。7.如权利要求2和4至6中任一项所述的组合物，所述组合物包含用作冷冻/冻干保护剂的约3-15mg/ml的蔗糖和约3-15mg/ml的精氨酸以及用作膨胀剂的约10mg/ml至约40mg/ml的氯化钠，条件是至少存在6mg/ml的冷冻/冻干保护剂。8.如权利要求7所述的组合物，其中所述冷冻/冻干保护剂包括精氨酸和蔗糖二者，特别地包括约3mg/ml至约10mg/ml特别是约4.5mg/ml至约9mg/ml的蔗糖，约3mg/ml至...

【专利技术属性】
技术研发人员：布里塔·里普纳，约瑟芬·奥斯特伯格，乌尔里卡·尼尔松，埃尔莎·伊瓦尔松，艾琳·阿格奎斯特，
申请(专利权)人：奥克塔法马股份有限公司，
类型：发明
国别省市：瑞士,CH